(Microsoft PowerPoint - Apresenta\347\343o HLA)

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HEMOSC
Laborató
Laboratório de Imungené
Imungenética
Centro de Hematologia e
Hemoterapia de Santa Catarina
Tipagem
ROTINA DE EXAMES DE
HISTOCOMPATIBILIDADE
PARA TRANSPLANTE
LABORATÓ
LABORATÓRIO DE IMUNOGENÉ
IMUNOGENÉTICA
HLA
Transplante de
medula óssea
Transplante renal
Pacientes e possí
possíveis
doadores
Pacientes e possí
possíveis
doadores aparentados
Farmacêutica-Bioquímica: Mariana Chagas
Doador cadá
cadáver
Doadores voluntá
voluntários
de medula óssea
Prova cruzada ou crosscross-match
PRA
HLA
Antí
Antígeno Leucocitá
Leucocitário Humano
• São glicoproteí
glicoproteínas presentes na membrana das
células que controlam a resposta imune, atuando
como antí
antígenos de histocompatibilidade
• Permitem às cé
células do sistema imune:
• Reconhecerem a si pró
próprias dentre as demais do
organismo
• Reconhecerem molé
moléculas estranhas ao pró
próprio
organismo
HLA
Estrutura e classe dos antí
antígenos
Classe II
Classe I
Cadeia
alfa
Cadeia beta
Cadeia Beta2Beta2-microglobulina
Cadeia alfa
Classe II
HLA Classe I
Classe I
HLA Classe II
• Função:
Processamento e apresentaç
apresentação de
antí
antígenos intracelulares a linfó
linfócitos CD8
• Função:
Processamento e apresentaç
apresentação de proteí
proteínas
extracelulares a linfó
linfócitos CD4.
• HLA classe I
–
–
–
HLA – A
HLA – B
HLA - C
• HLA classe II
– HLA – DR
– HLA – DQ
– HLA - DP
1
HLA
Localizaç
Localização cromossômica
HLA
Distribuiç
Distribuição tecidual
4 milhões de
nucleotí
nucleotídeos
Cromossomo 6
(p21.3)
Propriedades
Antí
Antígenos
Distribuiç
Distribuição
tecidual
Classe I
Classe II
HLAHLA-A
HLAHLA-DR
HLAHLA-B
HLAHLA-DQ
HLAHLA-C
HLAHLA-DP
Células nucleadas
(somá
(somáticas)
Plaquetas
Linfó
Linfócitos B
Macró
Macrófagos/Monó
fagos/Monócitos
Células dendrí
dendríticas
Linfó
Linfócitos T ativados
HLA
Lista Parcial dos Antí
Antígenos
Genes
Antí
Antígenos
Genes
Antí
Antígenos
HLA-DRB1
HLA-DQB1
HLA-DPB1
HLA-DR
HLA-DQ
HLA-DP
HLA-A
HLA-B
HLA-C
HLA-A
HLA-B
HLA-C
Nomenclatura HLA
S
S
O
O
HLA – A 32
HLA – B 27
R
R
Número do antígeno
O
O
L
L
classe
O
O
G
G
II
A
A
M
M
O
O
- Superfí
Superfície da
membrana
Antígeno Leucocitário Humano
HLA – A* 3202
HLA – B* 2705
L
L
E
E
Número do alelo
C
C
U
U
lócus
L
L
- Gene
A
A
R
R
Genes HLA
Caracterí
Características importantes
Antígeno Leucocitário Humano
HLA
Hereditariedade
Pai
Mãe
• Codificam dois tipos de molé
moléculas
estruturalmente distintas poré
porém homó
homólogas
(classe I e II);
• São os mais polimó
polimórficos do genoma em todas
as espé
espécies analisadas;
HAPLÓTIPO
Filhos
• São expressos em coco-dominância
2
IMPORTÂNCIA DO HLA
HLA
Métodos de Tipagem
• Sorológicos: utilizam soros específicos para
ASSOCIAÇÃO COM DOENÇAS
identificação dos antígenos presentes nas membranas
dos linfócitos
TESTE DE PATERNIDADE
• Moleculares:
GENÉTICA DE POPULAÇÕES
REPRODUÇÃO (ABORTOS DE REPETIÇÃO)
TRANSPLANTE DE MEDULA ÓSSEA E RIM
HLA
Tipagem Soroló
Sorológica
A 23, 68
• SSP - Utilizando primers específicos para a
amplificação seletiva do DNA correspondente a
alelos ou grupos de alelos seguida de
eletroforese em gel de agarose
• SSO - Utilizando primers para a amplificação
de segmentos de DNA equivalentes aos alelos
HLA, seguida de hibridização com sondas de
oligonucleotídeos de seqüências específicas
HLA
Tipagem Molecular
B 15, 44
Camada de
leucócitos
Extraç
Extração do DNA
Linfó
Linfócitos T e B (paciente) + Anticorpos
aderidos na placa contra antí
antígenos HLA
presentes na membrana das cé
células
Preparaç
Preparação do Mix
Placa de amplificaç
amplificação
HLA
Tipagem Molecular
A*
B*
Amplificaç
Amplificação
Eletroforese(SSP)
DRB1*
A* 23, 68
B* 15, 44
TRANSPLANTE DE MEDULA
ÓSSEA
Consiste na infusão intravenosa de cé
células
progenitoras hematopoié
hematopoiéticas com o objetivo de
restabelecer a funç
função medular.
Existem dois tipos:
• Autó
Autólogo: medula óssea do pró
próprio indiví
indivíduo
• Alogênico:
Alogênico: medula óssea de outro indiví
indivíduo
É preciso que haja total compatibilidade entre doador
e receptor para que a medula óssea não seja
rejeitada.
DRB1* 13, 15
SSO - Luminex
DRB 5*, 3*
3
CHANCES DE SE ENCONTRAR
UM DOADOR
MANEIRAS DE EXTRAÇ
EXTRAÇÃO DA
MEDULA ÓSSEA
Por punção
25% entre irmãos
Por aférese
UMA EM 1 MILHÃO entre
doadores não aparentados
O médico decidirá qual a melhor forma de coleta de células para
cada paciente.
TRANSPLANTE DE MEDULA
ÓSSEA
• 100% de compatibilidade em HLAHLA-A*, B*,
Cw*,
Cw*, DRB*, DQ*.
DOADOR
RECEPTOR
A* 02, 32
A* 02, 32
B* 07, 35
B* 07, 35
DRB1* 13, 11
DRB1* 13, 11
• Doaç
Doação Voluntá
Voluntária de Medula Óssea
• REDOME
DOAR É IMPORTANTE
REDOME
Registro Nacional de Doadores Voluntários de Medula
Óssea
Sua função é de cadastrar nomes de pessoas
dispostas a doar juntamente com a sua tipagem HLA
Interação com os registros de doadores internacionais
Acompanhar a evolução dos transplantes entre não
aparentados
Quando um paciente necessita de transplante a
pesquisa de compatibilidade é realizada entre todos
os doadores nacionais e internacionais
TRANSPLANTES DE ÓRGÃOS
No Brasil a mistura racial é muito
grande, e isso dificulta ainda mais a
procura do doador ideal
A existência cada vez maior de
doadores, facilita a busca por um tipo
de medula compatí
compatível
4
INDICAÇ
INDICAÇÕES CLÍ
CLÍNICAS
RIM - FALÊNCIA RENAL CRÔNICA EM ESTÁGIO
TERMINAL.
TESTE DE HISTOCOMPATIBILIDADE
TIPAGEM HLA : TEM COMO OBJETIVO A IDENTIFICAÇÃO DOS
ANTÍGENOS HLA DE UM INDIVÍDUO.
P R A - PAINEL DE REATIVIDADE
ANTILEUCOCITÁ
ANTILEUCOCITÁRIA
Paciente entra para Lista de Espera
para Transplante Renal
MEDIDA DA SENSIBILIZAÇÃO PRÉVIA CONTRA
ANTÍGENOS HLA
Quantifica os anticorpos presentes no soro
Determina a especificidade destes anticorpos
Atualização de soro a cada 2 meses
PROVA CRUZADA ou CROSS MATCH
PROVA CRUZADA ou CROSS MATCH
EXPOR in vitro LINFÓCITOS T e B DO DOADOR EM
CONTATO COM O SORO DO RECEPTOR DO ÓRGÃO.
Linfócitos T (doador) + soro paciente + C1
Linfócitos B (doador) + soro paciente + C2
Linfócitos T (doador) + soro paciente + AGH + C1
TRANSPLANTE RENAL
TRANSPLANTE RENAL
• Compatibilidade HLA – mismatch
Pontuação
a) no lócus DRB1*
b) no lócus B*
DOADOR
RECEPTOR
A* 02, 32
A* 02, 68
B* 07, 35
B* 44, 58
DRB1* 13, 11
DRB1* 15, 14
c) no lócus A*
0 MM = 6 pontos
1 MM = 3 pontos
2 MM = 0 ponto
0 MM = 4 pontos
1 MM = 2 pontos
2 MM = 0 ponto
0 MM = 1 ponto
1 MM = 0,5 pontos
2 MM = 0 ponto
• Compatibilidade ABO
• Desempate:
1) Tempo de espera na lista
2) P.R.A
antileucocitária
P.R.A – painel de reatividade antileucocitá
3) Diabetes
4) Idade do receptor
5
DOADOR CADÁ
CADÁVER ROTINA LABORATORIAL
LISTA DE ESPERA PARA TRANSPLANTE RENAL
SANGUE
PERIFÉRICO
MORTE
CEREBRAL
LINFONODO
TIPAGEM
HLA
RESULTADO
PARA
JOINVILLE
BLUMENAU
CHAPECÓ
CENTRAL
TRANSPLANTE
FLORIANÓPOLIS
ENVIO
PARA
SELEÇÃO
RECEPTORES
LABORATÓRIO
PROVA
CRUZADA
RESULTADO
PARA
SC TRANSPLANTES
CENTROS DE TRANSPLANTE
LABORATÓRIO HLA
CENTRAL
TRANSPLANTE
TRANSPLANTE :
Caso clí
clínico
•
Criança de 1ano e 2 meses com LMA necessita de transplante de
medula óssea pois não responde ao tratamento. Busca de possível
doador é feita na família.
PAI
MÃE
A* 02, 03
A* 01, 32
B* 15, 40
B* 27, 39
DRB1* 13, 04
DRB1* 15, 16
Irmão
Irmão
Paciente
Irmão
Irmão
A* 01, 24
A* 01, 02
A* 02, 32
A* 01, 03
A* 32, 03
B* 27, 51
B* 27, 15
B* 15, 39
B* 27, 40
B* 39, 40
DRB1* 15, 07
DRB1* 15, 13
DRB1* 13, 16
DRB1* 15, 04
DRB1* 16, 04
6
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