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TÍTULO: AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA E BIOQUÍMICA DE BACTÉRIAS ANAERÓBIAS
FACULTATIVAS PRESENTES NAS LESÕES PERIAPICAIS EM PACIENTES NORMORREATIVOS.
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: ODONTOLOGIA
INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS
AUTOR(ES): RENE PORFIRIO GONZALES REYES ORTIZ JUNIOR
ORIENTADOR(ES): CHARLOTTE CESTY BORDA DE SAENZ, CRISTINA TEBECHRANI FIUZA, ERIK
CENDEL SAENZ TEJADA, JORGE AUGUSTO BORIN SCUTTI, RICARDO RUIZ MARTUCI, SYLVIO
CORREA FIUZA
1. RESUMO
Lesões periapicais compreendem uma rede integrada de fatores de
virulência bacteriano e consequentemente um intrínseco processo infeccioso é
instalado. Como resultado, o microambiente proporciona uma destruição tecidual. O
objetivo do presente trabalho será avaliar a frequência e a diversidade bacteriana,
frente à lesão periapical em pacientes normorreativos com sinais, sintomas e
comprometimento do elemento dentário. As amostras bacterianas serão obtidas por
meio de processo cirúrgico (exodontia) e os pacientes (n = 30) assinarão um Termo
de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). Os meios de cultura utilizados no
presente trabalho serão: Ágar Sangue e Ágar MacConkey. A metodologia utilizada
para a identificação bacteriana, sendo realizado somente com as bactérias
anaeróbias facultativas, utilizará testes bioquímicos específicos e as características
morfológicas das colônias nos meios de cultura selecionados.
2. INTRODUÇÃO
As
lesões
periapicais
correspondem
a
reações
imunoinflamatórias,
originadas por toxinas secretadas durante o metabolismo bacteriano. Sua patogenia
decorre da necrose pulpar, uma vez que a polpa mortificada torna-se o ambiente
propício dessas bactérias4-12. Este é um processo complexo que envolve uma série
de mecanismos intrínsecos mediados por moléculas sinalizadoras, o que resulta no
desenvolvimento de lesões que podem representar estágios de um mesmo processo
inflamatório, destacando-se os granulomas periapicais (GP’s), os cistos radiculares
(CR’s) e os cistos periapicais residuais (CPR’s)6.
3. OBJETIVOS
Baseado na importância do conhecimento das espécies bacterianas
envolvidas nas lesões periapicais para obtenção de sucesso terapêutico, que é
baseado no tratamento endodôntico/cirúrgico e muitas vezes medicamentoso
(antibióticos), e da deficiente correlação entre as alterações bioquímicas,
imunológicas e microbiológicas, o presente trabalho tem como principal objetivo a
obtenção de amostras bacterianas presentes nas lesões periapicais e a
subsequente identificação da diversidade bacteriana anaeróbias facultativas através
de testes bioquímicos frente à lesão periapical, os quais darão um direcionamento
concreto para o diferencial do nosso diagnóstico.
4. METODOLOGIA
A metodologia utilizada para avaliar o perfil microbiológico e bioquímico
respeitará as seguintes etapas:
I.
Semeadura inicial e incubação;
II.
Interpretação do crescimento na cultura primária;
III.
Semeadura secundária para isolamento bacteriano;
IV.
Identificação dos microrganismos facultativos.
5. DESENVOLVIMENTO
I.
A semeadura inicial e a incubação dos microrganismos devem seguir os
seguintes métodos13:
A. Semear 10 µl do meio de transporte, em contato com a lesão periapical, no
ágar-sangue e espalhar com a alça de Drigalski até secar.
B. Será optado por uma incubadora regulada a 37ºC, uma atmosfera de CO2 será
gerada utilizando-se uma vela em jarra com tampa hermética fechada e
permanecerá 48 horas em incubação.
II.
A interpretação do crescimento na cultura primária é realizada, através de 13:
A. Características morfológicas das colônias no meio de cultura, tais como:
tamanho, bordas ou forma, elevação, densidade, consistência, cor, aparência
da superfície da colônia e presença (total ou parcial) ou ausência de hemólise;
B. Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) para determinar a
frequência microbiana de certo tipo de colônia.
III.
A semeadura secundária é realizada com o objetivo de isolar uma espécie
bacteriana, ou seja, obter uma cultura pura. Assim sendo, devem-se seguir os
seguintes métodos13:
A. Com uma alça descartável, deve-se tocar numa das colônias escolhidas e
semear em ágar sangue pela técnica de esgotamento. Será realizada a
semeadura em duas placas de vidro, sendo uma para o meio aeróbio e outro
anaeróbio;
B. A maioria dos microrganismos crescem em temperatura de 35 ± 2ºC,
portanto, será optado por uma incubadora regulada a 37ºC;
C. A atmosfera de CO2 (meio anaeróbio) será gerada utilizando-se uma vela em
jarra com tampa hermética fechada;
D. Após 48 horas de incubação em temperatura adequada, as placas nas quais
os materiais clínicos serão semeado devem ser examinadas para verificar se
existe crescimento de algum microrganismo.
IV.
A identificação das bactérias anaeróbias facultativas seguirá a metodologia dos
testes bioquímicos, tais como:
A. Diferenciação dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos, através
da: coloração de Gram e semeadura em ágar MacConkey (meio seletivo e
diferencial que permite o crescimento de bactérias Gram-negativas e inibe
bactérias Gram-positivas);
B. Testes bioquímicos, como por exemplo: teste da catalase, da coagulase, do
vermelho de metila (MR), do manitol, da bile esculina e da arginina.
6. RESULTADOS PRELIMINARES
Até o presente momento, obtivemos 6 amostras, sendo detalhadas cada
uma a seguir:

Amostra 1: dente 34 (raiz residual) com lesão periapical, transportado em soro
fisiológico (NaCl 0,9%);

Amostra 2: dente 14 (raiz residual) com lesão periapical, transportado em TrisEDTA (TE);

Amostra 3: dente 15 (raiz residual) sem lesão periapical (caso controle),
transportador em TE;

Amostra 4: dente 23 (raiz residual) com lesão periapical, transportado em TE;

Amostra 5: dente 22 (com coroa íntegra) com lesão periapical, transportado
em soro fisiológico;

Amostra 6: dente 24 (raiz residual) com lesão periapical, transportado em TE.
Com essas amostras, podemos obter o seguinte resultado:
 Levando em consideração as amostras 1 e 2, sendo que foram retiradas do
mesmo paciente, ou seja, presentes no mesmo meio ambiente (cavidade
bucal) e expostas às mesmas condições, ambos apresentando uma raiz
residual com lesão periapical. Assim sendo, na cultura bacteriana notou-se
uma maior diversidade bacteriana e um maior número de unidades formadoras
de colônias (UFC) na amostra contendo o meio de transporte TE em relação
ao soro fisiológico.
No presente momento, estão sendo realizados os testes bioquímicos para a
identificação das bactérias anaeróbias facultativas, assim sendo, aguardando os
resultados para complementação nos resultados da pesquisa.
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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