Antígenos Recombinantes Anticorpos Monoclonais
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AntígenosRecombinantes AnticorposMonoclonais Profª Heide Baida Produçãodeanticorpos Ag A Estimulação antigênica Produção de Anticorpos Ag B Estimulação antigênica Produção de Anticorpos Y Y Ac anti A Ac anti B Ag C Estimulação antigênica Produção de Anticorpos Ac anti C Produção de Anticorpos Ac anti D Ag D Estimulação antigênica ProduçãodeAnticorpos Monoclonais In vivo ocorre que vários clones de linfócitos B diferentes estão produzindo anticorpos • A técnica para a obtenção de um clone produtor de anticorpo (anticorpo monoclonal) consiste em: 1. FUSÃO de 1 linfócito B ativado + 1 célula de mieloma = HIBRIDOMA 2. Para que ocorra a FUSÃO: usa‐se um MEIO SELETIVO – MEIO HAT (hipoxantina, aminopterina, timidina) • ProduçãodeAnticorposMonoclonais ENTÃO: Linfócito B: Mortal, mas com a síntese de nucleotídeos normal Hibridoma Célula de Mieloma Múltiplo: Imortal, mas com a síntese de nucleotídeos deficiente Imortal, mas com a síntese preservada ProduçãodeAnticorpos Monoclonais Produção deAnticorpos Monoclonais AntígenosRecombinantes Produzidos através da tecnologia do DNA RECOMBINANTE utilizando‐se da combinação de genes que são expressos em diferentes hospedeiros CLONAGEM DE GENES: Ocorre através da INSERÇÃO de fragmentos de DNA em VETORES (com capacidade de replicação em células hospedeiras) AntígenosRecombinantes Modelos de expressão da proteína recombinante: BACTÉRIAS: E. coli (proteínas sem glicosilação). Usadas em ensaios sem a necessidade de atividade biológica. Ideal para a produção de fragmentos proteícos FUNGOS: P. pastoris (proteínas com glicosilação). Possuem alto teor de manose, comprometendo a função efetora da proteína produzida INSETOS: células de insetos (Sistema Baculovírus): gene é inserido em gene viral, que por sua vez infectará a célula do inseto. Filogeneticamente diferentes dos mamíferos MAMÍFEROS: rim de macaco, ovários de cobaio, mieloma de camundongos. As células são mantidos em cultura. Ideal para a produção de proteínas mais complexas PLANTAS: ideais para proteínas industriais e farmacêuticas. Filogeneticamente difererentes do mamíferos AntígenosRecombinantes Para utilização em Diagnóstico: aumenta a SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE dos testes, comparados aos antígenos naturais EXEMPLOS: • • • • • • • • Produção de alérgenos Produção de marcadores tumorais Produção de anticorpos recombinantes Linhagens de células de Mieloma: excelentes para a produção de anticorpos humanos e de camundongos. Possibilita a produção de anticorpos QUIMÉRICOS (Ex.: região V do camundongo e região C humana) Produção de hormônios (Ex.: insulina, EPO, GH) Produção de fatores de coagulação Produção de citocinas (Ex.: Interferon, CSF) Produção de vacinas Figurasextraídas: • Biologia Molecular da Célula ‐ Alberts • Imunobiologia – Janeway • Imunologia – Kuby • Google Obrigada!
