ROTENONA EM ALTAS CONCENTRAÇÕES PROMOVE MORTE

ROTENONA EM ALTAS CONCENTRAÇÕES PROMOVE MORTE DE
CÉLULAS DO HIPOCAMPO ANTES DA FORMAÇÃO DE
AGREGADOS AMILÓIDES
Damaris C.S.V.B Alegreti, Thaiany Q.Melo, Merari F.R. Ferrari
Departamento de Neurologia – Faculdade de Medicina - USP
1. Objetivos
A exposição a pesticidas contendo rotenona é
um fator de risco para o desenvolvimento da
doença de Parkinson. No entanto, sua relação
com
a
agregação
de
proteínas
e
desencadeamento
de
outras
doenças
neurodegenerativas não está clara. Com isso, o
presente trabalho tem como objetivo a análise
dos efeitos da exposição de células do
hipocampo a 10nM e 25nM de rotenona na
expressão e agregação da proteína betaamilóide e na viabilidade celular.
2. Metodologia
Foram utilizadas culturas de células do
hipocampo de ratos Lewis neonatos tratadas
por 48 horas com 10nM ou 25nM de rotenona e
com DMSO (0,1% para controle) diluídos em
meio de cultura. As células foram fixadas,
permeabilizadas e submetidas ao procedimento
imunocitoquímico.onde foram incubadas com
anticorpo primário anti beta-amilóide (1/2000),
a 4ºC durante 12h, seguido do anticorpo
secundário biotinilado anti-rabbit (1/230) e
avidina e biotina (1/120). A marcação da
proteína beta-amilóide foi revelada por reação
com cromógeno DAB e H2O2. A lâmina foi
então corada com hematoxilina para marcação
dos núcleos e diafanizada para visualização em
microscópio acoplado a um computador e
registro das imagens para análise.
DMSO
50 m
Rotenona 10nM
50 m
Rotenona 25nM
3. Resultados e Discussão
As células tratadas com 10 e 25nM de rotenona
apresentam núcleos fragmentados revelando o
processo morte quando comparadas com as
células controle (DMSO) (Figura 1). O que
indica a ação da rotenona em células do
hipocampo e sua possível implicação no
desencadeamento
de
doenças
neurodegenerativas como o Alzheimer. Além
disso,
não
houve
identificação
de
imunorreatividade à beta-amilóide indicando
que a morte celular neste caso precedeu a
formação
dos
agregados
amilóides,
provavelmente por causa da concentração
muito elevada da rotenona a que estas células
foram submetidas [1].
4. Conclusão
A exposição de células do hipocampo a altas
concentrações de rotenona promove morte
celular antes da agregação amilóide.
50 m
Figura1. Imagens ilustrando a morte de células do
hipocampo identificada pela fragmentação e retração
nuclear (azul) após exposição a 10 e 25nM de
rotenona durante 48h.
5. Referência Bibliográfica
[1] Ullrich C e Hampell C. (2009) Rotenone
induces cell death of cholinergic neurons in an
organotypic co-culture brain slice model. DOI:
10.1007/s11064-009-00149