Aulas Teóricas 8
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Iniciação da transcrição pela RNA polimerase procariota RNA polimerase: •Síntese de RNA tomando como molde uma cadeia de DNA •Síntese de RNA na direcção 5’→3’ •Capaz de iniciar síntese de nova cadeia de RNA (NMP)n + NTP → (NMP)n+1 + PPi RNA RNA + 1 nucleótido (cadeia codificante) (cadeia molde) RNA polimerase procariota α, β, β’, β , ω –domínios catalíticos σ - subunidade que liga ao DNA Iniciação da transcrição pela RNA polimerase procariota RNA polimerase procariota RNA polimerase procariota Terminação da transcrição procariota Sequências consenso de promotores eucariotas Comparação de 900 genes eucariotas diferentes Transcrição pela RNA polimerase II eucariota TBP: TATA-binding protein TAF: TBP-associated factor TBP TAF TFIIB: ponte com a RNA polimerase TFIIH: actividade de helicase e de cinase TFIIB TBP TAF TFIIF TFIIE TFIIH RNA polimerase +1:RNA Maturação do mRNA em células eucariotas Existência de sequências não codificantes no gene da ovalbumina Modificação do terminal 5’ da molécula de mRNA Clivagem e poli-adenilação do mRNA Elementos característicos das extremidades dos intrões snRNP: small nuclear ribonuclear protein (U1, U2, U4, U5, U6) Elementos característicos dos intrões ligam snRNP Mecanismo de excisão de intrões (splicing) de transcriptos de mRNA Clivagem e poli-adenilação do mRNA Processamento alternativo de mRNA (locais de poliadenilação alternativos) Processamento alternativo de mRNA (excisão alternativa de exões) Processamento alternativo do mRNA da calcitonina :calcitonin-gene-related peptide hnRNP: “heterogeneous ribonucleoprotein particles” mRNP: messenger ribonulcear protein complex Complexo do poro nuclear Vista citoplasmática Complexo de nucleoporinas de 125 000 kDa Vista nucleoplasmática cutoff: ~60kDa Formação do “messenger ribonuclear protein complex” (mRNP) Transporte do mRNA através do póro nuclear Factores de “splicing” promovem exportação do mRNA Tempo de meia-vida do mRNA Célula Meia-vida do mRNA (tempo médio) E. coli 2-5 min S. cerevisiae 22 min Células em cultura (de rato ou humanas) 10h Degradação do mRNA Ciclo de vida de uma molécula de mRNA Formação do complexo de iniciação da transcrição Fosforilação do C-terminal da RNA polimerase II permite à enzima avançar na transcrição do gene Ligação do 5’cap ao RNA O spliceossoma, feito de srRNAs e proteínas, remove intrões do RNA O sinal de poliadenilação promove a terminação da transcrição e a adição da cauda de poliA ao terminal 3’ da molécular de RNA Utilização do mRNA na tradução
