Tricromático de Masson

COLORAÇÃO TRICROMÁTICA DE MASSON
FIXADOR: Formalina a 10%, neutra, tamponada. Fixador de Bouin.
SECÇÕES: Parafina, 6 micrômetros.
SOLUÇÕES
SOLUÇÃO FIXADORA DE BOUIN✝
Solução aquosa, saturada, de ácido pícrico [(NO2)3C6H2OH]❊....750 mililitros.
Formalina (37-40%) (HCHO)....................................................... 250 mililitros.
Ácido acético, glacial ......................................................................50 mililitros.
❊Solução saturada de ácido pícrico: 2 gramas de ácido pícrico em 100 mililitros de solução com água destilada.
✝BIOSSEGURANÇA: O ÁCIDO PÍCRICO (2,4,6-Trinitrofenol) é PERIGOSAMENTE REATIVO E
EXPLOSIVO. Evite abalos, choque, fagulhas, e o contato com calor, pele,
mucosas, roupa, e a inalação. Pode causar irritação e sensibilização. A solução de
formaldeído (formalina) é tóxica, inflamável, combustível e irritante para a pele e
as mucosas. Trabalhe em ambiente arejado, com exaustão. O ácido acético é
tóxico, corrosivo, combustível e inflamável. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato
com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. Mantenha longe
de fontes de calor.
SOLUÇÃO DE TRABALHO DE HEMATOXILINA FÉRRICA DE WEIGERT
Partes iguais das soluções estoques A e B: 100 mililitros de A + 100 mililitros de B.
Esta solução, de trabalho, é válida por até 2 meses.
• Solução estoque A:
Hematoxilina, cristais, (C.I.75290) ....................................... 1 grama.
Etanol, 95% .............................................até completar 100 mililitros.
• Solução estoque B✝:
Cloreto férrico (FeCl3), 29% .............................................. 4 mililitros.
Água destilada ................................................................. 95 mililitros.
Ácido clorídrico concentrado (HCl).................................... 1 mililitro.
✝ BIOSSEGURANÇA: O cloreto férrico (FeCl3) e o ácido clorídrico (HCl) são tóxicos e corrosivos. Evite
inalá-los, ingeri-los, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo,
além da roupa.
SOLUÇÃO DE FUCSINA ÁCIDA - BIEBRICH SCARLET
Biebrich Scarlet (C.I. 26905), solução aquosa a 1% .......... 90 mililitros.
Fucsina ácida (C.I. 42685), solução aquosa a 1% .............. 10 mililitros.
Ácido acético, glacial ............................................................. 1 mililitro.
SOLUÇÃO DE ÁCIDO FOSFOTÚNGSTICO - FOSFOMOLÍBDICO
Ácido fosfotúngstico [H3P(W3O10)4]✝ ...................................... 5 gramas.
Ácido fosfomolíbdico H3P(Mo3 O10)4✝ .................................... 5 gramas.
Água destilada ................................................até completar 200 mililitros.
✝ BIOSSEGURANÇA: O ácido fosfotúngstico e o ácido fosfomolíbdico são irritantes e corrosivos. Evite
inalá-los, degluti-los e o contato com a pele, mucosas, outras partes do corpo, e
com a roupa.
SOLUÇÃO DE AZUL DE ANILINA
Azul de anilina WS (C.I. 42755) ......................................... 2,5 gramas.
Ácido acético, glacial (CH3COOH) ✝................................ 2 mililitros.
Água destilada ............................................até completar 100 mililitros.
ou
SOLUÇÃO DE VERDE CLARO (LIGHT GREEN)
Light Green SF Yellow (C.I. 42095) ...................................... 5 gramas.
Água destilada ................................................................ 250 mililitros.
Ácido acético, glacial .......................................................... 2 mililitros.
SOLUÇÃO DE ÁCIDO ACÉTICO GLACIAL A 1%
Ácido acético glacial (CH3COOH)✝.................................1 mililitro.
Água destilada ................................................................ 99 mililitros.
✝ BIOSSEGURANÇA: A anilina e derivados são tóxicos e podem causar graves danos à saúde, como
câncer de bexiga. O ácido acético é tóxico, corrosivo, combustível e inflamável.
Evite inalá-los, ingeri-los, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do
corpo, além da roupa. Mantenha o ácido acético longe de fontes de calor.
PROCEDIMENTO
1. Desparafine e hidrate até a água destilada.
2. Coloque na solução fixadora de Bouin e deixe por 1 hora a 56oC ou à temperatura ambiente,
por uma noite, se os cortes foram fixados em formalina. Omita este passo se a fixação foi
inicialmente na solução de Bouin.
3. Deixe esfriar por 10 minutos.
4. Lave em água corrente até que os cortes fiquem claros. Após, enxágue em água destilada.
5. Core na solução de hematoxilina férrica de Weigert por 10 minutos.
6. Lave em água corrente por 10 minutos. Após isso, enxágue em água destilada.
7. Core em solução aquosa de Biebrich Scarlet a 1% por 15 minutos.a Guarde a solução. Enxágue
em água destilada.
8. Diferencie na solução de ácido fosfotúngstico-fosfomolíbdico por 10 a 15 minutos. Verifique
se o colágeno não está vermelho.b
9. Contracore na solução de azul de anilina por 5 a 10 minutos ou na solução de Light Green por
1 minuto. Guarde a solução. Enxágue em água destilada.
10a. Se a solução de azul de anilina for a usada, diferencie na solução aquosa de ácido acético a 1%,
por 3 a 5 minutos.
10b. Se a solução de Light Green for a usada, diferencie na solução de ácido fosfotúngstico a 5%,
por 15 minutos.
11. Desidrate e clarifique através de etanol a 95%, etanol absoluto, e xileno, 2 trocas, de 2 minutos,
em cada.
12. Monte em meio resinoso.
RESULTADOS
Núcleos ................................................................... preto.
Músculo, citoplasma, queratina ....................... vermelho.
Colágeno ..................................................... azul a verde.
a
Para os cortes do sistema nervoso central, os tempos de coloração são diferentes:
Etapa 7. Solução aquosa de Biebrich Scarlet, por 2 minutos.
Etapa 8. Solução de ácido fosfotúngstico-fosfomolíbdico, por 10 a 30 minutos.
Etapa 9. Solução de azul de anilina, por 15 a 20 minutos.
b
Repita a diferenciação na solução de ácido fosfotúngstico-fosfomolíbdico, se o colágeno
retiver a cor vermelha proveniente da solução de Biebrich Scarlet.
REFERÊNCIA
MASSON, P.J.- Trichrome stainings and their preliminary techniques. J. Tech. Met., 12: 75, 1929.