PGD para doenças monogênicas

 PGD para doenças monogênicas
1. Apresentação. O que é? O diagnóstico genético pré‐implantatório (PGD) é um processo associado a uma análise genética de fertilização in vitro. Análise de embriões por meio de técnicas de reprodução assistida é feito antes ocorrer a implantação do embrião e compreende: cultura de embriões prolongada, biópsia do embrião, a análise genética dessas amostras e transferência de embriões normais ‐ incluindo a vitrificação ou congelamento embriões normais não transferidos. Doenças hereditárias monogénicas são doenças genéticas causadas por alterações na sequência de DNA de um gene em particular. Estas mutações são geralmente transmitidas na família por gerações, mas também é possível que aparecem pela primeira vez na prole de um casal ou individuo (mutação de novo). 2. Objetivo. Para que serve? PGD para doenças monogênicas tem como objetivo analisar uma coorte de embriões para evitar a transmissão para a prole de uma doença hereditária presente na família, casal ou indivíduo. Isto é conseguido através da análise e classificação de embriões em aqueles que não herdaram a mutação em estudo, e, portanto, não possuem a doença, e se aqueles que têm a mutação(s) e são geneticamente anormal. Embriões geneticamente normais são candidatos a serem transferidos para o útero. 3. Indicações. Para quem e por que? Este tipo de PGD está indicada para casais com famílias de alto risco para doenças monogênicas graves, como a fibrose cística, síndrome de X frágil, atrofia/distrofias musculares, Huntington, etc. 4.Vantagens. Quais vantagens possuem sobre outros testes? A principal vantagem deste tipo de análise genética, é que ela permite que o estudo de vários embriões in vitro para determinar aqueles que são geneticamente normais e, por consequência, candidatos de transferência uterina. Isso evita que casais com alto risco genético tenham que passar por interrupção da gravidez por um feto anormal. 5. Amostras. Como?? PGD para doenças monogênicas tem duas fases: ( a) validação de teste genético e ( b) análise genética de embriões . • O teste de validação é efetuado antes do início do ciclo de reprodução assistida e requer amostras de sangue a partir do casal, e de preferência, a família relevante para esse assunto. Distinguir entre (i) teste de informatividade, uma análise genética de DNA genômico para os casos mais comuns de doenças , tais como a fibrose cística , a atrofia muscular espinal , Huntington , etc, e (ii) o desenvolvimento de um protocolo de análises genéticas de uma célula, para casos de doenças mendelianas de raras. • No que diz respeito à análise de embriões, a amostra biológica obtida por biopsia embrionária é recolhida num microtubo com uma solução de lise ou estéril, por protocolo, transportados em um recipiente frio/congelado. Depois de recebida, a amostra é mantida a ‐20 º C até processamento utilizando as técnicas de genética molecular. 6. Envio. Como, quando, onde e quem? As amostras de sangue ou de células bucais para testes genéticos de validação são enviados à temperatura ambiente ou refrigerados a 4 ° C. Amostras de embriões congelados são transportados em um contêiner especial frio (‐20oC ) e bem protegida para evitar quebras. É enviado imediatamente após a biópsia. O endereço de entrega é IGENOMIX, Rua Desenbargador Eliseo Guilherme, 304 4Andar São Paulo‐ sp. www.igenomix.com 7. Processamento de amostras e entrega de resultados. Quando? Testes de validação de teste para informatividade são feitas até 7 dias úteis. O desenvolvimento de PGD ou protocolo de célula única é necessária cerca de 2 meses antes de se iniciar o ciclo de reprodução assistida. A análise embrionária, o teste genético compreende entre 24‐48h para o estudo e apresentar resultados. • Metodologia • A lise celular • Amplificação por PCR Multiplex Fluorescente • Primeira rodada de PCR multiplex • Segunda rodada de PCR nested/heminested; simplex ‐ multiplex • Processamento de produtos de PCR (restrição , minisequenciamento , etc) • Análise automática por eletroforese capilar (CE ) 8. Como começar? Contate‐nos [email protected] ou [email protected] 9. FAQ's Para realizar PGD para doenças monogênicas é um pré‐requisito para ter identificado a mutação ou mutações causando a doença? Tendo identificado a mutação é sempre conveniente. Mas há casos da doença em que se você tiver um relatório clínico preciso e desde que seja um evento familiar (vários membros de uma mesma família são afetados, de preferência em diferentes gerações) pode ser usado análise indireta para fornecer a análise por PGD. Exemplos dessa estratégia seria casos familiares indiretos de doença renal policística autossômica dominante familiar; neurofibromatose tipo 1 familiar; síndrome de Marfan familiar etc . Se este é um caso de novo ‐ sem antecedentes na família, é essencial ter identificado a mutação causadora da doença . Um casal fértil com uma história para essas doenças genéticas podem ser realizadas PGD? Embora PGD está ligada à reprodução assistida, casal fértil pode também usar esta análise genética para evitar ter uma prole afetada. Assim é assegurada uma gestação de um feto sem a doença ignorando as decisões de aborto. Se eu já fiz um teste em outro centro PGD devo realizar o teste novamente após a validação de ciclo PGD? Provavelmente vamos ter que repetir o teste de validação. Isso ocorre porque os centros utilizam‐se estratégias de análise equivalentes, mas não necessariamente idênticos. Por exemplo, para cada caso, existem vários marcadores genéticos que são utilizados para garantir uma elevada confiabilidade do diagnóstico; marcadores escolhidos por um centro ou outro podem ser diferente e as novas informações obtidas vão exigir um novo teste de informatividade. www.igenomix.com