NeuroBook:Conversas entre neurónios

Estágio de Verão - Ciência Viva
CNC
Catarina Fernandes
Helga Afonso
Mariana Santos
Mónica Ferreira
Estímulo de morte celular
Quantificação de proteínas
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O hipocampo é uma estrutura localizada nos lobos
temporais do cérebro humano, considerada a
principal sede da memória e importante componente
do sistema límbico.
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Esta estrutura denomina-se “hipocampo” devido à
sua forma curva, que se assemelha a um cavalomarinho (Grego: hippos = cavalo, kampi = curva).
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Esta estrutura é muito importante :
◦ Para converter a memória a curto prazo em memória
a longo prazo.
◦ Pois permite ao mamífero comparar as condições de
uma ameaça actual com experiências passadas
semelhantes, permitindo-lhe, assim, escolher qual a
melhor opção a ser tomada para garantir o seu bemestar.
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As lesões no hipocampo impedem a pessoa de construir
novas memórias e a pessoa tem a sensação de viver num
lugar estranho onde tudo o que experimenta
simplesmente se desvanece, mesmo que as memórias
mais antigas anteriores à lesão permaneçam intactas.
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Sacrificou-se o rato fêmea;
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Retiraram-se os embriões do seu interior;
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Extraímos os seus cérebros e de seguida os 2
hipocampos de cada cérebro;
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Colocámos os hipocampos em soluções, que
permitiu extrair os neurónios para depois os pôr
em cultura.
Cultura de neurónios
com 8DIV
Conjuntos de técnicas que utilizam
anticorpos para identificar macromoléculas,
no nosso caso, para identificar as proteínas.
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Fixação;
Permeabilização;
Bloqueio;
Incubação com os anticorpos primários;
Incubação com os anticorpos secundárias;
Preparação das lâminas e lamelas;
Visualização ao microscópio de fluorescência.
Marcámos a PSD-95 e a Geferina com
os anti-corpos de fluorescência. Assim
foi possível visualizarmos ao microscópio
de fluorescência.
A PSD é específica das sinapses
glutamatérgicas (excitatórias) enquanto
que a Geferina é específica de sinapses
gabaérgicas (inibitórias).
Normalmente usado:
◦ Laboratórios de investigação médica e
biológica;
◦ Detecções de doenças hereditárias;
◦ Identificação de “impressões digitais”
genéticas;
◦ Construção de relações entre espécies;
◦ Clonagem de genes;
◦ Testes de paternidade;
◦ Genotipagem.
PCR consiste em
três fases:
Desnaturação,
Annealing e
Extensão
Gráfico obtido a partir do termociclador.
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O produto do PCR pode
ser visualizado após a
electroforese em gel de
agarose e o seu
tamanho é estimado
com padrões lineares
de DNA.
Electroforese-gel de
agarose
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