Projetos Genoma de Microorganismos Priscila Caffeu Ramos 5.º Ano - Noturno Definições Genoma: é o conjunto completo de genes de um organismo Genômica: é a ciência que estuda o genoma a partir de seu seqüenciamento Genômica Funcional: é o ramo da genômica que busca determinar as funções gênicas a partir da análise de seqüências, utilizando os dados gerados pelos projetos genoma em estudos de genética fisiológica Objetivo Os Projetos Genoma têm por objetivo definir a seqüência gênica dos microorganismos e tentar utilizar estas informações em diversas áreas. Como por exemplo: Agricultura: controle de pragas, inseticidas mais eficientes; Objetivo Medicina: patogenicidade, resistência a antibióticos, melhoria e simplificação de métodos de diagnóstico, novas terapias; Indústria: farmacêutica (novos alvos ou aumento na produção de metabólitos), alimentícia, têxtil. Método Seqüenciamento genômico completo por fragmentos aleatórios de DNA (Whole Genome Shotgun Sequencing) Etapas Isolar o DNA do microorganismo; Elaborar bibliotecas de DNA genômico para servirem como molde para o posterior seqüenciamento; Etapas Seqüenciamento automatizado do DNA pelo método de terminação da cadeia (Método de Sanger); Etapas Identificação dos genes (regiões codificadoras); Programas: Glimmer e GeneMark Glimmer: procura na seqüência genômica grandes ORFs (Open Reading Frame região de leitura aberta) Etapas Determinar a função biológica do gene, ou seja, fazer a anotação do genoma; As seqüências são comparadas com outras de função conhecida. Existem bancos públicos de proteínas, como o Genbank e o Swiss Prot, que são comumente utilizados como base de comparação. Linha do Tempo 1990: Início dos estudos de seqüenciamento do genoma; 1995: Haemophilus influenzae; 1996: S. cerevisiae; 1997: E. coli; 2000: D. melanogaster (mosca das frutas); 2001: Esboço de H. sapiens; 2003: H. sapiens completado; O Brasil é pioneiro Seqüenciamento completo do genoma de um fitopatógeno - a bactéria Xylella fastidiosa, causadora da praga do amarelinho Projeto financiado pela Fapesp (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo) Genoma Xylella (1997-2000) Não havia no mundo outra pesquisa de seqüenciamento de um fitopatógeno Importância econômica, já que cerca de 30% dos laranjais paulistas são afetados pelo amarelinho O tamanho de seu genoma era relativamente pequeno - 2,7 milhões de pares de bases Projeto Genoma Brasileiro Lançado em dezembro de 2000 pelo MCT (Ministério da Ciência e Tecnologia) e CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico ) Conta com a participação de 25 laboratórios de biologia molecular e um de bioinformática, distribuídos em todas as regiões do país Rede Nacional do Projeto Genoma Brasileiro Uma bactéria estratégica Possui grande potencial biotecnológico Sintetiza violaceína que tem ação antibiótica em Trypanosoma cruzi (Mal de Chagas) e em protozoários do gênero Leishmania (leishmaniose) Uma bactéria estratégica Sintetiza peptídeos com ação antitumoral Tem capacidade de produzir plásticos biodegradáveis Pode reduzir impactos em áreas de garimpo (limpeza de áreas poluídas com metais pesados ou ajudar a unir partículas de ouro em áreas de mineração) Uma bactéria estratégica O Projeto foi concluído em 1 ano (2000- 2001) Envolveu cerca de 200 cientistas O investimento foi de R$ 11.990.074,84 (Fonte: CNPq) Outros Projetos Xanthomonas axonopodis patovar aurantifolii, cepas B e C (cancro cítrico) – Fapesp e Fundecitrus Baculovírus anticarsia (vírus da lagarta da soja) universidades de São Paulo (USP), Mogi das Cruzes (UMC), Brasília (UnB), Flórida (EUA) e Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia Alguns organismos cujos genomas foram completamente seqüenciados Organismo Tamanho do genoma Interesse biológico (milhões de pares de bases) Mycoplasma pneumoniae 0,8 Causa pneumonia Treponema pallidum 1,1 Causa sífilis H. pilori 1,7 Causa úlcera gástrica Methanococcus jannaschii 1,7 Cresce a 85°C Plasmodium falciparum 23 Causa malária Pós-genoma O desafio agora são as proteínas – conhecer o proteoma Conhecer a estrutura tridimensional de uma proteína é essencial, pois ela vai determinar sua função no organismo – interesse da indústria farmacêutica para fabricação de novas drogas Como decifrar a estrutura 3D das proteínas 1 – Codificação O gene que codifica a proteína é introduzido numa bactéria. E ela produz a proteína como se fosse parte de seu metabolismo 2 – Cristalização A proteína é isolada, purificada e cristalizada: um processo que pode levar anos para ser concluído 3 – Análise pelos raios X Submetidos aos raios X, os cristais produzem um padrão de difração, que depende da forma tridimensional da proteína 4 – Modelagem A análise do padrão de difração permite, então, construir um modelo da estrutura 3D da proteína Laboratório Nacional de Luz Síncrotron Localizado em Campinas Equipamento de raios X de alta definição O tamanho é comparado a um campo de futebol Aplicação Os pesquisadores brasileiros vêm se concentrando nas doenças tropicais, que afetam diretamente a população mais pobre Já determinou-se a estrutura 3D da proteína associada ao Tripanosoma cruzi (Doença de Chagas) e selecionou-se moléculas capazes de inibi-la Há trabalhos com a adeninafosforibosil transferase, a proteína associada à Leishmania (leishmaniose) GenoProt É uma iniciativa do MCT que tem como objetivo integrar as ações já concluídas em genômica com os estudos avançados de proteoma Participam as seguintes redes estaduais de pesquisa em proteoma: Amazonas (fruto do guaranazeiro - Paullinia cupana), Bahia, Goiás (Paracoccidioides brasilienses ), Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro Bibliografia Lehninger. Princípios de Bioquímica. 4.ª ed. Savier – SP, 2006. Páginas 4; 36 – 37; 320 - 321 Glossário. Conselho de informações sobre Biotecnologia. http://www.cib.org.br/glossario.php?letra=G Seqüenciamento e Bioinformática de Genomas Bacterianos http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio28/28_seque.asp Projeto Genoma http://www.comciencia.br/reportagens/genoma/genoma1.htm Redes Genômicas http://www.mct.gov.br/index.php/content/view/5142.html Excelência em escala nacional http://ftp.mct.gov.br/especial/genoma.htm Resultados do Projeto Genoma Brasileiro são publicados no PNAS http://www.memoria.cnpq.br/noticias/190903.htm Brasileiros seqüenciam primeiro genoma de vírus na América Latina http://www.seedquest.com/News/releases/2004/february/7821.htm Seqüenciamento genético de duas bactérias amplia frentes de combate ao cancro cítrico http://www.unicamp.br/unicamp/unicamp_hoje/ju/agosto2005/ju297p ag03.html Pós-genoma O desafio agora são as proteínas http://galileu.globo.com/edic/109/rep_genetica.htm GenoProt http://www.mct.gov.br/index.php/content/view/5680.html