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PARTE II PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE AGRONOMIA DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA PRINCIPAIS MÉTODOS Transformação via Agrobacterium tumefaciens Biolística ou pistola de genes Eletroporação (descarga elétrica) TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES GALHA DA COROA Sintoma infecção por A. tumefaciens Plasmídeo Ti A. tumefaciens TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Plasmídio Ti T-DNA Cromossomo DNA cromossômico T-DNA Tumor da galha A. tumefaciens Agrobacterium tumefaciens Célula vegetal transformada TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Célula vegetal PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium “desarmada” Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde a campo Transferência para meio de cultura com antibiótico, herbicida ou outro método de seleção Regeneração da planta transgênica Bombardeamento de partículas ou Biolística MICROPARTÍCULAS DE OURO GENE DE INTERESSE DNA ADERE ÀS PARTÍCULAS REGENERAÇÃO DAS PLANTAS TRANSGÊNICAS ACELERAÇÃO DAS PARTÍCULAS LIBERAÇÃO DO DNA NO NÚCLEO SELEÇÃO DAS CÉLULAS TRANSFORMADAS TIPOS DE PISTOLAS DE GENES PISTOLA DE GENES EM AÇÃO CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO (após a animação recarregar a apresentação) EXEMPLO DE TESTE A CAMPO Milho transgênico Bt (Resistente a diferentes insetos) Milho não transgênico UM GENE SIMPLIFICADO Promotor Controla quando, como e quanto o gene vai ser expresso Seqüência codificando gene Bt Seqüência de terminação Contém a informação do que o gene faz Diz onde termina o gene CASSETE DO GENE Bt Gene de seleção Resistência a antibiótico, Resistência a herbicida, … Gene Bt NEM TUDO É TÃO SIMPLES GENES DEVEM SER “CONSTRUÍDOS” ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO. (RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS) NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae Não-transgênico Transgênico Transgênico Transgênico
