ENZIMOLOGIA 1. ENZIMAS • CONCEITO • PODER “Proteínas” funcionando como catalisadores de reações bioquímicas CATALÍTICO: “Tornam realidade reações termodinamicamente possíveis, velocidade das reações” acelerando C12H22O11 + 12O2 Go’= -1360 kcal/mol 12CO2 + 11H2O CO2 + H2O H2CO3 •COENZIMA – Molécula Org.: NAD+; FAD (Grupa/o Prostético) COFATOR: Íon (Cl-; Fe++; Mg++) a CLASSIFICAÇÃO 1. OXIDOREDUTASES: Transferência de elétrons 2. TRANSFERASES: Transferência de grupos entre moléculas 3. HIDROLASES: Reações de hidrólise (H2O) 4. LIASES: Adição de grupos a duplas ligações 5. ISOMERASES: Transferência de grupos dentro da molécula 6. LIGASES: Formação de ligações químicas (ATP) D-Glicose + ATP Glicose-6P + ADP ATP:GlicoseFosfoTransferase (Hexoquinase – HK) D-Glicose + ATP (SUBSTRATOS); Glicose-6P + ADP (PRODUTOS) ESPECIFICIDADE - Hidrolases • PROTEASE: Hidrolisa (quebra) Proteínas • LIPASE: Quebra Lipídios • NUCLEASE : DNAse; RNAse PROTEASES 1. PEPSINA : Proteínas (aa)n aminoácidos (n x aa) 2. TRIPSINA : Hidrolisa ligações peptídicas aa - Arg ou Lys NH2aa1aa2.......Arg20.......Lys30....aa99aa100COOH NH2aa1.......Arg20COOH + NH2aa21...... Lys30COOH 3. TROMBINA : aa1.................ArgGly...............aan + aa31...aa100 ESTEREOESPECIFICIDADE FUMARATO + NH4 Aspartase -O-C=O -O-C=O 3HN-C-H C-H H-C L- ASPARTATO + NH4 C-H2 -O-C=O -O-C=O MALEATO (Isômero Cis) + NH4 x x Aspartase ??? NADA !!!!!!!! Aspartase D- Aspartato NADA !!!!!!!!! CATALISADORES BIOLÓGICOS A + B P “Moléculas para reagirem necessitam serem elevadas a um determinado nível de energia, denominado ENERGIA de ATIVAÇÃO” • CALOR • CATALISADOR Aumento de Energia Cinética Direcionando os Choques E N E Não Enzimática R G I Enzimática A Progresso da Reação SÍTIO ATIVO • POSICIONAMENTO • CATALÍTICO ENCAIXAR o SUBSTRATO ONDE OCORRE a REAÇÃO CARACTERÍSTICAS • FENDAS ou SULCOS • PEQUENA PORÇÃO • ESPECIFICIDADE • LIGAÇÕES FRACAS TRIDIMENSIONAL Lisozima: aa 35, 52, 62, 63 e 101 ESPECIFICIDADE S Ligação a ser Atacada Grupo de Ligação E Sítio Catalítico Sítio de Posicionamento LISE R CH C X Posicionamento (P) O Catalítico (C) QUIMIOTRIPSINA SÍTIO ATIVO = P + C Pequena Porção Tridimensional (Lisozima) Especificidade Ligações Fracas Fendas ou Sulcos ESPECIFICIDADE Hidrólise NH2 CH2CHC R NHCHCOO - PEPTÍDEO O Hidrólise NH2 CH2CHC NH2 AMIDA O NH2 CH2CHC O OCH2 ÉSTER CINÉTICA ENZIMÁTICA E + S [ES] • CONCENTRAÇÃO da ENZIMA v P + E • ...... Do SUBSTRATO Vmax [S] VMAX v = Km [S] Km Km + [S] Afinidade ES EFEITO CHAVE-FECHADURA? EFEITO CHAVE-FECHADURA? FACTORES que AFETAM a ATIVIDADE ENZIMÁTICA v v Pepsina = 1,5 Tripsina = 7,7 Desnaturação Térmica Calor Arginase = 9,7 0C pH ótimo t Ótima INIBIÇÃO REVERSÍVEL COMPETITIVA INIBIÇÃO ENZIMÁTICA REVERSÍVEL COMPETITIVA Inibição é revertida pelo aumento de concentração do {S} COMPETIÇÃO PELO SÍTIO ATIVO INIBIÇÃO ENZIMÁTICA REVERSÍVEL O- O C O COMPETITIVA O - O CH2 CH2 CH2 C C [S] O O- O C C - OSDH CH FADH 2 O 2H+ C FAD O- [I] CH O APLICAÇÃO DE INIBIÇÃO COMPETITIVA TRATAMENTO DE GÔTA OH C N C N CH HC XANTINA C N URATO OH N ALOPURINOL C N C HC C N CH N N APLICAÇÃO DE INIBIÇÃO COMPETITIVA ETANOL COMO AGENTE TERAPÊUTICO: TRATAMENTO DO ENVENENAMENTO POR ETILENOGLICOL E METANOL OH H CH2 OH Desidrogenase C Alcoólica CH2 OH CH2 OH CH2 OH CH3 OH O C C OH O INIBIÇÃO REVERSÍVEL não-COMPETITIVA INIBIÇÃO REVERSÍVEL - Mista INIBIÇÃO IRREVERSIVEL INIBIÇÃO ENZIMÁTICA IRREVERSÍVEL CH3 H 3C - C - O O HC 3 - C - O - CH 2 - N - CH 3 O + CH3 CH3 HO -CH2 -CH 2 -N-CH 3 CH3 CH 2 OH + DFP Enzima Ativa Serina CH 2 O DFP Enzima Inativa ENZIMAS ALOSTÉRICAS REGULAÇÃO por MODIFICAÇÃO COVALENTE INIBIÇÃO pelo PRODUTO FINAL INIBIÇÃO ENZIMÁTICA REVERSÍVEL NÃO COMPETITIVA O INIBIDOR SE LIGA NO SÍTIO ALOSTÉRICO Referências Bibliográficas SILVERTHORN, DU. Fisiologia Humana. 2a edição, Manole, 2003, págs. 79 a 88. NELSON, D.L., COX, M.M. Lehninger Biochemistry. 3a edição, 2000. Principles of