Baixar este arquivo PDF

INFLUÊNCIA DA PRIMEIRA CLIVAGEM SOBRE O POTENCIAL DE
DESENVOLVIMENTO DE EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS IN VITRO
Inayá Vidal Soares Campos(1), Cecilia Isabel Inês Urquiza Machado Pavin(2), Fabio
Gallas Leivas(3), Daniele Missio(4), Daniela dos Santos Brum(5)
(1)
Discente do curso de Medicina Veterinária, bolsista do Laboratório de Biotecnologia da Reprodução; Universidade
Federal do Pampa; Uruguaiana, RS; [email protected];
(2)
Médica Veterinária; Renascer Biotecnologia; Uruguaiana, RS;
(3)
Docente do curso de Medicina Veterinária; Universidade Federal do Pampa; Uruguaiana, RS;
(4)
Co-orientadora, Mestranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal; Universidade Federal do Pampa;
Uruguaiana, RS;
(5)
Orientadora; Universidade Federal do Pampa; Uruguaiana, RS.
Palavras-Chave: produção in vitro, desenvolvimento embrionário, clivagem embrionária.
INTRODUÇÃO
A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotécnica da reprodução assistida que envolve três
processos: maturação in vitro (MIV) dos oócitos, fecundação in vitro (FIV) dos oócitos, e o cultivo in vitro
(CIV), que compreende o desenvolvimento embrionário. A PIV vem sendo amplamente utilizada na
produção de bovinos, permitindo maximizar o potencial reprodutivo de fêmeas através da obtenção de um
maior número de embriões, gestações e nascimentos de uma única doadora em um curto período de
tempo.
Diferentes fatores interferem na competência de desenvolvimento do embrião in vitro. Em revisão
realizada por Hoelker e colaboradores (2014), foi demonstrado que um dos principais critérios para
determinar a qualidade dos embriões é o momento em que iniciam as divisões morfológicas. Havendo uma
relação positiva entre o momento da primeira clivagem embrionária e a capacidade de desenvolvimento in
vitro (LONERGAN et al., 1999). Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre o
momento da primeira clivagem e o potencial de desenvolvimento embrionário na PIV de embriões bovinos.
METODOLOGIA
Foram realizadas 5 repetições, onde cento e cinquenta complexos cumulus-oócito (CCO) obtidos a
partir de ovários de abatedouro foram maturados durante 24 horas em meio TCM199, acrescido de
Hormônio Luteinizante (LH), Hormônio Folículo Estimulante (FSH), Fator de Crescimento Epidermal (EGF) e
Soro de Égua em Estro (SEE), em estufa a 39ºC, umidade saturada e 5% CO 2 em ar. Decorrida a MIV, os
oócitos foram transferidos para o meio Fert-TALP com heparina e PHE (Penicilamina, Hipotaurina e
Epinefrina), onde foram co-incubados por 18 horas com sêmen de dois touros Bos taurus, previamente
selecionado pelo método de centrifugação com gradientes descontínuos de mini-Percoll (GUIMARÃES et
6
al., 2014). A dose inseminante utilizada foi de 1x10 espermatozoides/ml, sendo o dia da FIV considerado o
dia 0 (D0) do desenvolvimento embrionário. Após o período de FIV, os prováveis zigotos foram cultivados
em meio SOFaaci (Fluido Sintético de Oviduto, suplementado com aminoácidos, citrato e mioinositol; HOLM
et al., 1999), acrescido de SEE e Albumina Sérica Bovina (BSA) em poços individuais, recobertos por óleo
mineral e acondicionados em incubadora mantida a 39ºC, 5% de CO2 em ar e umidade saturada, sob
sistema de monitoramento embrionário (Primo Vision, Cryo Mangement Ltda, Hungria), onde foi realizada a
captura de imagens dos embriões a cada 5 minutos. De acordo com o momento da primeira clivagem os
embriões foram divididos em três grupos: T1 (embriões que clivaram até 28 horas), T2 (embriões que
clivaram entre 28 e 32 horas) e T3 (embriões que clivaram entre 32 e 36 horas). O desenvolvimento
embrionário foi avaliado até o dia 7 do cultivo (D7) quanto às taxas de Mórula (Mo), Blastocisto inicial (Bi),
Blastocisto (Bl) e Blastocisto expandido (Bx). A análise estatística foi realizada através do teste de qui2
quadrado (X ), com significância de 5%.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Neste trabalho, os embriões que clivaram até 32 horas (T1 e T2) obtiveram maior taxa de embriões
produzidos quando comparados com os que tiveram a primeira clivagem entre 32 e 36 horas (T3; Tabela 1).
Os dados obtidos corroboram com resultados encontrados por outros autores que relatam que o momento
da primeira clivagem embrionária está intimamente relacionado com o potencial para o desenvolvimento
Anais do 8º Salão Internacional de Ensino, Pesquisa e Extensão – Universidade Federal do Pampa
futuro, sugerindo que quanto mais precoce for o início da divisão, maiores são as chances de
desenvolvimento até o estádio de blastocisto e maior a tolerância do embrião à criopreservação
(LONERGAN et al., 1999; BARRETA et al., 2012).
Tabela 1 – Estádio de desenvolvimento embrionário em D7, de acordo com o momento da primeira
clivagem: até 28 horas (T1), entre 28 e 32 horas (T2) ou entre 32 horas e 36 horas (T3).
Estádio de
Desenvolvimento
Mórula
Blastocisto Inicial
Momento da primeira clivagem (%)
T1
a
9,75
T2
a
9,75
ab
13,01
5,70
Blastocisto
5,70
Blastocisto Expandido
0,81
Total de embriões
produzidos
21,96
a
0,81
24,38
b
2,43
0,81
0,81
a
T3
b
1,62
0
a
b
4,86
abc
Letras diferentes na mesma linha indicam diferença (P<0,05).
Fonte: Elaborado pelo autor.
CONCLUSÕES
O momento da primeira clivagem tem relação direta com o potencial de desenvolvimento futuro do
embrião, visto que, embriões que clivam mais cedo demonstram maior capacidade de desenvolvimento até
o estádio de blastocisto.
REFERÊNCIAS
BARRETA, M. H.; GASPERIN, B. G.; RISSI, V. B. et al. Homologous recombination and non-homologous end-joining
repair pathways in bovine embryos with different developmental competence. Experimental Cell Research, 318, 20492058, 2012.
GUIMARÃES, A. C.; LEIVAS, F.G.; SANTOS, F.W. et al. Reduction of centrifugation force in discontinuous percoll
gradients increases in vitro fertilization rates without reducing bovine sperm recovery. Animal Reproduction Science,
146, 103-110, 2014.
HOELKER, M.; HELD, E.; SALILEW-WONDIM, D. et al. Molecular signatures of bovine embryo developmental
competence. Reproduction, Fertility and Development, 26, 22-36, 2014.
HOLM, P.; BOOTH, P. J.; SCHMIDT, M. H. et al. High bovine blastocyst development in a static in vitro production
system using sofaa medium supplemented with sodium citrate and myo-inositol with or without serum-proteins.
Theriogenology, 52, 683-700, 1999.
LONERGAN, P; KHATIR, H.; PIUMI, F. et al. Effect of time interval from insemination to first cleavage on the
developmental characteristics, sex ratio and pregnancy rate after transfer of bovine embryos. Journal of Reproduction
Fertility, 117, 159-167, 1999.
Anais do 8º Salão Internacional de Ensino, Pesquisa e Extensão – Universidade Federal do Pampa