Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a

Avaliação dos efeitos genotóxicos da
exposição ocupacional a pesticidas
sobre agentes sanitários da Fundação
Nacional de Saúde do Estado de
Minas Gerais
Fernanda de Souza Gomes Kehdy
Orientadora: Profª Maria Cristina Lima de Castro
Co-orientadora: Profª Cleusa Graça da Fonseca
Introdução
•
Pesticidas
•
Seletividade dos pesticidas
Risco tóxico para humanos
Introdução
•
Tipos de intoxicações:
-
Aguda
-
Sub-crônica
-
Crônica
Introdução
Potencial genotóxico
CARCINOGÊNESE
• Biomonitoramento genotoxicológico
Introdução
•
Biomarcadores:
- análise de aberrações cromossômicas;
- análise de troca entre cromátides irmãs;
- frequência de micronúcleos;
Introdução
•
Micronúcleos:
•
Efeito aneugênico
Introdução
•
Micronúcleos:
•
Efeito clastogênico
Introdução
agentes clastogênicos
•
Micronúcleos
agentes aneugênicos
- Teste de genotoxicidade in vitro;
- Biomarcador p/ efeito de exposição a
genotóxicos;
(Norppa et al.,2003)
Introdução
•
Vantagens do teste do micronúcleo:
- Mais simples;
- Treinamentos mais curtos;
- Mais rápido;
- Requer menos custo;
- Maior poder estatístico;
Introdução
•
Fator de risco p/ câncer
Inibição do ciclo celular
Danos ao DNA
p53
Ativação
oncogenes
p53;
Reparo do DNA
Apoptose
Introdução
•
p53:
- Gene TP53;
- Cromossomo17p13.1;
- 393 aminoácidos;
p53
Polimorfismo
Pro72
Arg72
Apoptose
Introdução
•
-
-
Estado de Minas Gerais:
~ 3000 agentes sanitários vinculados à
FUNASA – aplicam pesticidas para o controle
de vetores de doenças (180 reg. metropolitana)
Sexo masculino
Idade: 30 a 50 anos
Pesticidas: piretróides e organofosforados
Não foi feita análise dos efeitos genotóxicos
dos pesticidas sobre estes trabalhadores;
Introdução
N ° indiv.
(exp/cont)
Exposição
Duração
(anos)
Biomarcador
Resultado
Referência
50/47
Piretróides,
DDT
1-25
CA
Pos
(Ruppa et
al.,1989)
26/26
Piretróides,
organofosfo
rados
2-18
CA
Pos
(Ruppa et
al.,1991)
48/50
Piretróides,
organofosfo
rados
4-50
SCE
Neg
(Pasquini et
al.,1996)
22/16
Piretróides,
organofosfo
rados
7
MN
Neg
(Venegas et
al.,1998)
71/75
Piretróides,
organofosfo
rados
2-55
MN
Pos
(Bolognesi
et al.,1998)
Introdução
•
Falta de concordância entre os resultados:
- diferentes condições de exposição (magnitude,
uso de equipamentos de proteção);
- nº de pesticidas utilizados;
- combinação de pesticidas;
- tempo e frequência de exposição;
- características do indivíduo (idade, sexo, hábito de
fumar e ingerir
nutricional);
bebidas
alcoólicas,
estado
(Bolognesi, 2003)
Objetivo geral
Avaliar os efeitos genotóxicos da exposição
ocupacional a pesticidas em agentes sanitários
vinculados
à
FUNASA,
através
do
biomonitoramento genotoxicológico destes
indivíduos, utilizando como biomarcador a
frequência de micronúcleos em cultura de
linfócitos isolados e estabelecer o genótipo do
gene TP53 em relação ao polimorfismo do
códon 72 para fins prognósticos.
Objetivos específicos
•
•
•
•
•
•
Delineamento das amostras;
Padronização das condições de cultura de linfócitos
isolados;
Produção de lâminas;
Determinação da frequência de MN;
Verificação, através de testes estatísticos, de relação
entre a frequência de MN e exposição a pesticidas;
Amplificação, través de PCR, de fragmento do TP53
para detecção do genótipo em relação ao códon 72;
Metodologia
1)
-
-
Grupos amostrais:
Grupo experimental: 30 agentes sanitários
vinculados a FUNASA, do sexo masculino,
idade entre 30 e 50 anos, ocupacionalmente
expostos a pesticidas;
Grupo controle: 30 indivíduos do sexo
masculino, idade entre 30 e 50 anos, sem
história de exposição a pesticidas;
2) Entrevista. (idade, hábitos e exposição)
3) Teste do MN
Metodologia
1
A
B
C
D
2
3
4
5
6
Metodologia
Tempo de cultura (h)
0
Substâncias a serem
acrescentadas na cultura
PHA
24
48
Ct-B
72
96
Colher células
(Adaptado de Fenech,2000)
Metodologia
Célula binucleada
Metodologia
•
-
-
Características do Micronúcleo:
Morfologia idêntica a dos núcleos principais;
Diâmetro entre 1/16 e 1/3 dos núcleos
principais;
Mesma coloração dos núcleos;
Não apresentar refringências;
Não estar conectado a um dos núcleos;
Não estar sobreposto a nenhum dos núcleos;
(Fenech, 2000)
Metodologia
•
Parâmetros a serem considerados:
- Frequência de MN/1000 cél. binucleadas;
- Frequência de células binucleadas
micronucleadas/1000 cél. binucleadas;
- Distribuição de cél. binucleadas com 0, 1, 2, 3
ou mais MN;
(Fenech, 2000)
Metodologia
Célula binucleada apresentando 1 MN
Metodologia
Célula binucleada apresentando 2 MN
Metodologia
Células binucleadas apresentando 3 MN
Metodologia
Células binucleadas apresentando mais de 3 MN
Metodologia
4) Análises estatísticas:
-frequência de MNs
- idade
- hábito de fumar
- ingestão de bebidas alcoólicas
- exposição a pesticidas
(tempo e frequência)
Teste do
qui-quadrado
Metodologia
5) Amplificação do TP53:
Metodologia
Primers
Sequência
Tamanho do
produto
p53+/p53Arg-
p53+: 5’TCCCCCTTGCCGTCCCAA
p53Arg-: 5’ CTGGTGCAGGGGCCACGC
Alelo Arg
141 pb
p53Pro+/p53-
p53Pro+: 5’GCCAGAGGCTGCTCCCCC
p53-: 5’CGTGCAAGTCACAGACTT
Alelo Pro
177pb
Metodologia
6) Aspectos éticos:
- Consentimento livre e esclarecido;
- Princípios éticos, aprovados pelo Comitê de Ética
em Pesquisa da UFMG.
Obrigada!!!