Apresentação do PowerPoint

Microbioma Intestinal: Consequências
da Disbiose no Início da Vida
Declaração de Conflitos de Interesse
Cargos
Presidente Departamento Científico de Suporte Nutricional da SBP
Coordenador dos Deptos. Cientificos SPSP
Presidente Depto. Científico de Nutrologia da SPSP
Assessor de Pediatria da FELANPE- Fed. Latino Americana de Nutrição
Clínica Metabolismo e Terapia Nutricional
Coordenador Científico Força Tarefa Nutrição Infantil ILSI-Brasil
Apoio Educacional
Ajinomoto, Baxter, Danone Institute, FreseniusKabi, Mead
Johnson, Nestlé Nutrition, Support, WNutritional
Colonização Bacteriana Intestinal no RN
Gritz E; Bhandari V. Frontiers in Pediatrics 2015; Vol 3 Article 17
Quais são as fontes de bactérias dos recémnascidos?





O mecônio e o líquido amniótico NÃO são estéreis
O parto normal e cesáreo colonizam o RN
respectivamente com bactérias da flora vaginal e da
pele
O leite materno NÃO é um fluído estéril
O berçário e UTI neonatal NÃO são estéreis
Ausência de nutrição enteral NÃO impede
colonização intestinal por bactérias patogênicas
Quantidade de Bactérias no Leite Humano
Contagem na placa
6
5
Log cfu/ ml
5
4,6
4,1
4
3,7
3
2
1
0
1 day
Solis, G, et al. Anaerobe 2010;16:307-10
10 days
1 month
3 months
Bactérias no Leite Humano


Análises de leite materno identificam múltiplas
espécies de bactérias vivas e DNA bacteriano.
Bactérias geralmente isoladas incluem:





Staphylococcus
Streptococcus
Enterococcus
Lactobacillus
Bifidobacterium
Solis, G, et al. Anaerobe 2010;16:307-10
Evolução do Microbioma no Ciclo de Vida
Ottman et al. Frontier Cell Infect Microbiol 2012; 2:104
tipo de parto
prematuridade
exclusão trato GI
jejum/NPP
antibióticos
ambiente da UTI
Preterm
Baby
Toddler
Adult
Elderly
Extração do DNA da
Microbiota Intestinal:
a metagenomica
“high throughput”
sequencing
qPCR for Bactérias Totais e Lactobacillus
quantification
Classificação das Bactérias do Microbioma Intestinal
Gritz E; Bhandari V. Frontiers in Pediatrics 2015; Vol 3 Article 17
Microbioma na criança saudável
Composição da Microbiota Intestinal Identificados nas Bibliotecas 16S
rDNA aos 2, 7 e 30 Dias de Vida em RNDT com LH
Quantificação de bactérias na criança saudável
1,00E+14
1,00E+13
1,00E+12
1,00E+11
1,00E+10
1,00E+09
Bifidobacterium
1,00E+08
Lactococcus
1,00E+07
Lactobacillus
1,00E+06
E coli
1,00E+05
All bacteria
1,00E+04
1,00E+03
1,00E+02
1,00E+01
1,00E+00
2d
7d
1 mo
3 mo
6 mo
12 mo
Predomínio de Firmicutes
e Actinobacteria
Distribuição de Bactérias na Microbiota Intestinal de 340
Pré Termo Determinados por PCR-TTGE
Aujoulat et al. BMC Microbiology 2014; 14:325
RN
Distribuição (A) e Proporção das Bactérias (B) de Maior Frequencia Isoladas
na Microbiota Intestinal de RNPT de 1 à 8 semanas Semanas de Vida
Aujoulat et al. BMC Microbiology 2014; 14:325
Patogenia da Enterocolite Necrosante
Disbiose
Neu J; Walker A: N Eng J Med 2011; 364:255-64
Shelley C Springer. Necrotizing Enterocolitis, 2007. www.emedicine.com/ped/TOPIC2601.HTM
Disbiose e Enterocolite Necrosante (ECN)
XAntibióticos
XColonização patológica UTI
XFalta de diversidade
Leite Humano
Microbioma diversificado
DISBIOSE
LTA
LPS
PAF - AH
TLR?
XFórmula
xLH aditivado
Ativação da cascata
das citocinas
Lesão da mucosa
Imaturidade intestinal
xOsmolaridade
Isquemia
Reperfusão
xProteína heteróloga
Translocação bacteriana
Gibbs K, Lin J, Holzman R (2007)
ECN
LTA=Ácido Lipotéicoico; TLR= Receptor Toll Like LPS= lipossacarídeo
da membrana celular; PAF-AH= Platelet Activating Factor Acetyl-Hydrolase
Composição dos Phylum da Microbiota de RNPT que
Desenvolveram ECN
Mai V et al. (2011) Fecal Microbiota in Premature Infants Prior to Necrotizing Enterocolitis. PLoS ONE 6(6): e20647.
De Meij, 2016
Instituto da Criança UTIN-2
Más formações digestivas
Gastrosquise
Onfalocele
Hérnia diafragmática
Atresia de esôfago...
Redondo AC, Feferbaum R, Vieira RA, et al.
Characteristics of the clinical development of
newborn with gastroschisis in an
intensive care unit in latin america.
J Hum Growth Dev. 2016;26(2):
Panorama da UTI Neonatal
Estudo ICr HCFMUSP/FF USP/FAPESP
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
• Amostra de material fezes/sonda colhidas no mesmo dia
crianças internadas durante o período neonatal entre 0 a 6
meses (n=11)
• Evolução da colonização intestinal de neonatos com más
formações digestórias (onfalocele/gastroquise/hérnia
diafragmática) ao longo do período de internação
• n=85 neonatos com coletas semanais (4 à 22 semanas de
internação)
Panorama da UTI Neonatal: Filos
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
Filos
Filos – principais representantes
Firmicutes Roseburia
Faecalibacterium
Clostridium
Streptotoccus
Staphylococcus
Enterococcus
Proteobacteria
Enterobacterias – Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Não Fermentadores - Acinetobacter
Stenotrophomonas
Bacteroidetes Bacteroides
Prevotella
Actinobacteria Bifidobacterium
Proporção Relativa de Bactérias na Microbiota Intestinal de
Crianças na UTI Neonatal (n=11)
Steno
trophom
onas
E. coli
Acineto
Enterococcus
Enterobacter
Staphylococcus
Compartilhamento da microbiota na UTI Neonatal (n=11)
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
- 18 gêneros foram encontrados em todas as crianças do estudo
As mais abundantes :
Enterobacteria
Streptococcus
Enterococcus
Acinetobacter
Stenotrophomonas
Streptococcus
Outros
Oberauer et al; 2015
Oberauer et al; 2015
Neonato 33
Sequenciamento
RNPT IG 26 sem-Enterocolite necrosante
Jejum+NPP
Vanco
só Vanco*
+ Mero +Mica
fungina
Quantificação de Bactérias Totais
1,00E+12
1,00E+10
1,00E+08
1,00E+06
1,00E+04
1,00E+02
1,00E+00
33.1
33.2
33.3
33.4
33.5
33.6
33.7
Evolução em semanas
*Hemocultura:
Staphylo Epidermidis
Oxa R
33.3 33.4 33.5
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
33.8
Neonato 43-RNDT
Gastrosquise
Quantificação de Bactérias Totais
1,00E+12
1,00E+10
1,00E+08
Sequenciamento
1,00E+06
Jejum e NPP
1,00E+04
Vanco*
+Mero Vanco+ Mero
1,00E+02
1,00E+00
43.1
43.2
43.3
43.4
43.5
Evolução em semanas
*Hemocultura:
Staphylo epidermidis
Oxa R
43.3
43.4
43.5
43.6
43.7
Evolução da Colonização Intestinal
Bactérias Totais
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
Neonato 14 - Gastrosquise
1,00E+12
1,00E+11
1,00E+10
1,00E+09
1,00E+08
1,00E+07
1,00E+06
1,00E+05
1,00E+04
1,00E+03
1,00E+02
1,00E+01
1,00E+00
14.1
14.2
14.3
14.4
14.5
Evolução em semanas
14.6
14.7
14.8
Evolução da Colonização intestinal
Bactérias Totais
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
Neonato 70 - Gastrosquise
1,00E+11
1,00E+10
1,00E+09
1,00E+08
1,00E+07
1,00E+06
1,00E+05
1,00E+04
1,00E+03
1,00E+02
1,00E+01
1,00E+00
70.1
70.2
70.3
70.4
70.5
Evolução em semanas
70.6
70.7
70.8
Evolução da Colonização Intestinal
Quantificação de Lactobacillus
2,8,47,70- Gastrosquise
Neonato 2
Neonato 8
1,00E+04
1,00E+04
1,00E+03
1,00E+03
1,00E+02
1,00E+02
1,00E+01
1,00E+01
1,00E+00
1,00E+00
1
2
3
4
1
2
Neonato 47
3
4
5
Neonato 70
1,00E+04
1,00E+03
1,00E+03
1,00E+02
1,00E+02
1,00E+01
1,00E+01
1,00E+00
1
2
3
4
1,00E+00
1
2
3
4
5
Taddei C; Feferbaum R : dados em publicação 2016
6
7
8
Conclusão Parcial
Diminuição geral do numero de bactérias intestinais
Diminuição da diversidade bacteriana na microbiota intestinal
Bactérias Patogênicas dominam a microbiota fecal de neonatos
críticos em uma UTI neonatal: Isoladas com frequencia na
hemocultura!
Consequencia dos antibióticos, meio ambiente, jejum, nutrição
parenteral prolongada
Probióticos na prática clínica para prevenção da ECN?
H. Szajewska / Early Human Development 86 (2010) S81–S86
Bifidobacterium
Probiotics for prevention of
necrotizing enterocolitis (A)
and mortality (B) in preterm
infants
AlFaleh K, Anabrees J
Cochrane Database Syst Rev. 2014
Apr 10;4:CD005496. doi:
10.1002/14651858.CD005496.pub4
Porém... Diversidade de cepas; isoladas
ou em combinação? Dose? Duração?
Estudos com Probióticos na Prevenção de ECN no RNPT
(1966-2014 ) 20 estudos: n=5982
(Lactobacillus:1058; Bifidobacterium:289; Sacharomyces:239; Mistura:1397)
Lau CMS, Chamberlain RS. Journal of Pediatric Surgery May 2015
Jacobs SE et al. Pediatrics 2013: 132;1055-62 (ProPrems study group :Austr, NZ)
*Composição: Bifidobacterium infantis, Streptococcus termophilus e
Bifidobacterium lactis (1 x 109 UFC)
Probióticos* e ECN
Janvier et al. J Pediatr 2014;164:980
IG= 29s
P= 1200g
* 0,5g mistura de 4 bifidobactérias:
Bifidobacterium breve, bifidum,
infantis e longum
2 x 109 UFC
(unidades formadoras de colônias)
Período: 1º alimentação até 34ºs IG
Prescrever ou não Probióticos p/ o
RNPT ???
Sim!!!
Tarnow -Mordi W; Soll R: J Ped May 2014
Its time to change the practice
Não!!!
Sjajewska H; Goudover H
Am J Clin Nutr 2014 ; 100: 1411–2
To give or not to give probiotics to preterm infants
Modi N Neonatology 2014;105:71–73
Probiotics and Necrotising Enterocolitis:
The Devil (as Always) Is in the Detail
Abrahamson, Neu et al:
J Ped 2014;165:389–394
The Time for a Confirmative Necrotizing
Enterocolitis Probiotics Prevention Trial in the
Mehmet O et al
Extremely Low Birth Weight Infant in North
http://dx.doi.org/10.1016/j.jpeds.2014.04.035
America Is Now!
Probiotics for necrotizing
enterocolitis: not always a success
story
AlFaleh K, Anabrees J
Cochrane Database Syst Rev. 2014
Alerta rede Vermont Oxford 2015:
Apr 10;4:CD005496. doi:
contaminação probióticos com fungos
10.1002/14651858.CD005496.pub4
Probiotics and prebiotics in preterm infants: Where are we?
Where are we going?(2010)
Hania Szajewska
Early Human Development 86 (2010) S81–S86
Thomas DW: Pediatrics 2010; 126:1217-21
.... Potencial de prevenir NEC......
..... Estabelecer eficácia e segurança
......Faltam evidencias que não permitem estabelecer suplementação de
rotina para RNPT
Futuro: Qual microrganismo e/ou combinação de OS?
Quando introduzir? Qual a dose?
Probiotics and prebiotics in preterm infants: Where are we?
Where are we going?(2010)
Hania Szajewska
Early Human Development 86 (2010) S81–S86
Thomas DW: Pediatrics 2010; 126:1217-21
.... Potencial de prevenir NEC......
..... Estabelecer eficácia e segurança
......Faltam evidencias que não permitem estabelecer suplementação de
rotina para RNPT
Futuro: Qual microrganismo e/ou combinação de OS?
Quando introduzir? Qual a dose?
Porém, 2016...Identificação do Microbioma e Customização daTerapêutica com Pré e Probióticos visando maior
diversidade de bactérias no intestino do RN pré termo?
Ídem nos distúrbios de motilidade ocasionado pelas
más formações digestivas?
McGuire et al. Arch Dis Child Fetal Neonatal 2003; 88: F11-14
[email protected]
Departamento de Pediatria FMUSP
Dose?:0,2mL 2/2horas
Instituto da Criança UTIN-2
Muito Obrigado
a todos os amigos da
ILSI- Brasil