Projeto de Mestrado

Projeto de Mestrado I
Hugo Leonardo Duarte
Rafaela Cabral G. Fabiano (iniciação científica)
Título:
Papel dos macrófagos na proliferação e função de neurônios
sensoriais do gânglio da raiz dorsal (n-DRG) espinhal.
Introdução:
Os macrófagos estão presentes em mecanismos de
reparo,
regeneração e neuropatias nos sistemas nervoso central e periférico.
Vários estudos descreveram a presença destas células nos gânglios da
raiz dorsal espinhal (DRG-dorsal root ganglion), estrutura envolvida com
a nocicepção em vertebrados. Assim, devido a estas habilidades em
modificar populações celulares in vivo, torna-se fundamental a
identificação e a caracterização dos eventos neuroquímicos e
eletrofisiológicos em células neuronais (n-DRG) in vitro em contato com
o produto derivado de macrófagos.
Objetivos:
Verificar a sobrevivência, a síntese de proteínas e os registros
eletrofisiológicos de neurônios cultivados em meio condicionado de
macrófagos derivados de monócitos do sangue ativados em cultura com
nervo periférico.
Justificativa:
Este estudo simula in vitro o ambiente químico verificado em
algumas neuropatias e em lesões neurológicas do SNP o que possui
implicações clínicas importantes, uma vez que o entendimento dos
processos de interação neurônio-macrófago poderia, por exemplo,
explicar as modificações observadas no perfil de resposta neuronal de
pacientes portadores de dor neuropática.
Materiais:

Isolamento e cultura de monócitos
DMEN;
Soro fetal bovino;
Glutamina;
Gentamicina*;
Ciprofloxacina*;
Penicilina;
Estreptomicina;
MCSF (fator estimulante de colônia de macrófago);
Placas de cultura;
Pipetas Pasteur de vidro.

Isolamento e cultura neuronal (DRG)
HBSS;
Colagenase;
Dispase;
DNAse;
DMEN;
Penicilina;
Estreptomicina;
Soro fetal bovino;
Poli-lisina;
Placas de cultura;
Pipetas Pasteur de vidro;
Lamínulas.

Registro eletrofisiológico
Solução interna;
Solução externa;
Solução Tyronde;

Western Blots
Membranas de nitrocelulose;
Anticorpos anti-MAP2 e anti-Tau;

Ensaio com MTT

Protocolo de DNA microarrays
Projeto de Mestrado II
Hugo Leonardo Duarte
Rafaela Cabral G. Fabiano (iniciação científica)
Título:
Inibição funcional do canal de Na+ resistente à tetrodotoxina (NAV1.8) usando RNA de interferência.
Introdução:
O canal de Na+ resistente à tetrodotoxina (NAv-1.8) está envolvido
na excitabilidade de neurônios do tipo C do gânglio da raiz dorsal (DRG).
Este canal sofre modificações no seu perfil de expressão genética em
diversas neuropatias, como na dor neuropática derivada de axotomia,
HIV ou diabetes.
Diversos estudos, utilizando mutantes knock-out para NAv-1.8 e
estratégias de Knock-down através de antisense RNA, causaram
diferenças no padrão de excitabilidade dos neurônios do DRG. A técnica
de RNA de interferência permite obter resultados de silenciamento
melhores do que a Knock-down e de longa duração. Logo, este
procedimento mostra-se promissor para melhor inferir sobre o papel do
canal NAv-1.8 e proteínas associadas a ele no neurônio do tipo C.
Objetivo:
Verificar a excitabilidade do neurônio tipo C do DRG, após o
silenciamento do canal NAv-1.8, através da técnica de RNA de
interferência.
Analisar o padrão de expressão genético de proteínas associadas
ao canal NAv-1.8 (subunidades β).
Materiais:

Isolamento e cultura neuronal (DRG)
HBSS;
Colagenase;
Dispase;
DNAse;
DMEN;
Penicilina;
Estreptomicina;
Soro fetal bovino;
Poli-lisina;
Placas de cultura;
Pipetas Pasteur de vidro;
Lamínulas.

Registro eletrofisiológico
Solução interna;
Solução externa;
Solução Tyronde;

Western Blots
Membranas de nitrocelulose;
Anticorpos anti-subunidades β;

Protocolo de RNAi