HEMOSC Laborató Laboratório de Imungené Imungenética Centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina Tipagem ROTINA DE EXAMES DE HISTOCOMPATIBILIDADE PARA TRANSPLANTE LABORATÓ LABORATÓRIO DE IMUNOGENÉ IMUNOGENÉTICA HLA Transplante de medula óssea Transplante renal Pacientes e possí possíveis doadores Pacientes e possí possíveis doadores aparentados Farmacêutica-Bioquímica: Mariana Chagas Doador cadá cadáver Doadores voluntá voluntários de medula óssea Prova cruzada ou crosscross-match PRA HLA Antí Antígeno Leucocitá Leucocitário Humano • São glicoproteí glicoproteínas presentes na membrana das células que controlam a resposta imune, atuando como antí antígenos de histocompatibilidade • Permitem às cé células do sistema imune: • Reconhecerem a si pró próprias dentre as demais do organismo • Reconhecerem molé moléculas estranhas ao pró próprio organismo HLA Estrutura e classe dos antí antígenos Classe II Classe I Cadeia alfa Cadeia beta Cadeia Beta2Beta2-microglobulina Cadeia alfa Classe II HLA Classe I Classe I HLA Classe II • Função: Processamento e apresentaç apresentação de antí antígenos intracelulares a linfó linfócitos CD8 • Função: Processamento e apresentaç apresentação de proteí proteínas extracelulares a linfó linfócitos CD4. • HLA classe I – – – HLA – A HLA – B HLA - C • HLA classe II – HLA – DR – HLA – DQ – HLA - DP 1 HLA Localizaç Localização cromossômica HLA Distribuiç Distribuição tecidual 4 milhões de nucleotí nucleotídeos Cromossomo 6 (p21.3) Propriedades Antí Antígenos Distribuiç Distribuição tecidual Classe I Classe II HLAHLA-A HLAHLA-DR HLAHLA-B HLAHLA-DQ HLAHLA-C HLAHLA-DP Células nucleadas (somá (somáticas) Plaquetas Linfó Linfócitos B Macró Macrófagos/Monó fagos/Monócitos Células dendrí dendríticas Linfó Linfócitos T ativados HLA Lista Parcial dos Antí Antígenos Genes Antí Antígenos Genes Antí Antígenos HLA-DRB1 HLA-DQB1 HLA-DPB1 HLA-DR HLA-DQ HLA-DP HLA-A HLA-B HLA-C HLA-A HLA-B HLA-C Nomenclatura HLA S S O O HLA – A 32 HLA – B 27 R R Número do antígeno O O L L classe O O G G II A A M M O O - Superfí Superfície da membrana Antígeno Leucocitário Humano HLA – A* 3202 HLA – B* 2705 L L E E Número do alelo C C U U lócus L L - Gene A A R R Genes HLA Caracterí Características importantes Antígeno Leucocitário Humano HLA Hereditariedade Pai Mãe • Codificam dois tipos de molé moléculas estruturalmente distintas poré porém homó homólogas (classe I e II); • São os mais polimó polimórficos do genoma em todas as espé espécies analisadas; HAPLÓTIPO Filhos • São expressos em coco-dominância 2 IMPORTÂNCIA DO HLA HLA Métodos de Tipagem • Sorológicos: utilizam soros específicos para ASSOCIAÇÃO COM DOENÇAS identificação dos antígenos presentes nas membranas dos linfócitos TESTE DE PATERNIDADE • Moleculares: GENÉTICA DE POPULAÇÕES REPRODUÇÃO (ABORTOS DE REPETIÇÃO) TRANSPLANTE DE MEDULA ÓSSEA E RIM HLA Tipagem Soroló Sorológica A 23, 68 • SSP - Utilizando primers específicos para a amplificação seletiva do DNA correspondente a alelos ou grupos de alelos seguida de eletroforese em gel de agarose • SSO - Utilizando primers para a amplificação de segmentos de DNA equivalentes aos alelos HLA, seguida de hibridização com sondas de oligonucleotídeos de seqüências específicas HLA Tipagem Molecular B 15, 44 Camada de leucócitos Extraç Extração do DNA Linfó Linfócitos T e B (paciente) + Anticorpos aderidos na placa contra antí antígenos HLA presentes na membrana das cé células Preparaç Preparação do Mix Placa de amplificaç amplificação HLA Tipagem Molecular A* B* Amplificaç Amplificação Eletroforese(SSP) DRB1* A* 23, 68 B* 15, 44 TRANSPLANTE DE MEDULA ÓSSEA Consiste na infusão intravenosa de cé células progenitoras hematopoié hematopoiéticas com o objetivo de restabelecer a funç função medular. Existem dois tipos: • Autó Autólogo: medula óssea do pró próprio indiví indivíduo • Alogênico: Alogênico: medula óssea de outro indiví indivíduo É preciso que haja total compatibilidade entre doador e receptor para que a medula óssea não seja rejeitada. DRB1* 13, 15 SSO - Luminex DRB 5*, 3* 3 CHANCES DE SE ENCONTRAR UM DOADOR MANEIRAS DE EXTRAÇ EXTRAÇÃO DA MEDULA ÓSSEA Por punção 25% entre irmãos Por aférese UMA EM 1 MILHÃO entre doadores não aparentados O médico decidirá qual a melhor forma de coleta de células para cada paciente. TRANSPLANTE DE MEDULA ÓSSEA • 100% de compatibilidade em HLAHLA-A*, B*, Cw*, Cw*, DRB*, DQ*. DOADOR RECEPTOR A* 02, 32 A* 02, 32 B* 07, 35 B* 07, 35 DRB1* 13, 11 DRB1* 13, 11 • Doaç Doação Voluntá Voluntária de Medula Óssea • REDOME DOAR É IMPORTANTE REDOME Registro Nacional de Doadores Voluntários de Medula Óssea Sua função é de cadastrar nomes de pessoas dispostas a doar juntamente com a sua tipagem HLA Interação com os registros de doadores internacionais Acompanhar a evolução dos transplantes entre não aparentados Quando um paciente necessita de transplante a pesquisa de compatibilidade é realizada entre todos os doadores nacionais e internacionais TRANSPLANTES DE ÓRGÃOS No Brasil a mistura racial é muito grande, e isso dificulta ainda mais a procura do doador ideal A existência cada vez maior de doadores, facilita a busca por um tipo de medula compatí compatível 4 INDICAÇ INDICAÇÕES CLÍ CLÍNICAS RIM - FALÊNCIA RENAL CRÔNICA EM ESTÁGIO TERMINAL. TESTE DE HISTOCOMPATIBILIDADE TIPAGEM HLA : TEM COMO OBJETIVO A IDENTIFICAÇÃO DOS ANTÍGENOS HLA DE UM INDIVÍDUO. P R A - PAINEL DE REATIVIDADE ANTILEUCOCITÁ ANTILEUCOCITÁRIA Paciente entra para Lista de Espera para Transplante Renal MEDIDA DA SENSIBILIZAÇÃO PRÉVIA CONTRA ANTÍGENOS HLA Quantifica os anticorpos presentes no soro Determina a especificidade destes anticorpos Atualização de soro a cada 2 meses PROVA CRUZADA ou CROSS MATCH PROVA CRUZADA ou CROSS MATCH EXPOR in vitro LINFÓCITOS T e B DO DOADOR EM CONTATO COM O SORO DO RECEPTOR DO ÓRGÃO. Linfócitos T (doador) + soro paciente + C1 Linfócitos B (doador) + soro paciente + C2 Linfócitos T (doador) + soro paciente + AGH + C1 TRANSPLANTE RENAL TRANSPLANTE RENAL • Compatibilidade HLA – mismatch Pontuação a) no lócus DRB1* b) no lócus B* DOADOR RECEPTOR A* 02, 32 A* 02, 68 B* 07, 35 B* 44, 58 DRB1* 13, 11 DRB1* 15, 14 c) no lócus A* 0 MM = 6 pontos 1 MM = 3 pontos 2 MM = 0 ponto 0 MM = 4 pontos 1 MM = 2 pontos 2 MM = 0 ponto 0 MM = 1 ponto 1 MM = 0,5 pontos 2 MM = 0 ponto • Compatibilidade ABO • Desempate: 1) Tempo de espera na lista 2) P.R.A antileucocitária P.R.A – painel de reatividade antileucocitá 3) Diabetes 4) Idade do receptor 5 DOADOR CADÁ CADÁVER ROTINA LABORATORIAL LISTA DE ESPERA PARA TRANSPLANTE RENAL SANGUE PERIFÉRICO MORTE CEREBRAL LINFONODO TIPAGEM HLA RESULTADO PARA JOINVILLE BLUMENAU CHAPECÓ CENTRAL TRANSPLANTE FLORIANÓPOLIS ENVIO PARA SELEÇÃO RECEPTORES LABORATÓRIO PROVA CRUZADA RESULTADO PARA SC TRANSPLANTES CENTROS DE TRANSPLANTE LABORATÓRIO HLA CENTRAL TRANSPLANTE TRANSPLANTE : Caso clí clínico • Criança de 1ano e 2 meses com LMA necessita de transplante de medula óssea pois não responde ao tratamento. Busca de possível doador é feita na família. PAI MÃE A* 02, 03 A* 01, 32 B* 15, 40 B* 27, 39 DRB1* 13, 04 DRB1* 15, 16 Irmão Irmão Paciente Irmão Irmão A* 01, 24 A* 01, 02 A* 02, 32 A* 01, 03 A* 32, 03 B* 27, 51 B* 27, 15 B* 15, 39 B* 27, 40 B* 39, 40 DRB1* 15, 07 DRB1* 15, 13 DRB1* 13, 16 DRB1* 15, 04 DRB1* 16, 04 6