BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood

INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-254485.02
Rev.: Junho de 2003
BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood é um meio parcialmente selectivo para o
isolamento de cocos gram-positivos estritamente anaeróbios e outras bactérias gram-positivas
anaeróbias de amostras clínicas.
PRINCÍPIOS E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO
Método microbiológico.
O Agar de Schaedler com sangue de ovelha é um meio altamente nutritivo, especialmente
criado para o desenvolvimento de anaeróbios obrigatórios como, por exemplo, lactobacilos,
estreptococos, clostrídios e Bacteroides.1-3 Com a adição de vitamina K1 e hemina, constitui a
base de vários meios selectivos incluindo o Schaedler-KV Agar with 5% Sheep Blood. Ellner et
al. descobriram que um meio com 10 mg de colistina e 15 mg de ácido nalidíxico por litro numa
base de agar de Columbia, enriquecido com sangue de ovelha a 5%, suporta o crescimento de
vários organismos gram-positivos e, ao mesmo tempo, inibe o crescimento das espécies de
Proteus, Klebsiella e Pseudomonas.4 Actualmente, a colistina e o ácido nalidíxico (=CNA) são
utilizados numa grande variedade de meios para inibir as bactérias gram-negativas. Quando
incubado em condições anaeróbias, o BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood é
utilizado para o isolamento selectivo de cocos gram-positivos, nomeadamente
Peptostreptococcus e Peptococcus.3,5 Além disso, verificar-se-á o crescimento de outros
anaeróbios gram-positivos como, por exemplo, clostrídios, Eggerthella lenta (=Eubacterium
lentum), Mobiluncus e de várias espécies do grupo Bacteroides fragilis (embora sejam gramnegativas), como B. fragilis, B. thetaiotaomicron e B. vulgatus. O meio é particularmente útil
para as amostras que contêm flora mista.
No BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood três peptonas fornecem os nutrientes. A
glucose é uma fonte de energia. A solução tamponada tris é incluída para evitar uma diminuição
extrema do pH durante a fermentação da glucose. O extracto de leveduras é uma fonte rica em
vitaminas. A hemina e o heme provenientes do sangue de ovelha são necessários a uma
variedade de anaeróbios estritos e outras substâncias que promovem o desenvolvimento. A
colistina e o ácido nalidíxico são inibidores das bactérias gram-negativas facultativamente
anaeróbias, em especial a Enterobacteriaceae.
REAGENTES
BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood
Fórmula* por Litro de Água Purificada
Hidrolisado pancreático de
8,2 g
Hemina
0,01 g
caseína
Hidrolisado péptico de tecido
2,5
Vitamina K1
0,01
animal
Hidrolisado papaínico de
1,0
Tris (hidroximetil) aminometano
3,0
farinha de soja
Glucose
5,8
Colistina
0,01
Extracto de leveduras
5,0
Ácido nalidíxico
0,01
Cloreto de sódio
1,7
Agar
13,5
Fosfato dipotássico
0,8
Sangue de ovelha, desfibrinado
5%
L-cistina
0,4
pH 7,6 ± 0,2
*Ajustada e/ou suplementada, conforme necessário, para cumprir os critérios do desempenho.
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PRECAUÇÕES
. Apenas para uso profissional.
Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração,
secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.
Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os
procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de
eliminação do produto usado.
ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8°C, dentro do
invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubação recomendado.
As placas são fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas
placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em
local limpo a uma temperatura entre 2 e 8°C.
CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR
Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as
INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar por um período de 48 a 72 h numa
atmosfera anaeróbia (por exemplo, o sistema anaeróbio BD GasPak) a uma temperatura entre
35 e 37°C.
Estirpes
Resultados de Crescimento
Peptostreptococcus anaerobius ATCC 27337
Crescimento bom a excelente
Clostridium perfringens ATCC 13124
Crescimento razoável a bom; beta-hemólise
(duas zonas)
Bacteroides fragilis ATCC 25285
Crescimento bom a excelente
Proteus mirabilis ATCC 12453
Inibição completa
Não inoculadas
Vermelho a vermelho escuro (cor de
sangue)
PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos
BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood (placas Stacker de 90 mm).
Microbiologicamente controlado.
Materiais não fornecidos
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário.
Tipos de amostra
Trata-se de um meio selectivo para o isolamento e cultura de anaeróbios estritos gram-positivos
provenientes de todo o tipo de amostras clínicas (consultar também CARACTERÍSTICAS DE
DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO). É um meio é particularmente útil para
o processamento de amostras que contêm flora mista ou bactérias facultativas gram-negativas.
Cumprir as técnicas aprovadas para a colheita e transporte de amostras anaeróbias.6-8 Têm de
utilizar-se meios de transporte adequados como, por exemplo, BD Port-A-Cul.
Procedimento do teste
Semear a amostra sobre o meio BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood o mais
rapidamente possível, após a recepção no laboratório. A placa para cultura é usada
principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora mista. Em alternativa,
se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa
sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em seguida, espalhar a partir desta
área inoculada.
De modo a que seja possível recuperar todos os agentes patogénicos envolvidos, tem de ser
incluído um meio anaeróbio não selectivo como, por exemplo, o BD Schaedler Agar with
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Vitamin K1 and 5% Sheep Blood (agar de Schaedler com vitamina K1 e sangue de ovelha a
5%). Recomenda-se a utilização de um meio selectivo para anaeróbios gram-negativos como,
por exemplo, o BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with 5% Sheep Blood (agar de
Schaedler de kanamicina, vancomicina e sangue de ovelha a 5%). Incubar as placas sob
condições anaeróbias, a uma temperatura entre 35 e 37°C durante, pelo menos, 48 h e por um
período máximo de 7 dias antes de as considerar negativas. Uma forma fácil e eficiente de
obter condições anaeróbias adequadas é através da utilização dos sistemas anaeróbios BD
GasPak. Independentemente do sistema anaeróbio utilizado, é importante incluir um indicador
da anaerobiose como, por exemplo, o indicador anaeróbio descartável GasPak.
Como um meio de referência para as bactérias que se desenvolvem em condições aeróbias, a
amostra deve ser espalhada sobre BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood que é incubado
em condições aeróbias com dióxido de carbono entre 5 e 10%.
Resultados
Após a incubação, a maioria das placas apresentará uma área de crescimento confluente. Dado
que o esfregaço é, na realidade, uma técnica de “diluição”, um número decrescente de
microrganismos é depositado nas áreas de cultura. Consequentemente, uma ou mais destas áreas
devem exibir colónias isoladas dos organismos contidos na amostra. Mais, o crescimento de cada
organismo pode ser avaliado semi-quantitativamente, com base no crescimento registado em cada
uma das áreas espalhadas.
O facto de existir crescimento no BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood, na
ausência de colónias correspondentes na placa de BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood
incubada em condições aeróbias, indica a presença de bactérias anaeróbias. Se se verificar o
crescimento no BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood e se não ocorrer qualquer
indício de crescimento no BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin-Agar with 5% Sheep
Blood, os isolados são provavelmente bactérias gram-positivas estritamente anaeróbias. Se
for detectado o mesmo tipo de colónias na placa de BD Schaedler Kanamycin-VancomycinAgar with 5% Sheep Blood, os isolados poderão pertencer ao grupo B. fragilis. Em ambos os
casos, a coloração de Gram iria revelar o tipo de bactérias que foram isoladas. O crescimento
no BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood sem crescimento nos dois
meios anaeróbios selectivos significa a presença de anaeróbios estritos sensíveis aos
inibidores nestes meios como, por exemplo, cocos anaeróbios gram-negativos ou outros. Se
estiverem presentes culturas mistas de anaeróbios estritos e facultativos, devem realizar-se
repicagens apropriadas em meios não selectivos, incubadas em condições aeróbias e
anaeróbias, provenientes de meios anaeróbios, de modo a confirmar que o isolado é um
anaeróbio estrito.
São necessárias outras etapas, incluindo colorações de Gram, para identificar os organismos
isolados. Para obter mais informações incluindo os procedimentos de identificação, consultar
os textos apropriados.6-11
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
O BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood quando incubado em condições
anaeróbicas, é um meio para um isolamento selectivo de vários microorganismos anaeróbios
gram-positivos.3,5 Neste meio verificar-se-á o crescimento de Peptostreptococcus, Peptococcus
e de outros anaeróbios gram-positivos como, por exemplo, clostrídios, Eggerthella lenta
(=Eubacterium lentum), Mobiluncus e outros bastonetes anaeróbios gram-positivos não
formadores de esporos. Este meio é inibidor para os anaeróbios facultativos gram-negativos
como, por exemplo, Enterobacteriaceae.
O BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood quando incubado em condições
anaeróbias, não é totalmente selectivo para organismos gram-positivos estritamente
anaeróbios. Neste meio, poderá ainda verificar-se o crescimento de organismos gram-positivos
facultativos como Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Listeria entre outros.
Uma vez que a maioria das espécies do grupo Bacteroides fragilis e determinadas espécies do
género Prevotella, como é o caso da Prevotella bivia, são resistentes aos ingredientes
selectivos, irão crescer regularmente neste meio.
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Ocasionalmente, os anaeróbios gram-positivos sensíveis aos agentes selectivos como, por
exemplo, determinadas Clostridium spp., poderão ser parcial a completamente inibidos neste
meio. Por essa razão, as amostras deverão ainda ser espalhadas num meio não selectivo.
BIBLIOGRAFIA
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11. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
EMBALAGEM/APRESENTAÇÃO
BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood
No. de cat. 254485
Meios em placas prontos a usar, 20 placas
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