Pall do Brasil Ltda.

Pall do Brasil
INSTRUÇÃO DE USO DOS FILTROS
EM CONCENTRADO
DE HEMÁCIAS
INSTRUÇÕES
DE USO
Pall eBDS Minipool Sample Set
REF: 732-85L
Sistema de Amostragem Pall eBDS Minipool para a
detecção de bactérias em plasma rico em
plaquetas de sangue total com leucócitos
reduzidos (PRP) de produtos plaquetários derivados
no plasma
INDICAÇÕES
O sistema de amostragem Pall eBDS Minipool
destina-se a ser usado conjuntamente com um
analisador de oxigênio Pall eBDS em processos de
qualidade
visando
a
detecção
de
microorganismos
aeróbicos
e
anaeróbicos
facultativos (bactérias) para teste de controle de
qualidade de produtos plaquetários derivados de
sangue total com leucócitos reduzidos,
O sistema de amostragem Pall eBDS Minipool foi
concebido para combinar amostras de 4-5
unidades de plaquetas derivadas de sangue total
com leucócitos reduzidos para posterior detecção
de bactérias usando a bolsa de amostra Pall eBDS.
COMPOSIÇÃO
Bolsa de amostra de polivinilcloride do tipo ELX.
Cada bolsa de amostra contém duas pastilhas
compostas por:
1,75 mg de polianetol sulfonato de sódio (PSS)
90,0 mg de solução de soja de tripticase (TSB)
8,80 mg de cloreto de cálcio
2,0 mg estearato de magnésio
2,0 mg de dióxido de sílica.
REAGENTES
Duas pastilhas contendo 1,75 mg de polianetol
sulfonato de sódio (PSS), solução de soja de
tripticase, cloreto de cálcio e agentes de
processamento, incluídos na bolsa de amostra.
Não há fases de reconstituição, mistura ou diluição.
SUMÁRIO E EXPLICAÇÃO
O sistema de amostragem Pall eBDS Minipool é
utilizado para determinar se produtos plaquetários
normais estéreis com leucócitos reduzidos contêm
bactérias.
Na contagem de bactérias, em produtos
plaquetários,
eram
geralmente
empregues
métodos microbiológicos clássicos de cultura. Foi
investigado o uso de marcadores indicativos do
crescimento bacteriano, como o pH e a
concentração de glicose mas concluiu-se haver
falta de sensibilidade e especificidade.'''·' O sistema
de amostragem Pall eBDS Minipool recorre à
concentração de oxigênio como marcador
indicativo do crescimento de bactérias.
Quando utilizado com um dispositivo de ligação
estéril, o sistema de amostragem Pall eBDS Minipool
é aplicável em sistemas de amostragem fechado
para combinar e testar 4-5 unidades de plaquetas
e não exige quaisquer reagentes adicionais. O
sistema requer a utilização do Analisador de
Oxigênio Pall eBDS para medir a percentagem de
oxigênio na bolsa de amostra após incubação a
35°C.
Notas: O sistema de amostragem Pail eBDS Minipool
não se destina a ser utilizado com produtos
plaquetários sem redução de leucócitos. O sistema
Pail eBDS Minipool destina-se ao teste de controle
da qualidade de produtos plaquetários com
leucócitos reduzidos devendo, por conseguinte,
observar todos os procedimentos normais.
PRINCÍPIO DO TESTE
O método de detecção baseia-se na medição do
teor de oxigênio do ar dentro da bolsa de amostras
como marcador indicativo de bactérias. O sistema
de amostragem Pall eBDS Minipool utiliza o
Analisador de Oxigênio Pall eBDS para medir a
percentagem deste gás no espaço superior da
bolsa de amostragem. Se existirem bactérias na
amostra de plaquetas, uma maior quantidade de
oxigênio é consumida através da atividade
metabólica e da proliferação de bactérias na
amostra durante a incubação, provocando uma
diminuição considerável do teor de oxigênio do
plasma, bem como do ar dentro da bolsa de
amostragem.
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO
Não armazenar a uma temperatura superior a
40°C. Não congelar. Não utilizar se a embalagem
estiver danificada ou as proteções das pontas
estiverem soltas ou deslocadas. Não utilizar se
existirem indícios de danos no sistema de
amostragem PalI eBDS ou se a embalagem não
contiver as duas pastilhas. Não utilizar após o prazo
de validade. O conteúdo da embalagem da
unidade tem de ser utilizado no prazo de 14 dias
após a sua abertura.
PRECAUÇÕES
Siga as instruções cuidadosamente. Produto para
uso único. Não reuse ou esterilize
NÃO SE DESTINA A TRANSFUSÃO.
Destruir após o uso
Produto estéril e apirogênico
Esterilizado por radiação gama.
Amostras de hemoderivados devem ser tratados de
acordo com as normas relativas a produtos e
processos biologicamente perigosos.
MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS
COM O SISTEMA:
Incubador a 35o C capaz de alojar um agitador de
plaquetas planas
Dispositivo de ligação e plaquetas estéreis
Vedação de tubo
Extractor de tubo
Clamps elou hemóstato
MODO DE USAR
Coleta e Preparação de Amostras
Pall do Brasil
1. Para uma detecção ideal de bactérias, realize a
amostra ao produto plaquetário após 24 horas
depois da coleta. Uma amostragem antes de
decorridas 24 horas pode não permitir que os
organismos de crescimento muito lento se
desenvolvam até atingirem níveis adequados à
detecção.
2. No momento desejado, retire o produto
plaquetário da área de armazenagem e prepare a
amostra conforme a seguir descrito.
3. Feche o clamp de roldana (G) localizado por
cima da bolsa de amostra PalI eBDS.
4. Coloque os clamps nos pinos do tubo (B) e feche.
5. Cuidadosamente, misture o produto plaquetário
com leucócitos reduzidos e retire o tubo das bolsas
de plaquetas. Assegure-se que o tubo da bolsa de
plaquetas está completamente cheio com uma
amostra representativa bem misturada. Repita para
cada uma das bolsas de plaquetas a serem
testadas.
6. Proceda á ligação estéril da primeira bolsa de
plaquetas ao pino do tubo (B) de acordo com as
instruções do fabricante. Para garantir um volume
correto de enchimento coloque o tampão (A) na
extremidade da ranhura do dispositivo de ligação
estéril.
Repita para as restantes unidades.
7. Suspenda as unidades de plaquetas na vertical
acima do sistema Minipool, de forma a que a bolsa
(E) fique por baixo.
8. Abra os clamps por cima das bolsas de dosagem
controlada (C) e deixe encher com a amostra de
plaquetas.
9. Logo que o fluxo para as bolsas de dosagem
controlada (C) tenha terminado, feche os clamps
nos pinos do tubo (B). Evite apertar as bolsas
durante a aplicação do clamp.
10. Vede os pinos do tubo (C):
11. Abra as ligações de esgotamento (D) para
permitir que o fluído das bolsas de dosagem
controlada (C) passe para a bolsa de (E). Nota: Se
desejado, vede acima da bolsa quando as bolsas
de dosagem controlada estiverem vazias e retire o
tubo.
12. Agite a bolsa.
13. Mantenha a bolsa de dosagem controlada (E)
acima da bolsa de amostra Pall eBDS (H) de forma
a que as linhas de enchimento fiquem na
horizontal. Nota: a ligação da amostra deve estar
voltada para baixo.
14. Abra a linha de esgotamento (F) que conduz à
bolsa de amostra Pall eBDS (H).
15. Cuidadosamente o clamp de roldana e deixe
que o líquido saia até atingir um nível entre as duas
linhas localizadas na bolsa de amostra.
Nota: A bolsa é considerada "pouco cheia" se o
nível de líquido estiver abaixo da primeira linha, e
"demasiado cheia" se o nível de líquido estiver
acima da segunda linha.
Uma bolsa de amostra (H) demasiado cheia pode
provocar um falso positivo. Uma bolsa pouco cheia
pode provocar um falso negativo.
16. Feche o clamp de roldana.
17. Feche o tubo da bolsa de amostra Pall eBDS (H):
18. Solte e descarte o restante sistema'.
19. Coloque a bolsa de amostra (H) num agitador
horizontal de plaquetas dentro do incubador a 35'C
durante 18 a 30 horas. Oriente a bolsa de
amostra(H) de forma a que a agitação se realize
ao longo do seu eixo longitudinal. Nota: Assegurese que as pastilhas estão mergulhadas no fluído.
20. Volte a armazenar as unidades de plaquetas a
20-24'C.
21. Meça a percentagem de O2, no espaço de ar
da bolsa de amostra, passadas 24 a 30 horas de
incubação a 35'C.
Processo de ensaio (utilizando o Analisador de
Oxigênio PaU eBDS)
22. Confirme que o analisador de oxigênio Pall eBDS
está pronto para medir a amostra.
23. Enquanto utiliza o suporte de amostragem para
orientar a amostra na posição vertical, introduza a
sonda do analisador de oxigênio através do septo
do ponto de amostragem e da membrana de
proteção no espaço de ar da bolsa de amostra.
Notas:
• Não segure/aperte a estrutura da bolsa de
amostra quando introduzir a sonda, a pressão
poderá forçar o liquido a deslocar-se até à sonda.
• Não introduza a sonda no líquido da bolsa de
amostra.
Pall do Brasil
• Não utilize álcool para limpar o local de coleta. O
álcool pode interferir com a análise do oxigênio.
24. Meça a percentagem de O2, aspirando o
espaço superior de ar da bolsa de amostra
seguindo as instruções de utilização do analisador.
(Consultar "Procedimento de teste de ensaio" no
Guia do Utilizador do Analisador de Oxigênio Pall
eBDS.)
25. Se visualizar "Pass", o ensaio não detectou
contaminação bacteriana e indica que a amostra
é NEGATIVA no momento da medição de O2.
Documente o resultado e descarte a bolsa de
amostra Pall eBDS'.
26. Um "FAIL" a piscar indica que a percentagem
de O2, é inferior ao limite aceitável.
Se visualizar um "FAlL" a piscar, a unidade pode
estar contaminada com bactérias e recomenda-se
que seja descartada depois de proceder à sua
amostra para confirmar o resultado.
27. Se visualizar uma mensagem de alerta, siga as
instruções Indicadas no visor do Analisador de
Oxigênio Pall eBDS para permitir um novo ensaio.
Só pode ser realizado um novo ensaio da
percentagem de O2 num determinado sistema. Se
pretender realizar um novo ensaio, regresse ao
ponto 20.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Os resultados positivos ou negativos são
determinados pelo software do Analisador de
Oxigênio Pall eBDS. Os resultados positivos que
indica uma possível contaminação bacteriana são
indicados por "FAIL". Os resultados negativos são
apresentados como "Pass". O teste deverá ser
considerado inválido se verificar uma mensagem
de erro e este não for solucionado, ou se por
qualquer razão existir alguma dúvida sobre a
capacidade de obter uma indicação rigorosa de
"Pass" ou "Fall" para um determinado componente
plaquetário.
VALORES ESPERADOS
Espera-se que >99% de todos os produtos testas
apresentem poucas ou nenhumas bactérias e,
nesse caso, a concentração de oxigênio será
aceitável, sendo indicada a mensagem "Pass" no
momento da medição de O2. Essas unidades com
concentrações de oxigênio abaixo do limite
aceitável darão um resultado positivo, sendo
visualizada a mensagem "FAIL".
PERFORMANCE E CARACTERISTICAS
Quando utilizado com o Analisador de Oxigênio
Pall eBDS, o sistema de amostragem Pall eBDS
permite a recolha e detecção de aeróbios e
anaeróbios facultativos dos produtos plaquetários
com leucócitos reduzidos. A avaliação do sistema
de amostragem Pall eBDS incluiu testes com 10
bactérias referidas como sendo causadoras de 98%
de ocorrências mortais resultantes de CP
bacteriologicamente contaminada no período
compreendido entre 1976 e 1988'. Sintetizando,
estes estudos demonstraram que uma detecção
de 100% foi alcançada mediante o teste de 280
unidades de plaquetas com leucócitos reduzidos
com uma baixa sobrecarga biológica de bactérias
e com a amostragem para o Pall eBDS passadas
24 horas de armazenamento:
Os estudos de avaliação foram realizados da
seguinte forma: Doadores aleatórios de CP por
aférese com leucócitos reduzidos ou de derivados
de sangue total foram inoculados com uma dose
alvo de 1-15 CFU/ml de cada um dos dez
microorganismos conhecidamente associados a
infecção transmitida por transfusão de plaquetas
(consultar o quadro 1 em baixo). Imediatamente
após a mistura, retirou-se uma amostra para
determinar o nível de bactérias no CP (quadro 1).
Passadas 24 horas de armazenamento do Cp'
recolheu-se outra amostra para determinar os niveis
de crescimento passadas 24 horas (quadro 1), e
uma alíquota foi colocada na bolsa de amostra
Pall eBDS, sendo depois incubada durante 24 horas
a 35"C com agitação realizada por um agitador
horizontal. Quatro centros de teste participaram no
estudo; 2 centros testaram plaquetas por aférese e
2 centros testaram plaquetas derivadas de sangue
total. Cada centro realizou 5 estudos de replicas
em cada um dos dez organismos.
Estudos adicionais (quadro 2) foram também
realizados imediatamente após a inoculação
(tempo = O horas) por forma a obter informações
adicionais sobre a performance com uma baixa
sobrecarga
biológica
nos
organismos
de
crescimento rápido, e nos organismos com
tendência para auto-esterilização durante o
armazenamento de 24 horas (Pseudomonas e
Salmonella).
Além disso, em cinco estudos de replicas dos dez
organismos. recolheram-se amostras para uma
Incubação
de
30
complementarmente
à
incubação de 24 horas a 35'C antes de realizar o
teste da percentagem de oxigênio. Por último,
procedeu-se à amostragem e teste de um total de
226 CP normais não inoculados total (24 por aférese
e 202 plaquetas de doadores aleatórios) com o
sistema Pall eBDS.
Conforme apresentado nos quadros 1 e 2, o Pall
eBDS permitiu a detecção de aeróbios e
anaeróbios facultativos dos produtos plaquetários
com leucócitos reduzidos com níveis de bactérias
de 1 -15 CFU/mi e superiores. Em 3 das 368 unidades
contaminadas avaliadas com o sistema Pall eBDS,
verificou-se uma falha na detecção, todas com
Pseudomonas aeruginosa testadas a O horas. No
entanto, em cada um destes três casos, a
detecção foi obtida na amostragem das unidades
passadas 24 horas. Assim, obteve-se uma detecção
a 100% com amostras tanto por aférese, como de
plaquetas derivadas de sangue total, 24 horas após
a inoculação, seguida por uma incubação de 24
de todas as amostras testadas. Da mesma forma,
obteve-se uma detecção a 100% passadas 30
horas de incubação. Por último, nenhuma das 226
unidades
inoculadas
apresentou
resultados
positivos com o sistema Pall eBDS.
Pall do Brasil
Pall do Brasil
PRECAUÇÕES E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
1. O sistema Pa/l eBDS Minipool foi concebido para
detectar a contaminação de bactérias em
plaquetas com leucócitos reduzidos. Os usuários
têm de estar conscientes que determinadas
bactérias têm um desenvolvimento muito lento' e
se o nível inicial de contaminação com essas
bactérias, a alíquota recolhida para testar com o
sistema eBDS pode não conter quaisquer bactérias.
Nestes casos, as bactérias não serão detectadas e
será indicado um resultado negativo ("Pass").
Tempos de espera superiores antes da amostragem
do produto plaquetário melhoram a capacidade
de detecção destes organismos de crescimento
lento.
2. Os testes do sistema eBDS foram realizados
utilizando produtos plaquetários com leucócitos
reduzidos CP2D (unidades únicas e combinadas) e
produtos plaquetálios com leucócltos reduzidos
ACD-A.
3. Este dispositivo foi testado com as bactérias
acima mencionadas. As bactérias que não
crescem em níveis suficientes na unidade
plaquetária ou na bolsa de amostra ou que não
utilizam
oxigênio
suficiente
para
serem
determinadas
como
positivas
não
serão
detectadas.
4. A não manutenção da agitação durante a
incubação pode provocar um falso resultado
negativo.
5. A não imersão das pastilhas no fluido pode
provocar um resultado falso positivo.
6. Os valores de sensibilidade e de especificidade
foram obtidos em ensaios internos e externos
utilizando concentrados de plaquetas de doadores
únicos aleatórios por aférese, bem como amostras
combinadas de concentrados de plaquetas de
doadores
aleatórios,
propositadamente
contaminados com baixos níveis de bactérias (dose
alvo de 1-15 CFU/ml) e imediatamente testados
e/ou armazenados durante 24 horas, e transferidos
para o sistema Pall eBDS e depois testados quanto
à percentagem de O² passadas 18 a 30 horas de
incubação a 35°C. Tempos de espera superiores
antes da amostragem podem aumentar a
sensibilidade e a probabilidade de detecção de
organismos de crescimento lento. Nas condições
de utilização reais podem verificar-se variações
relativamente a estas estatísticas.
7. Um resultado negativo ("Pass") não deve ser
interpretado como indicando que o produto
plaquetário que está sujeito a um controle de
qualidade é estéril.
Um resultado negativo pode ficar a dever-se a
variáveis no âmbito do processo, tais como coleta
incorreta da amostra para o sistema Pall eBDS
Minipool ou falta de microorganismos na alíquota
recolhida na bolsa de amostra.
8. Uma bolsa de amostra demasiado cheia pode
provocar um falso positivo. Uma bolsa pouco cheia
pode provocar um falso negativo. [A bolsa de
Pall do Brasil
amostra é considerada "demasiado cheia" quando
o nível de líquido que enche a bolsa se encontrar
acima da segunda marca (linha). A bolsa de
amostra é considerada "pouco cheia" quando o
nível de líquido que enche a bolsa se encontrar
abaixo da primeira marca.]
9. Produtos plaquetários sem leucócitos reduzidos
ou com leucócitos reduzidos e uma elevada
contagem de plaquetas (>3,0 x 10' por ml) podem
provocar falsos resultados positivos.
10. O álcool pode interferir com a análise do
oxigênio, e não deve ser utilizado para limpar o
local da amostra antes de inserir a sonda no
analisador de oxigênio.
11. Utilize uma máquina de soldar tubos estéril de
acordo com as instruções de utilização do
fabricante; somente os tubos compatíveis com
máquinas de soldar estéreis podem ser utilizados
para manter um sistema fechado. As dimensões e a
composição do sistema de amostragem eBDS
Minipool estão em conformidade com os requisitos
para a utilização com máquinas de soldar tubos
estéreis e só devem ser utilizadas em conjunto com
produtos que se saiba serem compatíveis.
REFERÊNCIAS:
1. Mitchell KT and Brecher ME: Approaches to lhe
detection of bacterial contarnination in cellular
blood products. Transfusion Medicine Reviews
1999;13:132-144.
2. Wagner SJ, Robinette D: Evaluation of swirling, pH,
and glucose tests for the detection of bactelial
contamination in platelet concentrates. Transfusion
1996;36:989-993.
3. Brecher ME, Boothe G, Kerr A: The use of
cl1emiluminescence-linked
universal
bactelial
ribosomal RNA gene probe and blood gas anaiysis
for the rapid detection of bacteriai contamination
in white cell-reduced and non reduced platelets.
Transfusion 1993; 33:450457.
4. Burstain JM, Brecher ME, Workman, et ai: Rapid
identification of bacterially contaminated platelets
using reagem smps: glucose and pH analysis as
marilers of bacterial metabolism. Transfusion
1997;37:255-258.
5. Brecher ME: Bacterial contamination of blood
products. Simon T, Dzik WH, Snyder E, Stowell CP and
Strauss RG. Principies of Transfusion Medicine, 3rd
ed~ion. Lippincott Williams & Wilkins; 2002; 789-801.
6. Brecher ME, et aI., Growth of bacteria in
inoculated platelets: implications for bactéria
detectlon and the extension of piateiet storage.
Transfusion 2000; 40:1308-1312.
7. Holme S, McAlister MB, Ortolano GA et ai.
Enhancement of a culture-based bacterial
detection system (eBDS) for platelet products based
on
measurement
of
oxygen
consumption.
Transfusion 2005, 45:884-894.
PALL e Pall são marcas registadas da PaLL
Corporalion.
Betler Slood. Setler Care. é uma marca de serviço
oferecido pela PaUCorporation.
147732850L edição de Agosto de 2005.
Lote Nº:
Data Fabricação: Vide rótulo
Prazo de Validade: Vide rótulo
Fabricado por:
Medsep Corporation
1630 Industrial Park Street- Covina , CA 91722-USA
Tel.: 626-915-8223
Fax.: 626-966-3690
Importado e Distribuído por:
Pall do Brasil Ltda.
Avenida das Américas, 1.155 sala 712 - Space
Center
Tel: 021-21119208
CNPJ: 55.568.968/0001-00
AFE : X82399824622 (8.03612.0)
Resp. Técnico : José Carlos da Silva Lima
Insc.Cons.: CRF /RJ 2560
Registro ANVISA no :
_________________________
José Carlos da Silva Lima
CPF: 311.601.237-72
CRF / RJ – 2560
Diretor / Técnico Responsável