Trabalho

XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro.
INFLUÊNCIA DO PESTICIDA ORTHENE SOBRE O CRESCIMENTO
DE BACTÉRIAS DIAZOTRÓFICAS DO GÊNERO BURKHOLDERIA
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Cicero Geraldo Gualter dos Santos1, Maria Jacyelle dos Santos Muniz1, Jessimiel Gomes Barbosa1, Adijailton Jose de
Souza1, José Aldo Teixeira da Silva2 Cesar Auguste Badji3 e Julia Kuklinsky-Sobral4
Introdução
No mundo e, principalmente, no Brasil o uso de defensivos agrícolas está aumentando e se tornando mais frequente
[1]. O uso intensivo desses pesticidas podem causar alterações, afetando os micro-organismos presente no solo [2].
Alguns micro-organismos como bactérias podem-se adaptar a uma determinada variedade de composto químico nos
ambientes, sendo este fenômeno explicado pela interação das substâncias químicas, com a microbiota e as condições
ambientais [3].
Um composto muito usado na agricultura são os do grupo químico dos organofosforados, como o orthene (inseticida
acaricida sistêmico, de contato e ingestão), estando também presente em produtos de limpeza, medicamentos e
indústrias [4]. Sendo aplicados milhares de toneladas de fosforados sintéticos no meio ambiente, na forma de aditivos de
detergentes e agroquímicos.
Esse grupo químico é conhecido por ser ubíquos na natureza e em alguns ecossistemas eles compreendem a maior
parte do fósforo disponível, sendo produzidos por uma variedade de organismos procariotos e eucariotos [5].
O orthene, que é um inseticida acaricida, do grupo químico dos orgonofosforados é utilizado para uma gama de
cultivas (melão, tomate, citros, feijão, algodão, dentre outras) e dragas (pulgão, cochonilha, ácaros e outros). É comum
que alguns micro-organismos possuam a capacidade de consumir este composto, pela ocorrência de fosforados na
natureza, podendo ser usado como fonte única de carbono, por diferentes vias metabólicas [6].
Portanto, o presente trabalho avaliou a influência do inseticida orthene sobre o crescimento e desenvolvimento de
bactérias diazotróficas.
Material e métodos
A. Linhagens Bacterianas
Foram avaliadas três linhagens bacterianas diazotróficas (UAGC 867, UAGC 895 e UAGC 913), identificadas
como Burkholderia sp., sendo pertencentes ao nicho endofítica de raiz e da rizosfera, de duas variedades diferentes de
cana-de-açúcar (RB92579 e RB867515), com o tempo de cultivo de quatro meses e sendo todas elas cultivadas no
estado de Pernambuco, todas as bactérias avaliadas são pertencentes à coleção de culturas microbianas do Laboratório
de Genética e Biotecnologia Microbiana (LGBM) da Unidade Acadêmica de Garanhuns (UAG/UFRPE).
B. Influência do Inseticida (Orthene) sobre o crescimento bacteriano em meio d cultura líquido TSA (Tripcase Soy
Agar)
As bactérias foram inoculadas a 28ºC, por 24 horas sob agitação (120rpm), a partir de colônias isoladas, em meio de
cultura líquido TSA (Tripcase Soy Agar). Após essa etapa, 10 µL da cultura bacteriana foi inoculado em tubos tipo
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1. Alunos de Graduação em Agronomia da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n,
Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. E-mail: [email protected]
2. Mestrando do Programa de Pós-Graduação em Produção Agrícola, Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de
Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901.
3. Professores Adjuntos da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista,
Garanhuns, PE, CEP 55296-901.
Apoio financeiro: CAPES e CNPq.
XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro.
falcon de 50 mL, contendo 20 mL de TSA (Tripcase Soy Agar) líquido e uma calda 5 mL com o inseticida na dosagem
recomendada pelo fabricante, o dobro da dosagem do inseticida orthene e foi usado como controle o meio inoculado
com as bactérias, mas livre do pesticida, o experimento foi realizado em triplicada e depois da inoculação, os tubos
foram incubados sob agitação (120rpm). As leituras do crescimento bacteriano (densidade ótica, DO) foram realizadas a
24, 48, 72 e 96 horas após a inoculação, no espectrofotômetro (600 nm).
Resultados e Discussão
Alguns autores relatam que a inclusão de compostos químicos, como o caso dos organofosforados no meio ambiente
pode vim a aumentar a população microbiana e estimulam a mineralização e disponibilidade de carbono, nitrogênio e
fósforo [7].
Os resultados obtidos no experimento mostraram que quando o meio TSA (Tripcase Soy Agar) foi acrescido do
inseticida (orthene), obtiveram maior densidade ótica, no espectrofotômetro, tanto para o meio com a dosagem
recomendada, quanto para o dobro da recomendação (Figura 1). Essas bactérias podem ter usado uma via metabólica
que as permitiu utilizar o fosforado específico como fonte de carbono [6], acredita-se que uma enzima conhecida como
liase C-P, pode ter permitido a utilização desse fosforado, acredita-se que esta enzima catalise a clivagem direta de
ligações C-P para produzir alcano e fosfato [8].
Com relação ao o controle (meio TSA, com as bactérias e sem o inseticida), foi observado que ocorreu um menor
crescimento com relação ao outros tratamentos (Figura 2).
Esses resultados demonstram que as bactérias podem ter usado o orthene, como uma via metabólica, para obterem
uma fonte de carbono, tendo assim um melhor crescimento e desenvolvimento, com relação ao controle (meio sem o
inseticida).
Referências
[1]
CASTRO, A.S. Avaliação Pontual da degradação e transporte do herbicida glifosato no solo da bacia do arroio donato – pejuçara (RS).
87p Dissertação (mestrado recursos hídricos e saneamento ambiental – IPH) Porto alegre – UFRGS, 2003.
[2]
ALEXANDRER, M. Introduction to soil microbiology. 2 ed. New York: John Wiley & Sons, 1977.
[3]
SOMASSUNDARAM, L. Influence of pesticides metabolites on the development of soil microrganismos: Washington: American Chemical
Society, 1990.
[4]
KRZYSKO-LUPICKA, T; ORLIK, A. The use of glyphosate as the sole source of phosphorous or carbon for the selection of soil-borne fungal
stains capable to degradate this herbicide. Chemosphere, London, v. 34, n. 12, p. 2601-2605, 1977.
[5]
WHITE, A.K; METCALF, W.W. Two C-P Lyase operons in Pseudomonas stutzeri and their roles in the oxidation of phosphonates, phosphite,
and hypophosphite. Journal of Bacteriology, Washington, v. 186, n. 14, p. 4730-4739, 2004.
[6]
LEE, S; HEPBURN, SWARTZ, W.H; AMMON, H.L.; MARIANO, O.S.; MARIANO, D.D. Stereo chemical probe for the mechanism of P-C
bond cleavage catalyzed by the Bacillus cereus phosphonoacetaldehyde hydrolase. Journal American Chemical Society, New York, v. 114, p.
7346-7354, 1992.
[7]
PRATA, F. Comportamento do glifosato no solo e deslocamento miscível de atrazina. Tese de doutorado, Escola Superior de Agricultura
Luiz de Queiroz, Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2002.
[8]
KONONOVA, S.V; NESMEYANOVA, M.A. Phosphonates and their degradation by microrganisms. Biochemistry, Moscow, v. 67, n. 2, p.:
184-195, 2001.
XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro.
Figura 1: Leituras do crescimento bacteriano (densidade ótica, DO), no espectrofotômetro (600 nm), em meio de
cultura líquido TSA (Tripcase Soy Agar) com inseticida orthene, na sua dosagem recomendada (A) e o dobro da
recomendada (B). As barras indicam o desvio padrão da média de três repetições.
Figura 2: Leituras do crescimento bacteriano (densidade ótica, DO), no espectrofotômetro (600 nm), em meio de
cultura líquido TSA (Tripcase Soy Agar) sem inseticida orthene. As barras indicam o desvio padrão da média de três
repetições.