VITRIFICATION KIT – VITRIFICAÇÃO

Para Oócitos y Embriões
VITRIFICATION KIT – VITRIFICAÇÃO
Uso recomendado
Para vitrificar oócitos e embriões.
A palheta é para armazenar oócitos e embriões vitrificados em
Nitrógeno líquido.
Conteúdo do Kit
- Step 0 Solução Básica (BS): 1 frasco de 1,0 ml (somente
para vitrificação de oócitos).
- Step 1 Solução de Equilíbrio (ES): 1 frasco de 1,5 ml.
- Step 2 Solução de Vitrificação (VS): 2 frascos de 1,5 ml.
- 4 Palhetas: 1 palheta pode conter vários oócitos/embriões
(somente como recomendação 3 – 4).
- 2 Placas com 6 poços cada uma.
Instruções de Uso:
Preparação
- Todo processo se realiza a temperatura do laboratório (2227°C).
- Encher um recipiente com N2 líquido.
- Compare a espessura da zona pelúcida com a largura do
espaço perivitelíneo e tome nota.
Importante: Use uma pipeta Pasteur com um diâmetro
adequado para oócitos (140 µm) e embriões (140 µm a 180
µm).
Atenção! Os procedimentos se realizam a temperatura
ambiente e são diferentes para equilíbrio de oócitos e
embriões.
Equilíbrio de oócitos
1- Coloque 20 µl de BS no 1° poço e 300um de VS no 2° e 3°
poço da Placa.
2- Transfira o oócito da placa de cultivo para o fundo do 1°
poço com BS.
3- a. Agregue suavemente 20 µl de ES na
superfície do BS e espere 3’ (minutos).
b. Agregue de igual forma outros 20 µl
de ES no primeiro poço e espere 3’.
c. Agregue de igual forma outros 240 µl
de ES no primeiro poço e espere 9’.
Equilíbrio de embriões
1- Coloque 300 µl de ES no primeiro poço e 300 µl de VS no 2°
e 3° poço da placa.
2- Transfira o embrião da placa de cultivo para o fundo do
primeiro poço com ES.
3- O embrião começa a se contrair e gradualmente volta a seu
tamanho original (entre 12’ a 15’).
Vitrificação
Atenção! Os seguintes passos de 4 a 8 devem ser completados
em um tempo não menor a 60¨(segundos) e até 90¨.
4-Com a pipeta Pasteur transfira o oocito/embrião do 1° poço
para a superfície do 2° poço com VS com o mínimo volume de
ES possível.
5-Limpar a pipeta e alterá-lo de posição 3 vezes dentro do 2°
poço com VS.
6-Transfira-o para o 3° poço com VS, alterando-o de posição 2 vezes.
7-Coloque o oocito/embrião perto da ponta da lâmina da palheta,
remova o meio VS excedente para alcançar uma gota plana de
menor volume possível.
8-Imergir imediatamente a palheta em N2 líquido.
9-Colocar a tampa da palheta e armazená-la em um tanque de
N2 líquido.
A palheta permanecerá submergida em todo momento e
somente sairá do Nitrogenio liquido por 1 segundo para seu
descongelamento.
Ensaio de controle de qualidade
Soluções, placas e palhetas passaram com êxito nos seguintes
controles:
- Esterilidade por UPS teste de esterilidade (SAL10³).
- Endotoxinas por metodologia LAL (cada componente).
- Eficiência: sobrevida de 10/10 oócitos bovinos.
Depósito e estabilidade
Os kits são transportados na temperatura ambiente e em seguida
devem ser armazenados a 2 – 8°C até sua utilização.
O produto é estável até a data do vencimento impressa na caixa
e frasco.
Composição
- Suplemento Substituto de Soro
- Hepes em meio TCM199
- Etileno Glicol
- Dimetil Sulfóxido
- Sucrose
Referencias
• Kuwayama M. Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: The
CryoTop method. Theriogenology 67, 73-80, 2007.
• Cobo A, Kuwayama M. Comparison of concomitant outcome schieved with fresh and cryopreserved
donor oocytes vitrified by the Cryotop method. Fertil Steril. J89(6): 1657-64, 2008.
• Kuwayama M. Highly efficient vitrification method for cryopreservation of human oocytes. Reproductive
BioMedicine Online 11:300-308, 2005.
• Vajta G, Kuwayama M. Improving cryopreservation systems. Theriogenology 65(1), 236-44, 2006.
• M Antinori, E Licata, G Dani, F Cerusico, C Versaci, S Antinori. Cryotop vitrification of human oocytes
results in high survival rate and healthy deliveries. Reproductive BioMedicine Online 14, 5-667, 2007.
• Ushijima J, Kuwayama M. High survival rate of bovine oocytes matured in vitro following vitrification. J
Reprod Dev. 50:685-96, 2004.
• Fukui Y, Kuwayama M. Effect of cryodevice type and donor’s sexal maturity on vitrification of minke
whale oocytes at germinal vesicle stage. Zygote 12, 333-338, 2004.
• Hochi S, Kuwayama M. Improved Survival of Vitrified in vivo-derived porcine embryos. J. Reprod.
Develop. 50, 481-486, 2004.
• Esaki R, Kuwayama M. Cryopreservation of porcine embryos derived from in vitri- matured oocytes.
Biology of Reproduction. 71, 432-437, 2004
Producto solo para uso experimental.