CD3 eFluor® 450

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CD3 eFluor® 450
Também conhecido como: Leu-4
Número catálogo(s): 9048-0036-120 (120 testes)
Perfis fluorescentes de linfócitos de sangue periférico
humano normal sem coloração (histograma azul) ou
com coloração CD3 com eFluor® 450 (histograma roxo).
Informação do produto
Conteúdo: CD3 eFluor® 450
Condições de conservação: Guarde à
Número catálogo(s): 9048-0036-120
temperatura entre 2 e -8°C. Não congele.
(120 testes)
Material sensível à luz.
Clone SK7
Cuidado, contém Azida
Concentração: 5 uL (0.5 ug)/teste (um teste
Fabricante: eBioscience, Inc., 10255 Science
é definido como a quantidade que irá corar
Center Drive, San Diego, CA 92121, USA
1 x 10e6 células em 100 uL)
Representante Autorizado: Bender
Anfitrião/Isotipo: Rato IgG1, kappa
MedSystems GmbH, uma eBioscience
HLDA Workshop: II
Company Campus Vienna Biocenter 2 A-1030
Formulação: Aquosa tampão, azida sódica ,
Viena de Áustria
0,09%, pode conter proteína/estabilizador
transportadora.
Uso pretendido
O anticorpo fluocromo monoclonal conjugado SK7
reage com o antigénio humano CD3. CD3 pode ser
detectado em amostras humanas biológicas usando
técnicas imunológicas.
o citómetro regista como a célula ou partícula espalha
a luz reflectida do laser e emite fluorescência. Usando
o protocolo de análise do citómetro de fluxo,
é possível realizar uma análise em simultâneo das
moléculas ao nível unicelular.
Princípios do teste
Citómetro de fluxo é uma ferramenta útil para medir
simultaneamente propriedades múltiplas físicas de
partículas individuais (tais como células). Células
passam por ficheiro único através do feixe laser.
Quando cada célula passa através do feixe laser,
Descrição
O anticorpo monoclonal SK7 reage ao épsilon humano
CD3, uma subunidade 20kDa do complexo TCR.
Em conjunto com outras subunidades gama e delta
CD3, a cadeia epsilón é necessária para
Documento # 30727_03 • Entrada em vigor: 25-01-2011
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Recolha de espécimes e instruções de
armazenamento
Recolha assepticamente uma amostra de sangue
venoso, por venipunção num tubo de colheita de
sangue, utilizando o anticoagulante adequado
(recomendado EDTA). Mantenha as amostra à
temperatura da sala (18-25°C). Antes da utilização,
misture as amostras agitando ligeiramente.
Materias necessários, mas não fornecidos
• Tubos de teste 12x75 mm
• Tampões (eBioscience Flow Cytometry Staining
Buffer, Cat. No. 00-4222 recomendado)
• Tampão de Lise (eBioscience 1X RBC Tampão de
lise, Cat. No. 00-4333 ou eBioscience Fixação
1 passo /Solução de lise (10X), Cat. No. 00-5333
recomendado)
• Para a coloração intracelular use o Tampão de fixação
IC e Tampão de permeabilização, Cat. Nº. 88-8823
(citoquina intracelular ou coloração de proteína
citoplasmática) ou Conjunto de tampão Foxp3, Cat.
Nº. 00-5523 (Para coloração de proteína nuclear).
Consulte a secção dos Melhores protocolos do sítio
Web eBioscience para os protocolos "Coloração de
antigénios intracelulares para o Citómetro de fluxo".
• Viabilidade da coloração (Viabilidade da solução
de coloração 7-AAD, Cat. Nº. 00-6993 ou Solução
de coloração de iodeto de propídio, Cat. No.
00-6990 recomendado)
• Pipetas automatizadas
• Centrifugadora
• Misturadora vortex
• Balde com gelo ou frigorífico
• Citómetro de fluxo
Protocolo do Teste
NOTA: Para a coloração intracelular, consulte a secção
dos Melhores protocolos do sítio Web eBioscience
para os protocolos "Coloração de antigénios
intracelulares para o Citómetro de fluxo".
1. Alíquota 100 µL da amostra do teste para os tubos.
2. Adicione 5 µL do anticorpo adequado para cada tubo.
3. Incube 30-60 minutos a 2-8°C. Alternativamente,
as amostras podem ser incubadas à temperatura
ambiente no escuro entre 15-30 minutos.
4. Adicione 2 ml de Tampão de Lise 1X RBC
(à temperatura ambiente) por tubo. Misture
suavemente. (Alternativamente, as amostras podem
ser incubadas com 2 mL 1-step Fix/Solução Lise.)
5.
As amostras incubadas no escuro à temperatura
ambiente por 10 minutos. Não exceda 15minutos
de incubação no Tampão Lise RBC.
6. Centrifugue as amostras a 300-400 x g durante
5 minutos à temperatura ambiente, decante/aspire
o material flutuante e lave 1 vez com 2 ml de Solução
tampão de coloração para Citometria de fluxo.
7. Centrifugue as amostras a 300-400 x g durante
5 minutos à temperatura ambiente, decante/aspire o
material flutuante.
8. Ressuspenda o precipitado com coloração em
1 mL de Solução tampão de coloração para Citometria de
fluxo e analise as amostras num citómetro de fluxo.
Limitações
1. Para um desempenho óptimo dos anticorpos
conjugados de fluorocromo, armazene os frascos
a 2-8°C no escuro. Não congele.
2. Centrifugue o frasco do anticorpo antes de abrir
para recuperar o volume máximo.
3. Salvo quando referido no protocolo, toda a
coloração deve ser realizada no gelo ou a 2-8°C
com a mínima exposição à luz.
Características de desempenho
A consistência dos reagentes de elevada qualidade é
garantida ao testar cada lote de anticorpos
monoclonais quanto à conformidade das
características de um reagente padrão. Os dados
citométricos de fluxo representativos são incluídos
quando for apropriado.
Evidência de deterioração
Para questões ou preocupações sobre o desempenho
ou qualidade dos produtos recebidos, contacte o
Suporte Técnico da eBioscience (ver abaixo).
Referências
Procedures for the Collection of Diagnostic Blood
Specimens by Venipuncture (H3-A6), 3rd Edition publicado
por National Committee for Clinical Laboratory Standards.
Haynes BF. Summary of T-cell studies performed during
the Second International Workshop and Conference on
Human Leukocyte Differentiation Antigens. In: Reinherz EL,
Haynes BF, Nadler LM, Bernstein ID, eds. Leukocyte Typing
II: Human T Lymphocytes. New York, NY: Springer-Verlag;
1986;1:3-30.
Knowles RW. Immunochemical analysis of the T-cell
specific antigens. In: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler
LM, Bernstein ID, eds. Leukocyte Typing II: Human T
Lymphocytes. New York, NY: Springer-Verlag;
1986;1:259-288.
Documento # 30727_03 • Entrada em vigor: 25-01-2011
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