biotecnologia Fingerprint – impressão digital genética Hibridação in situ - Mapeamento dos genes nos cromossomos Terapia gênica Vacinas gênicas Recuperação de espécies em extinção 31/08/12 fingerprint • Fingerprint: a ‘impressão digital’ genética seria feita com base em sequências repetidas de nucleotídeos exclusivas para cada pessoa. • Esses trechos de DNA são cortados usando enzimas de restrição específicas. • O material genético é colocado em uma placa de gel (no vídeo, gel de agarose, que forma uma rede) e exposto a uma diferença de potencial, fazendo-o migrar na direção do polo positivo. • Os diferentes fragmentos de DNA apresentam massa e formato diferentes, de modo a atravessar a placa em diferentes velocidades. A esses diferentes fragmentos são associadas sondas (fitas complementares de DNA marcadas radioativamente), de maneira que as ‘bandas’ formadas possam ser visualizadas; • Uma folha especial (de um material pelo qual o material genético tem afinidade) é colocada sobre a placa de gel e as diferentes bandas sobem (por capilaridade) marcando-a; • O resultado é uma imagem semelhante a um código de barras, que pode ser utilizada para identificação de pessoas, testes de paternidade, investigação de crimes e outros. http://www.youtube.com/watch?v=VWAMz6WLwM0&feature=related hibridação in situ Técnica que permite a localização de genes no cromossomo; escolhem-se os genes de interesse e são produzidas sondas (sequências conhecidas de bases nitrogenadas): • A partir de proteínas: produz-se em laboratório uma molécula de cadeia simples de DNA com a sequencia do gene (ou cjto. de genes) responsável pela tradução desta proteína. Esta molécula é replicada em meio com fósforo radioativo ou corantes fluorescentes; • A partir do mRNA: o mRNA é separado a partir de uma célula em intensa atividade (maior quantidade de mRNA) e transferido para um recipiente com bases nitrogenadas e a enzima transcriptase reversa (isolada de um retrovírus), formando assim cadeias simples de DNA, que serão replicadas em meio com fósforo radioativo ou corantes fluorescentes; Mapeamento dos genes no cromossomo: Células são retiradas de um organismo e estimuladas a realizar a mitose (meio rico em nutrientes); O processo é interrompido durante a metáfase utilizando-se a colchicina (substância que impede a formação do fuso mitótico); esses cromossomos são separados e a preparação é aquecida para que a dupla-hélice do DNA se abra; As sondas são colocadas em contato com o DNA (emparelhandose com os genes de interesse) e a enzima DNA ligase, marcando os genes nos cromossomos. biotecnologia Terapia gênica Substituição dos alelos que causam a doença por alelos normais; Possibilidade de troca dos genes em células somáticas no embrião; Doenças causadas por apenas um gene. Vacinas gênicas Nosso organismo produz anticorpos estimulado, muitas vezes, por proteínas do patógeno; Os genes relacionados a essas proteínas são isolados; Clonagem desses genes em bactéruias e purificação do produto para atuar como vacina; Ex.: vacinas contra a hepatite B e meningite. Recuperação de espécies em extinção Recuperação dos genes de animais extintos; Seleção de organismos aparentados para doação de ovócitos e para atuarem como mães de alguel (em tese) Sêmen 5. O que é biotecnologia? 6. Em um caso de estupro, foi feito o DNA fingerprint do sêmen encontrado na vagina da vítima e de três suspeitos (figura à direita). a) Qual dos suspeitos é o culpado? b) O que é o DNA fingerprint? 7. No mapeamento de genes no cromossomos, qual é o papel das sondas e como elas podem ser produzidas? 8. O que é terapia gênica? 9. Como seria possível a produçãod e uma vacina gênica? Suspeito 1 Suspeito 2 Suspeito 3 Questionário