Localização do gene H

Localização do gene H
Cromossomo 19
19q 13.3
‡Localizado na posição 19q13.3 (locus FUT1)
‡ Apresenta 4 exons
‡O éxon 4 codifica proteina de 365 aa
‡ a(1,2) fucosiltransferase
‡antígeno H
Caracterização do gene ABO
‡ Genes ABO: cromossomo 9:
‡ DNA de 18-20 kb
‡ Cook, 1978
9q 34.1-2
Caracterização do gene ABO
‡7 exons
‡tamanho - 28 a 688pb
‡6 introns
‡tamanho- 554 a 12982pb
Sequencias codificadoras
‡77% da região codificadora total
‡ 91% da atividade catalítica da proteína solúvel
‡Total: 19.514 pares de base (pb), desde o códon de iniciação até
o códon terminal (o número exato de nucleotídeos pode variar
entre os diferentes alelos)
‡Codifica proteína de 353 aa, atividade de glicosiltransferase
Cursos Sem Distância Bioline
sobre antígeno H
Genética Molecular
y 1990: A base genética molecular foi elucidada
por Fumiichiro Yamamoto.
y O alelo A1 (A101) é considerado com o gene
selvagem,
e
tomado
como
base
de
comparação aos demais alelos ABO.
y Aminoácidos diferenciais de A1, B1 e O1,
foram identificados.
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Genética Molecular
y Os principais alelos ABO são:
{
A1, B1, O1.
y 1992-1993: Identificado as mutações de outros
subgrupos ABO.
{
A2, A3, Ax, B3, cis-AB, B(A) e alelo O não
delecional.
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Estas mutacoes de ponto no gene sao criticas
Causam uma alteracao na sequencia de a.a.
E consequentemente, a atividade das
Enzimas sobre o substrato.
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Genética Molecular
y Polimorfismos ABO:
{
são
causados
por
mutações
sequência de nucleotídeos no DNA.
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na
Subgrupos ABO
Subgrupos ABO
50
y Subgrupos
são produtos de genes alelos
variantes ou mutantes, e a maioria apresenta
significativa redução no número de sítios
antigênicos expressos nas hemácias, embora
sejam formados do mesmo açúcar.
Genética Molecular
y O
conhecimento da estrutura tridimensional da
proteína e das propriedades cinéticas das enzimas em
relação a especificidade entre o açúcar aceptor e o
substrato, devem revelar como a substituição dos nt e
aa afetam a atividade das glicosiltransferases dos
subgrupos dos alelos do sistema ABO.
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Subgrupos ABO
y Teoricamente, a menor reatividade encontrada nos
subgrupos pode ser causada devido as mutações
ocorridas na região de código do gene, ou pela
influência inibitória dos outros loci no gene ABO.
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Subgrupos ABO
53
y Importante: o açúcar imunodominante nos
subgrupos é idêntico aos originais.
y Transfusionalmente não é importante
distinguir-se
subgrupos,
detectá-los. (Molisson, 1992)
mas
sim
DETALHE IMPORTANTE
Ags ABO nos recém-nascidos
54
y Embora os antígenos ABO já estejam expressos desde
5a.
semana de vida intra uterina, o RN apresenta
somente 1/3 dos sítios antigênicos totais de A / B.
y Expressão será máxima aos 2-4 anos de vida.
y Tipagem RN:
y Não liberar resultado como subgrupos !
y (Molisson, 1992)
Subgrupos A
y Subgrupos A:
{
55
Aproximadamente 80% indivíduos A/AB são
A1;
{
19% A2,
{
1% outros subgrupos
Ù (A3,
Aint, Ael, Am, Ax, Ay,etc)
‡ (Molisson, 1992).
Alguns indivíduos que são subgrupos de A podem formar anti-A1.
(1-2% de individuos A2 e 25% de A2B)
Subgrupos A
O alelo A1 difere do alelo A2 devido a substituição de uma única
base (similar nos subgrupos de B)
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Subgrupos de AB
-Subgrupos de AB são classificados em 9 subtipos:
-AxB, A1Bx, AmB, A1Bm, AelB, A1Bel,
-cis A2B3, cis A2B, cis A1B3
- A tabela sumariza a sequência de nucleotídeos nos subgrupos:
Cursos Sem Distância Bioline
Como explicar o surgimento ocasional do
anti-A1 em subgrupos de A?
RN e
Subgrupos
A TOTAL
(A1)
Subgrupos ABO
y Fenótipo A1 # A2:
{
{
Transferase A2 (diferente qualitativamente das A1)
não consegue ligar carboidratos nas cadeias H
ramificadas
Ù diferença
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quantitativa
Antígenos ABO
- Subgrupos A
Transferases
subgrupos
RN
e
Subgrupos
A TOTAL
(A1)
H livres
Detecção de subgrupos A
y Utilizar lectinas (??)
{
{
anti-A1 (Dolichos biflorus)
anti-H (Ulex europeaus)
Fenótipo
Anti-A1
Anti-H
A1
+
0
A2
0
+
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Subgrupos A
y Lectina Anti-A1 :
{
reage
somente
cadeia
ramificada
com
do
antígeno A1.
{
Por
isso
podemos
utilizá-la
na
diferenciação
de
subgrupos!
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Antígenos ABO - Subgrupos de A
RN e
Subgrupos
A TOTAL
(A1)
Lectina anti-A1
CARACTERÍSTICAS SOROLÓGICAS DOS FENÓTIPOS "A"
FENÓTIPOS
ANTISOROS (ANTI-)
ANTICORPOS NATURAIS
ANTÍGENOS
SALIVARES
(SECRETORES)
FIXAÇÃOELUIÇÃO
C/ ANTI-A
A
B
AB
H
Regulares
Irregulares
A1
4+
0
4+
0
anti-B
0
A,H
-
A2
3-4+
0
3-4+
3-4+
anti-B
anti-A1 (1 - 8%)
A,H
-
A3
(㼼㼼)
0
(㼼㼼)
4+
anti-B
anti-A1
(possível)
A,H
-
Ax
0-1+
0
1-2+
4+
anti-B
Anti-A1
(frequente)
H
-
Aend
(㼼)
0
(㼼)
4+
anti-B
anti-A1
(possível)
H
-
Am
0
0
0
4+
anti-B
0
A,H
Positiva
(Forte)
Ay
0
0
0
4+
anti-B
0
A,H
Positiva (Fraca)
Ael
0
0
0
4+
anti-B
anti-A1
(constante)
H
Positiva
(Intermediária)
Variantes de B
y Subgrupos B são muito raros
{
B3, Bx, Bm, Bel, Bweak
y Caracterizam-se
por
fraca
aglutinação
hemácias com soros anti-B e/ou anti-AB.
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das
Variantes de O
y São vários os alelos já descritos que produzem
enzimas O diferentes da O1.
y x Vale lembrar que sorologicamente nenhuma
alteração é visível.
{
Portanto, estes subgrupos de O permanecem sendo
detectados apenas por técnicas moleculares.
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Variantes ABO
y 377 alelos diferentes!
y Variantes de A: 150
y Variantes de B: 108
y Variantes de O: 92
y Outros: 27
y Fontes: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/variation/view/?q=CFH;
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gv/rbc/xslcgi.fcgi?cmd=bgmut/
systems_alleles&system=abo-Acesso 04/04/2016.
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Subgrupos ABO
69
y Sorologicamente:
{
fraca expressão antigênica na
fenotipagem com soros antiA, anti-B, anti-AB*
{
e/ou
discrepâncias
entre
prova direta e reversa
ABO.
E quem
não faz
prova
reversa?
Tecnicas para genotipagem ABO
y Os avanços na biologia molecular na última década
têm
providenciado
aos
bancos
de
sangue
o
conhecimento de diferentes alelos do gene ABO,
assim como diversas técnicas para sua detecção:
y -Análise de Restrição (RFLP)
y -Amplificação Alelo-Específica
y -Técnica de Triagem para detecção de mutações
y -Sequenciamento
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