Aula 5 reagentes não marcados Reações de precipitação e
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1- REAGENTES NÃO MARCADOS 2- REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO E AGLUTINAÇÃO Prof. Dr. Fernando Ananias Interação reversível Complementariedade Especificidade Ligações: •Pontes de Hidrogênio • Ligações iônicas • Interações hidrofóbicas • Interações de Van der Waals 1 Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo). Avidez Força de interações total entre Ac e Ag. Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Reação cruzada Dois Ag diferentes apresentam um epítopo idêntico Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares. Aplicações Pesquisa Diagnóstico Soroepidemiológia Métodos: Precipitação Aglutinação Imunoensaios 2 Metodologias que utilizam: 1) Reagentes não marcados • Reação de precipitação • Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados • RIA • ELISA • Imunofluorescência • Western Blot Reagentes não marcados Detectam / quantificam as conseqüências da ligação Ag – Ac 3 Reação de Precipitação Interação: ac - ag solúvel forma uma rede que pode desenvolver um precipitado visível. Anticorpos bivalentes + Antígenos multivalentes PRECIPITADO 1- Reação de precipitação em soluções Reação quantitativa: •Qtidade cte Ac •Qtidade cresc. Ag Qtidade precipitina 4 2 - Reação de Precipitação em gel Utiliza uma matriz de ágar Ag + Ac = linha de precipitação visível a) Imunodifusão radial (Método de Mancini) • Ag ou Ac fixos • Dosagem de proteínas séricas b) Imunodifusão dupla • Identidade de Ags = Ac de reatividade conhecida Reações de Aglutinação Ac + Ag particulado aglutininas Agregação visível de partículas Eritrócitos Bactérias Fungos látex • Efeito pró-zona 5 Aglutinação Direta Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação • Detecção Acs específicos • Quantificação Tipagem ABO Testes confirmatórios para sífilis Aglutinação bacteriana Presença de infecção Diferenciação de espécies 6 Aglutinação passiva Ag solúveis associados a outras superfícies (Partículas de látex ou superfície de hemácias) + Inibição da Aglutinação 7
