Contraste em microscopia óptica - CCS-UFPB

Processamento de
tecidos duros: técnica
de descalcificação
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Ação dos descalcificadores sobre os
componentes do tecido.
2)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados;
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
2) Ação dos descalcificadores sobre os
componentes do tecido
-
•
•
distorção;
maceração;
vacuolização;
contração;
inchação.
Os riscos são maiores quando o tempo de ação do
descalcificador é prolongado.
tamanho recomendável da peça: 2 mm x 2 cm x 2 cm.
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
2) Ação dos descalcificadores sobre os
componentes do tecido
•
Peças espessas expostas por longo tempo ao agente
descalcificador: maceração periférica pode prejudicar
coloração pela eosina.
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: agentes
-
ácido nítrico;
ácido hidroclorícrido;
ácido sulfúrico;
ácidos orgânios: ácido acético e ácido tricloroacético
(rápida descalcificação, boa preservação, mas há
inchaço);
Ácidos inorgânicos: maior porder de descalcificar, mas
causam mais danos aos núcleos;
Ácidos orgânicos: causam mais inchaço nas fibras,
porém preservam melhor os núcleos.
-
-
•
•
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: descalcificador Morse
Minimiza a contração celular e o inchaço das fibras
- indicado para peças espessas (nenhum lado é menor
que 2 mm);
a) fixação em formol a 10%;
b) solução: 50% de ácido fórmico a 45% + 50% de citrato
de sódio a 20% (soluções ficam separados antes do
uso);
aplica-se solução 10x o volume do tecido, trocando a
solução diriamente;
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: Morse, tempo de descalcificação
Amostra
tempo
dente único extraído
7-14 dias
dente único com osso adjacente 14-30 dias
dois dentes
30-40 dias
3-6 dentes
1-2 meses
mandíbula de rato
1-2 dias
cabeça de rato
3-5 dias
Técnica de descalcificação
Pontos
importantes
1)Obtenção
de secções finas de tecidos
mineralizados: descalcificador Morse
d) teste químico de descalcificação:
- a 5 ml do descalcificador usado, adiciona-se 1 ml de
hidróxido de amônia e mistura-se;
- adiciona-se 1 ml de solução saturada de oxalato de
amônia; precipitado se forma se houver cálcio.
Adiciona-se 1 ml de oxalato de amônia a cada 15-20
minutos até completar 4 ml. Se não houver precipitado
com 4ml, deixa-se a peça no ácido por 48h até fazer outro
teste. Em case de teste negativo por 3 dias, pode-se passar
para desidratação.
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: descalcificador Morse
Minimiza a contração e o inchaço
d) lavagem em água corrente por 5 a 24 h, logo após o
teste de descalcificação: remove reagentes que possam
interferir com os próximos passo;
e) desidratação:
etapa I, álcool 30%, 50% e 70% por 24 h;
etapa II, soluções 1-6 de álcool n-butílico, cada uma
por 48h. Menos danoso à fixação inicial.
* Tempo pode ser reduzido para peças pequenas.
f) infiltração com parafina por 5-24 h.
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: Morse, soluções de álcool nbutílico
Agente
água dest. (ml)
etanol 95% (ml)
n-butílico (ml)
1
30
50
20
solução
2
3
15
50
45
35
55
4
25
74
5
100
.
6
100
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: descalcificador ácido nítrico +
formaldeído
rápida descalcificação e preservação da matriz protéica
indicado para peças delgadas (um lado é menor que 2
mm);
a) fixação em paraformaldeído 2%/ 0,5% glutaraldeído
(inativa enzimas);
b) solução: ácido nítrico a 5% / formaldeído 4% (soluções
ficam separados antes do uso);
aplica-se solução 10x o volume do tecido por cerca de
6 h;
c) teste químico de descalcificação.
-
Técnica de descalcificação

Pontos importantes
1)
Obtenção de secções finas de tecidos
mineralizados: descalcificador ácido nítrico +
formaldeído
d) lavagem em álcool etílico 70%;
e) desidratação;
f) infiltração com parafina por 5-24 h.