PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS ESCOLA DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E BIOLÓGICAS FUNDAMENTOS DE BIOFÍSICA – BIO1005 PROFESSOR: MACKS WENDHELL GONÇALVES Msc ______________________________________________________________ Aula prática de Introdução à Biofísica AULA 2. DILUIÇÃO SERIADA E SEPARAÇÃO DE MISTURAS INTRODUÇÃO A matéria, de modo geral, é encontrada na natureza na forma de misturas, conjunto de várias substâncias. Há dois tipos de misturas: Heterogêneas (apresentam mais de uma fase) e Homogêneas (apresentam uma única fase). A escolha dos melhores métodos para a separação de misturas exige um conhecimento anterior de algumas das propriedades das substâncias presentes. Muitas vezes, dependendo da complexidade da mistura, é necessário usar vários processos diferentes, numa sequência que se baseia nas propriedades das substâncias presentes na mistura. O primeiro experimento mostra um dos processos de separação de misturas que é bastante utilizado. Já a Diluição Seriada consiste em diluir um soluto em uma razão constante de solvente, para reduzir a concentração do soluto, com utilizações como a titulação de anticorpos, homeopatia, avaliação do crescimento bacteriano e fúngico, avaliação de ovos de endoparasitas, testes de sensibilidade, entre outros. OBJETIVOS Realizar um procedimento de separação de misturas Realizar um procedimento de diluições seriadas a partir de uma solução-mãe de vermelho de metila. MATERIAL Procedimento 1 Leite Solução diluída de ácido acético Centrífuga Tubos de ensaio BIO 1005 – Fundamentos de Biofísica Procedimento 2 10 tubos de ensaio Água deionizada Azul de bromofenol Béquer de 100 ml; Bastão de vidro; 20 mg de vermelho de metila; Ácido clorídrico 2,0 M; Pipetas graduadas ou volumétricas de 1; 5 e 10 ml ; Balança Analítica; Banho-maria; PROCEDIMENTOS Separação de misturas - Em um tubo de ensaio, coloque 25 ml de leite - Goteje o ácido acético até o aparecimento de um precipitado, que é a caseína (a proteína do leite) - Deixe descansando aproximadamente 10 minutos, para sedimentação da proteína - Centrifugue e observe o resultado final Diluição Seriada 1 - Enumerar 06 tubos de ensaio - Adicionar 4ml de H2O em cada tubo. Colocar 4ml de Azul de Bromofenol no tubo 1 e agitar. Retirar 4ml da solução do tubo 1 e adicionar no tubo 2. Repetir em todos os tubos. No tubo 6 retirar 4ml e descartar. BIO 1005 – Fundamentos de Biofísica Cada tubo estará, desta forma, diluído em 2x com relação ao anterior. Diluição Seriada 2 - Pesar 20 mg de vermelho de metila em um papel de alumínio; - Solubilizar o vermelho de metila em 100 ml de água destilada, com o auxílio de um bastão de vidro; - Colocar 10 ml de HCl 2,0 M na solução e aquecer por 5 minutos em banho-maria; - Pipetar 1 ml da solução-mãe (solução de vermelho de metila) para um tubo de ensaio e completar o volume para 5 ml com água destilada; - Pipetar 1 ml da nova solução do tubo de ensaio para outro tubo de ensaio e novamente completar o volume para 5 ml com água destilada; - Repetir o último passo para mais dois tubos de ensaio PESQUISE A RESPEITO DAS PROPRIEDADES DO VERMELHO DE METILA _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ BIO 1005 – Fundamentos de Biofísica