1) Tolerância e Regulação da resposta imune

1) Tolerância e Regulação da resposta imune
Mecanismos que dificultam desenvolvimento de doenças auto imunes
tolerância central: eliminação de linfócitos específicos para os antígenos próprios
presentes nos órgão linfóides primários ( T – timo e B- mo).
 tolerância periférica : eliminação ou anergia de linfócitos que reconhecem antígenos
próprios nos tecidos periféricos.
Seleção negativa de linfócitos  As APC’s ao apresentarem peptídeos as cels T no
timo, se o TCR reconhecer não sai do timo e morrem por apoptose.
Obs: O 1° sinal é a interação TCR-peptídeo ligado a MHC. Então quando uma cel T
auto reativa encontra seu antígeno, ela não é ativada; ao contrário entra em anergia
clonal., pq não há o 2° sinal para a sua ativação o qual vem de moléculas coestimulatórias(ex: B7 ) expressas em APC’s através da ligação de citocinas
inflamatórias. O estresse exacerba através do hipotálamo a função das citocinas
inflamatórias
 Sítios imunologicamente privilegiados (segregação de antígenos): são o Cérebro, a
câmara anterior do olho, os testículos e o feto, pq apresentam algum tipo de barreira do
sistema inune aos antígenos próprios. Essas áreas são locais onde não há, normalmente,
circulação de linfócitos.
Ags+TGF-β→respostadecélulasT→Th2<Th1
Expressão de FAS nos tecidos de sítios imunologicamente privilegiados →apoptose de
linfócitos que expressam FAS e que penetrem nesses locais.
Ags seqüestrados destes sítios→alvos de ataque auto-imune
Ex.:esclerose múltipla-ptn básica da milelina(MBP).
 -Células T regulatórias (Treg)
•TCD4+CD25+FOXP3+
•Geradas pelo reconhecimento de auto-Ags no timo
•Geração e sobrevida dessas células é dependente de TGF-β e IL-2 e da co-estimulação
via B7:CD28
•Controle das respostas imunes :-secreção de citocinas imunossupressoras: IL-10 (inibe
fç dos macrófagos e DCs)/TGF-β (inibe as respostas de macrófagos e linfócitos).
-inibição por contato.
Função – inibir a resposta imune.
Fatores que determinam a imunogenicidade e a tolerogenicidade dos antígenos
protéicos
Fator
Quantidade
Persistência
Fatores que
favorecem a
estimulação das
respostas imunes
Doses ideais variam
para diferentes Ags
De curta
duração(eliminados
Fatores que
favorecem a
tolerância
Altas doses
Prolongada
pela resposta imune)
Porta de
Subcutânea,
entrada/localização intradérmica;
ausência nos órgãos
geradores.
Presença de
Ags com
adjuvantes
adjuvantes.Estimulam
as células Th
Propriedades das
APC’s
Altos níveis de coestimuladores
Intravenosa,oral;
presença nos
órgãos
geradores.
Ags sem
adjuvantes não
imunogênicos ou
tolerogênicos
Baixos níveis de
co-estimuladores
e citocinas.
Outros mecanismos de regulação periférica
1- eliminação do antígeno uma vez eliminado, pára a inflamação, pára a resposta
imune. Isso dificulta uma doença auto imune se no caso o patógeno for eliminado
rapidamente. O paciente imunosuprimido tem mais chances de ter doença auto imune
pq ele demora mais a eliminar o patógeno. Aí a inflamação não pára, pq esta não pode
parar enquanto o patógeno não sair. Essa persistência da inflamação é que pode
quebrar a anergia de clones auto reativos.
2- CDH 4  é quando depois de proliferar e parar várias vezes, a célula,, para não
produzir uma elevada secreção de citocinas inflamatórias e uma hiper
proliferação, utiliza-se deste mecanismo. O responsável por isso é a troca do
CD28 pela CTLA 4, que tb se liga a B7. A CTLA 4 inibe a cascata de ativação
e pára.
3- Exaustão clonal  é quando a célula T está cansada de se dividir e se programa
pra morrer. Quando o antígeno é eliminado, boa parte dos clones que estavam
proliferando e parando, a maioria deles vai parar e ficar células T. Se a
inflamação não parar , a cel T passa a expressar uma molécula chamada FAS e
se prepara para morrer por apoptose. Isso ocorre quando a inflamação estiver
cronificando.
•
Reações de hipersensibilidade
É uma resposta imunológica excessiva ou não apropriada a antígenos
Tipos de hipersensibilidade:
 RHS tipo 1 ou imediata
É mediada por IgE. Age contra os alergenos. Precisa de uma dose sensibilizante e uma
segunda dose desencadeante, logo esta reação nunca ocorre no primeiro contato. Células
envolvidas: mastócitos, basófilos e eosinófilos. Células e tecidos são: céls endoteliais,
céls do músculo liso e leocócitos  processo inflamatório. Ex: rinite alérgica, asma
brônquica, alergias alimentares, alergia a penicilina.
- IgE + Ags = ativação de mastócitos com liberação de histamina e outras substâncias
vasoativas provocando vasodilatação e exudação.
- Há a resposta imediata (15 – 30 min depois ocorre a degranulação da histamina dos
mastócitos) e a tardia (6-8 hs depois. Há a liberação de citocinas pró inflamatórias q
ativam cels como basófilos, eosinofilos e monócitos.
- Etapas: 1- exposição ao alergeno. O antígeno pode ser fagocitado por uma APC e
apresentado a um linf T ; 2- ativação das cel s TH2 específicas. Este linfócito estimula
o linf B a ...3- Produção de IgE ; esta fica circulante no sangue onde não se tem mais
antígenos ( foram fagocitados). E então ....4- ligação de Ig E aos receptores de Fc dos
mastócitos ( receptores de alta avidez para IgE) ; 5 – estímulo dos mastócitos após
exposição. O mastócito cheio de IgE liga-se ao antígeno fortemente e degranula
liberando histamina:; 6- liberação de mediadores inflamatórios pelos mastócitos.
-Anafilaxia sistêmica – geralmente é desencadeada por antígenos intravenosos como
drogas, soro, veneno e etc.
- Anafilaxia local
ASMA
-Doença inflamatória  repetidas reações de hipersensibilidade imediata e tardia no
pulmão  inflamação brônquica crônica com eosinófilos, hipertrofia das células
musculares lisas, hiperresponsividade brônquica e obstrução das vias aéreas
Imunopatologia: Fase Inicial : ativação de mastócitos ; aumento da permeabilidade da
mucosa ; aumento da permeabilidade vascular e edema ; recrutamento eosinófilos,
basófilos e células Th2; secreção de muco ; broncoconstrição reflexa . Fase Tardia :
resposta inflamatória mediada por eosinófilos, endotélio e células epiteliais ; resposta
inflamatória com duração de vários dias
Resultando em... Lesões irreversíveis na musculatura brônquica: 1-Espessamento da
membrana basal 2 -Hipertrofia e hiperplasia do músculo liso 3- Elevação no número de
células caliciformes 4- Aumento das glândulas submucosas 5- Alteração no
depósito/degradação dos componentes de matriz extracelular
Nova Proposta para o tratamento da asma e atopias
Omalizumabe - Como funciona?  Liga- se à IgE livre, reduzindo a IgE ligada às
células  Reduz os receptores de alta afinidade  Reduz a liberação de mediadores 
Reduz as exacerbações e os sintomas da asma.
 RHS tipo 2 ou mediada por Acs
- Anticorpos envolvidos são Ig G ou Ig M
- Agem contra Ags da memb. Celular ou da MEC ( normais ou alterados).
- Participam da resposta: Sistema Complemento ( provocando lise celular e fagocitose)
e as IgG. Pode ser tanto imunidade Humoral qto Celular.
- Mecanismos básicos causadores: 1- Opsonização e fagocitose: os Acs vão incitar a
ativação do Complemento ou através de C3b opsonizar a cel e levar a fagocitose ou lise
pela formação do MAC. Ex.: anemia hemolítica auto-imune, púrpura, hemólise em
reações transfusionais
2- Inflamação mediada por Complemento ou por receptor de Ig: os Acs na memb.
da cel são reconhecidos pelos neutrofilos, que se ligam aos mesmos e promovem
citotoxidade mediada por Acs . As cels NK tb reconhecem as cels opsonizadas por Acs
e lisam- nas, ou mesmo os macrófagos reconhecem e fagocitam. Tudo isto gera
produção de anafilatoxinas, levando a inflamação e recrutamento de mais leucócitos e
esta inflamação pode gerar lesão tecidual. Ex.: glomerulonefrite 3 – Disfunção celular
mediada por anticorpos : Ex – Doença de Graves (Receptor TSH é recoberto por Acs,
que promovem estimulo cte. a cel. Ex 2 – Miastenia Grave ( Acetilcolina liberada pelo
neurônio não consegue chegar ao receptor no músculo pois este fica coberto por Acs).
- Transfusão Sanguínea, Incompatibilidade ABO ( Variação de carboidratos na
superfície das hemácias)
- Doença hemolítica do recém nascido
Esta doença ocorre qdo há uma gestação onde a mãe é “ Rh negativo” e a criança “ Rh
positivo” e no parto o sangue da mãe e da criança entram em contato e a mãe monta
uma resposta imune ao fator Rh que ela não possui( é sensibilizada por um Ag). Em
uma próxima gravidez, os Acs produzidos que estão circulantes atravessam a placenta e
atacam as hemácias da criança, podendo levar a morte, mas geralmente causa só
anemia.
Por isso, após o parto a mãe é submetida a uma “vacina” que nada mais é que
anticorpos anti-Rh que vão destruir as hemácias da criança que está no organismo da
mãe antes que estimule o sistema imune da mãe( sensibilização). É uma imunização
passiva.
- Febre Reumática : infecção por estreptococcos. Os Ags vão causar uma reação
cruzada contra o tecido cardíaco.
RHS tipo 3 ou mediada por imunocomplexos
-Causada por Ig G ou Ig M
- Geralmente o Complexo Ag- AC é clarificado normalmente pelo próprio processo de
filtragem do sangue ou pelos macrófagos, mas se esta clarificação não ocorre, o
imunocomplexo ativa o Sistema Complemento que vai levar a inflamação.
-Exs: Doença do Soro soro anti-diftérico.O imunocomplexo pode se ligar a parede do
vaso sanguineo e causar vasculite( há a criação de microtrombos).
Doença de ArthusSemelhante a do soro mais Ag, não é endovenoso. Foi introduzido
no subcutâneo ou em tecido conectivo. Do mesmo jeito são formados imunocomplexos
que estimulam a inflamação.
 RHS tipo 4 ou tardia ou por linf T
Mediada por linf TH1. Não há participação de Acs.
É tardia montada contra microorganismos intracelulares, parasitas e protozoários, e
mycobacterium tuberculosis. Gera granulomas.
- Eventos: Ag estimula TH1 que produz INF Gama que ativa macrófagos. Macrófagos
ativados fazem fagocitose, gera inflamação e lesão tecidual.
Ex: diabetes com hipersensibilidade a insulina, teste PPD, artrite reumatóide, esclerose
múltipla, miocardite.
Granuloma: quando o macrófago não consegue debelar a infecção, o antígeno é
persistente; o macrófago circunda o antígeno e evita que se dissemine. O granuloma é
circundado por linfócitos que secretam citocinas para ativar os macrófagos.
Diagnóstico sorológico
 anticorpos monoclonais – são anticorpos que reagem com Ag na região antigênica.
Quando se faz um teste para diagnóstico utiliza-se de anticorpos monoclonais pq esse
tipo é que rastreia especificamente aquele Ag requerido.
 Imortalizar células B que produzem Ac requerido: plasmócito normal + uma célula
de mieloma . Esta linha de cels produtoras de Acs imortalizada é conhecido como
hibridoma, o qual produz Acs monoclonais.
 Aplicações : imunodiagnósticos para muitas doenças infecciosas e sistêmicas,
diagnóstico tumoral e terapia e análise funcional de moléculas de superfície.
 ELISA – utilizado para saber se um indivíduo possui Ac contra um determinado Ag.
Se ele tiver Ac contra Ag em teste, ou ele tem a infecção ou já teve. O teste é realizado
conforme abaixo:
1- mistura-se o soro do paciente com uma placa recoberta com o Ag, se o paciente tiver
Acs específicos para aquele Ag, eles se ligam, outros Acs não específicos não se ligam,
mas encontram-se misturados ao soro do paciente.; 2- lavagem do soro para retirar as
substâncias que não se aderiram aos Ags.;3- efetua-se uma reação com um Ac de alta
afinidade pela região Fc dos Acs, que ficaram aderidos ao Ag, sendo que o Ag está
ligado a uma enzima.; 4- efetua a lavagem do soro novamente para retirada dos Acs
que não se ligaram ao complexo Ag-Ac.; 5- nesta fase adiciona-se um substrato à
enzima que muda de cor na hora que é degradado pela reação enzimática para agora
poder se ver alguma coisa.
 ELISA indireto: detecção de Acs – é efetuado do mesmo modo porém dessa vez o
alvo da detecção é o AC.
 ELISA sanduíche : detecção de antígeno
É a versão mais conhecida. Usa dois Acs diferentes que reagem com epítopos distintos
no Ag, cuja concentração precisa ser determinada. 1- reveste uma microplaca com Ac
ao invés de se revestir com Ag e posteriormente mistura-se o Ag para reagir com o Ac
da placa. ; 2- lavagem para retirada dos Ags que não ficaram aderidos; 3- coloca-se um
outro Ac marcado e específico para aquele Ag, sendo que os dois se ligam ao Ag. ; 4 –
repete a lavagem para retirada dos Acs que não se ligaram ao Ag.; 5 – coloca-se o
substrato que mudará de cor na presença da enzima.
Western blot – utilizado para determinar a quantidade relativa e o peso molecular de
uma Ptn dentro de uma mistura de Ptns e outras moléculas. 1- separação analítica; 2- Ag
está mobilizado em uma membrana de microcelulose ; 3- há uma reação do Ag com o
marcador de peso molecular. Ocorre a passagem desse complexo por uma memb de
microcelulose mediado por uma corrente elétrica.
Obs: este teste tb é utilizado rotineiramente para diagnóstico do HIV, onde temos um
controle positivo e um negativo.
 Imunofluorescência –cromógenos e fluoróforos
Os Acs podem ser utilizados para identificar a distribuição anatômica de um Ag em um
tecido ou no interior de um compartimento de uma cél. Para isso o tecido ou a cél são
incubados com Ac marcado com um fluorocromo ou enzima, e a posição do marcador
determinada por meio de um microscópio apropriado - utliliza da mesma lógica do
ELISA, mas o Ac secundário é conjugado a um corante. Se ocorrer a reação e for
observado a fluorescência o indivíduo é positivo. Como no ELISA você pode pesquisar
por essa técnica tanto o Ag quanto o Ac.
 Citometria de fluxo
A linhagem do tecido, o estágio de maturação ou o status de ativação de uma cel
podem ser frequentemente determinados pela análise da expressão de diferentes
moléculas na superfíce ou interior da cel. Essa técnica é usualmente executada corandose a cel com uma sonda marcada por fluorescência que são específicas para aquelas
moléculas e medindo-se a quantidade de fluorescência emitida por essas cels. Pode ser
utilizada para contagem de CD 4 (destruição maciça no HIV) e CD 8 em pacientes
infectados com HIV.
 VDRL – é um teste utilizado para o diagnóstico da sífilis, mas não usa o Ag do
Triponema Pallida, e sim a cardiolipina (fração lipídica da constituição antigênica do
Triponema) que causa reação cruzada com os Acs do indivíduo. A cardiolipina, quando
combinada com lecitina e colesterol, forma sorologicamente um Ag ativo, capaz de
detectar Acs humorais presentes no soro durante a infecção sififítica. O teste é feito a
partir de uma reação entre o soro do paciente mais a cardiolipina. Após a reação é
observado uma aglutinação. Esse teste é pouco específico porém é muito sensível.
Conceitos
Janela imunológica corresponde ao tempo que o organismo leva para produzir ,
depois da infecção, uma certa quantidade de Acs que possam ser detectados pelos
exames específicos. Para o HIV, por exemplo , esse período é normalmente de 2 a 12
semanas.
Viragem sorológica  Soro IgG (-) na fase aguda e (+) na convalescença ; Aumento
de título de 4x ou mais no soro de convalescença em relação ao de fase aguda