Micro aula 4 - Coloração de Gram

UPC II – Microbiologia
Aula prática 4
2014/2015
Maria José Correia
21/10/2014
Sumário P4:

Identificação preliminar dos
microrganismos isolados na aula anterior:



5/01/2014
Observação das placas obtidas na aula anterior
Coloração de Gram de uma das colonias isoladas.
Repicagem da colónia escolhida correspondente a um
Streptococcus ou Staphylococcus.
UPC II - Microbiologia 2014/2015
2
Observação das placas obtidas na
aula anterior



Houve crescimento?
Houve contaminação?
Há colónias isoladas?


7/10/2013
Registe o seu aspeto e tamanho
relativo,
Proceda à coloração de uma delas.
UPC II - Microbiologia 2013/2014
3
Técnicas de coloração
o Permitem revelar a forma, a dimensão e os
componentes das células bacterianas, bem como, os
aspetos bioquímicos da sua estrutura.
o Permitem observar células bacterianas em
microscopia de campo claro.
o Como o índice de refração do protoplasma
bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é
difícil o exame direto de preparações não coradas, a
não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação.
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
4
Técnicas de coloração
7/10/2013

Preparação do esfregaço

Fixação do esfregaço

Coloração

Observação ao microscópio
UPC II - Microbiologia 2013/2014
5
Preparação e fixação do esfregaço
o Preparado sobre uma gota de água
abrangendo uma superfície de 1 cm2
o As lâminas usadas devem ser limpas
o Fixação pelo calor em movimentos circulares.
o Evitar aquecer demasiado a preparação para
não destruir as células
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
6
Coloração de Gram
• Coloração diferencial
• Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram• Indispensável na identificação bacteriana
Gram +
Gram -
http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
7
Bactérias Gram+ e Gram
Composição diferente da parede celular

Gram+: Parede homogénea e espessa, formada
essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem
de lipoproteínas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina,
camada externa complexa, formada por lipoproteínas e
polissacarídeos
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
8
Coloração de Gram
dH2O
dH2O
Violeta de
cristal
Lugol
(iodo)
Álcool
Safranina
1 minuto
1 minuto
30-60 segundos
30-60 segundos
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
9
7/10/2013
UPC II - Microbiologia 2013/2014
10