Microbiologia ambiental Engenharia do Ambiente Escola Superior Agrária Instituto Politécnico de Coimbra [email protected] www.esac.pt/abelho 1.1 PERSPECTIVA HISTÓRICA DA MICROBIOLOGIA Módulo 1. Ecologia microbiana Para além marcos históricos, muitos outros podem ser encontrados em: Parte 1.destes Introdução MicrobeWorld http://www.microbeworld.org/index.php?option=com_content&view=category&layout=bl og&id=65&Itemid=202 American Society of Microbiology http://www.asm.org/index.php/membership/significan-events125.html?title=Significant+Events+Of+The+Last+125+Years+ Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 2 Os acontecimentos mais relevantes da Microbiologia nos últimos 150 anos http://www.microbeworld.org/index.php?option=com_content&view=categ ory&layout=blog&id=64&Itemid=61 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 3 1861 Pasteur, L. 1861. "Animalcules infusoires vivant sans gaz oxygene libre et determinant des fermentations." Compt. Rend. Acad. Sci. (Paris) 52: 344347 • Louis Pasteur introduziu os termos aeróbio e anaeróbio ao descrever o crescimento das leveduras à custa do açúcar na presença ou na ausência de oxigénio – Observou que era produzido mais álcool quando o açúcar era fermentado na ausência de oxigénio, actualmente denominado “o efeito Pasteur” Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 4 1870 Biogenesis and Abiogenesis (http://aleph0.clarku.edu/huxley/CE8/ B-Ab.html) James Strick. 1999.Darwinism and the Origin of Life: the Role of H.C. Bastian in the British Spontaneous Generation Debates, 1868-1873. Journal of the History of Biology, 32 :1-42 [pdf ] • Thomas Huxley, no seu discurso “Biogenesis and Abiogenesis”, aplicou pela primeira vez os princípios do darwinismo à questão da origem da vida • Os termos biogénese (vida apenas a partir de vida pré-existente) e abiogénese (vida a partir de materiais não vivos, anteriormente designada por geração espontânea) utilizados por Huxley tornaram-se o padrão para o tema da origem da vida • O discurso constituiu um sólido suporte para os resultados das experiência de Pasteur com os frascos de pescoço de cisne, que provaram que a geração espontânea não existia Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 5 1872 |1875 Ferdinand Cohn, a Founder of Modern Microbiology, ASM News 65. 1999.p.547 (pdf) • Ferdinand Cohn contribuiu para a fundação da ciência da bacteriologia • Os seus trabalhos incidiram sobre a morfologia, o desenvolvimento e a taxonomia de algas e de fungos; fundou a revista científica Beiträge zur Biologie der Pflanzen (1870); publicou uma classificação das bactérias utilizando o nome do género Bacillus pela primeira vez (1875); foi colaborador de Robert Koch no estudo do antraz • Publicou “Ueber Bakterien”, onde discute o papel dos microrganismos na reciclagem dos elementos na natureza (1872) Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 6 1872 Brefeld, O. 1972. Botanische Untersuchungen uber Schimmelpilze, Heft I, Mucor mucedo, Chaetocladium Jones ii, Piptocephalis Fresiana: Zygomyceten, Leipzig. Schroeter, J. "Ueber einige durch Bacterien gebildete Pigmente."Beitr. Z. Biol. D. Pflanzen1:2, 109-126. Manuela Abelho 2012 • Brefeld reportou o crescimento de colónias de fungos a partir de esporos isolados em superfícies gelatinosas • Antes desta inovação que permitiu o isolamento em cultura pura de microrganismos, Schroeter tinha isolado colónias de bactérias em fatias de batata incubadas em ambiente húmido Microbiologia ambiental 7 1876 Koch, R. 1876. Untersuchungen ueber Bakterien V. Die Aetiologie der Milzbrand-Krankheit, begruendent auf die Entwicklungsgeschichte des Bacillus Anthracis. Beitr. z. Biol. D. Pflanzen 2: 277-310. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p89 [pdf ]. Manuela Abelho 2012 • Robert Koch publicou um trabalho sobre o antraz, dizendo explicitamente que a causa da doença era uma bactéria, o que confirmou a teoria dos “germes” como causadores das doenças • O seu trabalho sobre antraz foi “apadrinhado” por Ferdinand Cohn Microbiologia ambiental 8 1877 Schloesing, J. and A. Muntz. 1877. Sur la Nitrification par les Ferments Organises. Comptes Rendus de l'Academie des Sciences, Paris, LXXXIV: 301-303. Koch, R. 1877. Verfahren zur Untersuchung, zum Conservieren und Photogaphiren der Bakterien. Beitraege zur Biologie der Pflanzen. 2: 399-434 • Utilizando vapores de clorofórmio para inibir a produção de nitrato, Jean Jacques Theophile Schloesing provou que a nitrificação é um processo biológico do solo; uma das aplicações mais importantes deste conhecimento é o tratamento dos esgotos • Robert Koch desidratou, corou com azul de metileno e fotografou biofilmes de bactérias; utilizou lamelas para preparar registos visuais permanentes • John Tyndall publicou um método para a esterilização e clarificou o papel dos esporos resistentes ao aquecimento no processo da putrefacção.; a conclusão de Tyndall encerrou os trabalhos de Pasteur e outros que provam que a geração espontânea é impossível Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 9 1878 Bacteria as the Cause of Disease in Plants: A Historical Perspective, ASM News 45, 1979. p.1 [pdf] Lister, J. 1878. On lactic fermentation and its bearing on pathology. Trans Path. Soc., Lond. xxix: 425-67. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p58 [pdf] Manuela Abelho 2012 • Thomas Burrill demonstrou que a bactéria Micrococcus amylophorous causava a doença das pereiras • Joseph Lister publicou um estudo sobre a fermentação láctica do leite, mostrando as causas do leite azedo; a sua pesquisa foi conduzida utilizando o primeiro método desenvolvido para o isolamento em cultura pura de uma bactéria, que ele designou Bacterium lactis Microbiologia ambiental 10 1878 | 1880 Lewis, T.R. (1878) "The microscopic organisms found in the blood of man and animals and their relation to disease." Ann. Rpt. San. Commis. Govt. India, Calcutta 14:157 Lewis, T.R. (1879) "Flagellated organisms in the blood of healthy rats." Quart. J. Micr. Sci. 19:109 Evans, G. (1880) "Report on the 'surra' disease in the Dera Ismail Khan District." Punjab Govt. Milit. Dept. No. 493:446 Manuela Abelho 2012 • Vários trabalhos mostraram a importância dos protozoários tripanossomas nas doenças dos mamíferos • Timothy Lewis publicou um trabalho sobre o Trypanosoma lewisi, um parasita da ratazana indiana • Griffith Evans descobriu o tripanossoma patogénico, Trypanosoma evansi, em cavalos e camelos da Índia Microbiologia ambiental 11 1880 Plasmids, Pasteur, and Anthrax, ASM News 49,1983. p.320 [pdf] Pasteur, L. 1880. De l'attenuation du virus cholera des poules. Compte rend. Acad. se. 91: 673-680 In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p126 [pdf] Manuela Abelho 2012 • Louis Pasteur desenvolveu um método para atenuar o agente da cólera, de forma a imunizar e não causar a doença, um passo fundamental para a protecção contra a doença através da inoculação de uma estirpe atenuada do agente patogénico • Pasteur usou a palavra “atenuado” no sentido de enfraquecido, assumindo que o conceito provinha de Edward Jenner, o primeiro a obter sucesso na vacinação contra a varíola Microbiologia ambiental 12 1880 1907 Prémio Nobel Laveran, A. 1880. A new parasite found in the blood of malarial patients. Parasitic origin of malarial attacks. Bull. mem. soc. med. hosp. Paris. 17: 158164. Manuela Abelho 2012 • C. L. Alphonse Laveran descobriu parasitas da malária nos eritrócitos de indivíduos infectados e demonstrou que os parasitas entram no organismo e se multiplicam • Recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1907 Microbiologia ambiental 13 1881 Gesundheitsampte 1: 1-48. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p101 [pdf] Koch, R. "Ueber Desinfection." Mittheilungen aus dem kaiserlichen Gesundheitsamt 1:234-282, 1881 • Robert Koch publicou “Methods for the Study of Pathogenic Organisms” • Procurando alternativas aos meios líquidos, primeiro usou fatias de batata como substrato sólido para cultivar microrganismos; depois adicionou gelatina aos meios de cultura para os solidificar • O meio sólido em placa é usado para o isolamento de microrganismos a partir de colónias que crescem na superfície do meio sólido Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 14 1881 Ehrlich, P. 1882. Aus dem Verein fur innere Medicin zu Berlin. Deutsche medizinische Wochenschrift 8:269-270 In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p118 [pdf] • Robert Koch testoua a eficácia dos desinfectantes químicos demonstrando que o ácido carbólico usado por Lister nas cirurgias era bacteriostático e não bactericida • Utilizando esporos de antraz verificou que a desinfecção dependia da concentração do produto e do tempo de contacto; secava os esporos, expunha-os ao desinfectante, lavava-os com água estéril e cultivava-os para avaliar a eficácia dos produtos • Paul Ehrlich melhorou o método da coloração com azul de metileno e utilizou-o para corar bacilos, demonstrando que o corante se ligava à bactéria e resistia à descoloração com álcool Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 15 1882 Walther and Angelina Hesse: Early Contributors to Bacteriology, ASM News 58, 1992. p.425 [pdf] Koch, R. 1882. Die Aetiologie der Tuberculose. Berl. Klin. Wchnschr., xix: 221-230. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p109 [pdf] • No laboratório de Koch, Angelina Fannie e Walther Hesse utilizaram agar, um extrato de algas, como agente solidificante para os meios de cultura – Angelina sabia que o agar era utilizado na culinária; o agar é melhor que a gelatina porque se mantém sólido a temperaturas elevadas, é translúcido e resiste à digestão pelas enzimas bacterianas • Robert Koch também mencionou a cultura de bactérias em agar-agar em “The Aetiology of Tuberculosis” • Robert Koch isolou o bacilo Mycobacterium tuberculosis a partir de tecidos de um trabalhador infectado.; depois de o corar com azul de metileno verificou que era um bacilo curvo Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 16 1883 Klebs, E. 1883. Ueber Diphtherie. Verh. D. Congresses f. Inn. Med., II. Congr.Bergmann Weisbaden. 139-154. Loeffler, F. 1884. Utersuchung uber die Bedeutung der Mikroorganismen fir die Entstehung der Diptherie beim Menschen, bei der taube und beim Kalbe. Mitth. a. d. kaiserl. Gesundheitsampte. Ii: 421-499. • Edward Theodore Klebs e Fredrich Loeffler descobriram independentemente Corynebacterium diphtheriae, causador da difteria • Loeffler mostrou posteriormente que a bactéria segrega uma substância solúvel que afecta os órgãos • Ulysse Gayon e Gabriel Dupetit isolaram duas estirpes de bactérias desnitrificantes – Mostraram que compostos orgânicos como os açucares e os álcoois podem substituir compostos orgânicos complexos como redutores para o nitrato, servindo também como fontes de carbono Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 17 1884 1908 Nobel Prize Centennial of the Rise of Cellular Immunology: Discovery at Messina, ASM News 48, 1982. p.558 [pdf] • Ilya Ilich Metchnikoff demonstrou que certas células do corpo se movem para zonas afectadas onde consomem bactérias e outras partículas estranhas ao corpo, processo que denominou fagocitos • Propôs a teoria da imunidade celular • Com Ehrlich, Metchnikoff recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1908 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 18 1884 1905 Prémio Nobel The Etiology of Tuberculosis: A Tribute to Robert Koch on the Occasion of the Centenary of His Discovery of the Tubercule Bacillus, ASM News 48, 1982. p.248 [pdf] Preface to Brock's Robert Koch: A Life in Medicine and Bacteriology by James Strick [pdf] • Robert Koch publicou “The Etiology of Tuberculosis” onde apresenta uma série de postulados ou padrões de prova envolvendo o bacilo da tuberculose • Incluiu a demonstração de 3 factos principais: – 1) a presença do bacilo (provada através de coloração) nas lesões de vários órgãos de humanos e animais; – 2) o crescimento dos bacilos em cultura pura em linfa; – 3) a produção de tuberculose em porquinhos da Guiné inoculados com estas culturas puras • Recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1905 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 19 1884 Gram, C. 1884. Ueber die isolirte Farbung der Schizomyceten in Schittund Trockenpreparaten, Fortschritte der Medicin, 2: 185-189. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p215 [pdf] Chamberland, C. 1884. Sur un filtre donnant de l'eau physiologiquement pure. Compt. Rend. Acad. d. sc. Paris. xcix: 247 Manuela Abelho 2012 • Hans Christian J. Gram desenvolveu um método de coloração para a identificação de bactérias (coloração de Gram) – A distinção na coloração só mais tarde é relacionada com diferenças bioquímicas e morfológicas • Juntamente com Pasteur, a empresa francesa Chamberland's Autoclave, desenvolveu uma câmara para esterilizar materiais usando vapor sobre-aquecido Microbiologia ambiental 20 1885 Pasteur: High Priest of Microbiology, ASM News 61, 1995. p.575 [pdf] Pasteur's Dilemma: The Road Not Taken. ASM News vol. 40, 1974, p. 703 [pdf] Preface to René Dubos' Pasteur and Modern Science by Gerald L. Geison [pdf] • Na sua pesquisa sobre a raiva, Louis Pasteur injectou repetidamente uma criança com medula óssea infectada com o vírus da raiva • Pasteur usou o termo vírus como sinónimo de veneno, embora não fizesse ideia de qual era o organismo causador da doença • O tratamento teve sucesso mas constituiu uma violação ética dos padrões de investigação Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 21 1885 Ehrlich, P. 1885. Das SauerstoffBedurfniss des Organismus, eine farbanalytische Studie. Hirschwald, Berlin. Escherich, T. 1885. Die Darmbakterien des Neugeborenen und Sauglings, Fortschr.d. Med. 3: 515-522; 251-251, • Paul Ehrlich expôs a teoria de que certos químicos, como os corantes, afectam as células bacterianas, concluindo que eram tóxicos para os microrganismos • O seu trabalho constituiu a fundação para a utilização do arsénio como tratamento contra a sífilis • Theodor Escherich identificou uma bactéria, habitante do intestino humano, à qual chamou Bacterium coli e mostrou que certas estirpes eram responsáveis pela diarreia infantil e pela gastroenterite Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 22 1886 Buist, John Brown. "The life history of the micro-organisms associated with variola and vaccinia...." Proc. R. Soc. Edinb., 13:603-20. Manuela Abelho 2012 • John Brown Buist desenvolveu um método para a coloração e a fixação de material linfático a partir de uma vesícula de varíola de vaca • Pensou que observava esporos, mas na realidade foi a primeira pessoa a observar e fotografar um vírus Microbiologia ambiental 23 1887 Winogradsky, S. 1887. Uber Schwefelbacterien. Botanische Zeitung. XLV: 489-507. Petri, R. J. 1887. Eine kleine Modification des Koch'schen Plattenverfahrens. Centralbl. F. Bakteriol., etc., 1: 279-280 In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p218 [pdf] Manuela Abelho 2012 • Sergei Winogradsky descobriu que a bactéria Beggiatoa utiliza H2S inorgânico como fonte de energia e CO2 como fonte de carbono – Estabeleceu o conceito de autotrofia e a sua relação com os ciclos biogeoquímicos • Trabalhando no laboratório de Koch, Julius Richard Petri introduziu um novo tipo de recipiente para a cultura em meio semi-sólido ou sólido (caixa de Petri): a caixa tem uma tampa que impede a sua contaminação Microbiologia ambiental 24 • Fundação do Instituto Pasteur em França 1888 From "Diphtheritic" Poison to Molecular Toxinology, ASM News 53, 1987. p.547 [pdf] Early Biotechnology: The Delft Connection, ASM News 59, 1993. p.401 [pdf] Beijerinck, M. 1888. Die Bakterien de Papilionaceenknollchen. Botanische Zeitung, Vol. 46: 725-804. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p220 [pdf] • Emile Roux e Alexandre Yersin mostraram que Cornyebacterium diphtheriae afecta os tecidos e os órgãos pela produção de uma toxina; utilizaram um filtrado de células que podiam matar directamente animais • Martinus Beijerinck utilizou uma cultura enriquecida sem compostos de azoto, para obter uma cultura pura de Rhizobium, a bactéria dos nódulos da raiz das leguminosas; demonstrou que os meios de cultura enriquecidos criam condições óptimas para o crescimento de um dado microrganismo • Hellriegel e Wilfarth descreveram a fixação simbiótica de azoto pelos nódulos da raiz das leguminosas Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 25 1889 Kitasato, S. "Ueber den Tetanusbacillus." Ztschr. Hyg. u. Infektionskrank. 7:225-234, 1889 • Shibasaburo Kitasato obteve a primeira cultura pura do bacilo do tétano Clostridium tetani, um microrganismo anaeróbio obrigatório • Usando o conhecimento de que os esporos de Clostridium são extremamente resistentes ao calor, aqueceu uma cultura mista de C. tetani e outras bactérias a 80ºC durante 1 hora (para remover o oxigénio), incubando-a depois em atmosfera de hidrogénio Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 26 1890 1901 Prémio Nobel Behring, E. and Kitasato, S. 1890. Ueber das Zustandekommen der Diphtherie-Immunitat und der Tetanus-Immunitat bei thieren. Deutsche medizinsche Wochenschrift 16:1113-1114 In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p138 [pdf] Computer Rendu Vol 110: 1013-1016 In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p231 [pdf] • Emil von Behring e Shibasaburo Kitasato anunciaram em Berlin a descoberta da antitoxina da difteria, a primeira abordagem racional à terapia das doenças infecciosas – Injectaram uma dose sub-letal de um filtrado de difteria em animais e produziram um soro especificamente capaz de neutralizar a toxina; depois injectaram o soro com a antitoxina num animal não infectado para prevenir futuras infecções • Behring recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1901 • Sergei Winogradsky isolou bactérias nitrificantes do solo – No período 1890-1891, desenvolveu os trabalhos mais importantes no campo dos microrganismos responsáveis pelos processos de nitrificação Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 27 1892 When Did Virology Start, ASM News 62, 1996. p.142 [pdf] Tobacco Mosaic Virus and Its Contributions to Virology, ASM News 65, 1999.p.675 Welch W. H. and G. Nuttall. 1892. A gas-producing bacillus (b. aerogenes capsulatus, nov.spec.) , capable of rapid development in the blood vessels after death. Johns Hopkins Hosp. Bull. 3: 81-91. Manuela Abelho 2012 • Dmitri Ivanowski publica a primeira evidência da filtrabilidade de um agente patogénico, o vírus do mosaico do tabaco, iniciando o campo da virologia • William Welch e George Nuttall identificam Clostridium perfringens, a bactéria responsável pela gangrena Microbiologia ambiental 28 1893 Smith, T. and F. L. Kilbourne. 1893. Investigations into the nature, causation and prevention of Texas or southern cattle fever. Bur. Anim. Ind. Bull. 1: 151-152. Manuela Abelho 2012 • Theobald Smith e F.L. Kilbourne demonstram que as pulgas transportam Babesia microti, causador da babesiose em animais e humanos • Esta foi a primeira demonstração de uma doença zoonótica e também a base para o estudo posterior das doenças dos hospedeiros animais e dos vectores artrópodes Microbiologia ambiental 29 1894 Pfeiffer, R. 1894. Weitere Untersuchungen ueber das Wesen der Choleraimmunitat und ueber specifisch baktericide Processe. Ztschr. f. Hyg. u. Infektionskrankh. xviii: 1-16. Yersin, A. 1894. La peste bubonique a Hong Kong. C. r. Acad. Sci. 119: 356. Kitasato, S. 1894. Preliminary notice of the bacillus of bubonic plague. Practitioner 53: 311. Beijerinck, M. 1894. Noty uber dur nacheveis vom protozoen und spirillum in trinkwasser. Centralbl. f. Bakteriol. 15: 10-15 • Richard Pfeiffer observou que um material tóxico, termo-resistente, ligado à membrana de Vibrio cholerae, se liberta após a desintegração das células, chamando-lhe endotoxina • Alexandre Yersin isolou Yersinia (Pasteurella) pestis, o microrganismo responsável pela peste bubónica • Shibasaburo Kitasato também observou a bactéria em casos de cólera • Martinus Beijerinck isolou a primeira bactéria redutora de sulfato, Spirillum desulfuricans (Desulfovibrio desulfuricans) Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 30 1895 Winogradsky, S. 1895. Recherches sur l'assimilation de l'azote libre de l'atmosphere par les microbes. Arch. d. Sci. Biol., Institut Imperial de Medicine Experimentale, St. Petersburg, Vol. 4. Bruce, D. "Preliminary Report on the Tsetse-Fly Disease, or Nagana, in Zululand." Durban: Bennett & David 1895. Manuela Abelho 2012 • Sergei Winogradsky isolou a primeira bactéria fixadora de azoto de vida livre, Clostridum pasteurianum • David Bruce descreveu a doença do sono, cujo vector é a mosca Tsetse, incluindo o parasita Trypanosoma e demonstrou que a transmissão é feita por sangue infectado ou por picada da mosca Microbiologia ambiental 31 1896 1929 Prémio Nobel Christan Eijkman: Early Nobel Winner for Beriberi Research ASM News 64, 1998. p.688 Manuela Abelho 2012 • Christan Eijkman descobriu que o beriberi é o resultado de uma deficiência vitamínica • Recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1929 Microbiologia ambiental 32 1897 1907 Prémio Nobel Buchner, E. 1897. Alkoholische Gahrung ohne Hefezellen. Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft, 30: 117-124. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p65 [pdf] Wright, A. E. and D. Sample. 1897. Remarks on vaccination against typhoid fever. British Medical Journal. I: 256-259. Manuela Abelho 2012 • Edward Buchner publicou a primeira evidência de fermentação extra-celular utilizando extractos de levedura e lançou as bases da ciência da enzimologia • Recebeu o Prémio Nobel da Química em 1907 • Almwroth Wright e David Sample desenvolveram uma vacina eficaz contra a febre tifóide, utilizando células mortas de Salmonella typhi Microbiologia ambiental 33 1899 1902 Prémio Nobel Martinus Beijerinck (1851-1931), ASM News 62, 1996. p.539 [pdf] • Ronald Ross mostrou que o parasita da malária tem parte do seu ciclo de vida nos mosquitos e que a doença é transmitida pela picada de mosquitos-fêmea • Recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1902 • Martinus Beijerinck descobriu a existência de micróbios “solúveis” vivos, um termo que aplicou ao vírus do mosaico do tabaco • Demonstrou que o sumo produzido pela pressão das folhas do tabaco, depois de filtrado – logo sem bactérias – e mesmo depois de várias diluições, pode causar a doença em plantas sãs • Dá o nome de “fluido vivo contagioso" ao agente da doença Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 34 1900 Reed, W. 1911. Papers by various authors of the Yellow Fever Commission. Sen. Doc. 822. Washington, D. C. W. Ophuls and H. C. Moffitt correctly identify the etiologic agent of coccidioidomycosis, Coccidiodes immitis, as a mold. This was formerly described as a protozoan. Ophuls, W. and H. Moffitt. 1900. A new pathogenic mould. Philadelphia Med. J. 5: 1471-1472 Manuela Abelho 2012 • Com base no trabalho de Walter Reed, demonstrou-se que a Febre Amarela é causada por um vírus filtrável transmitido por mosquitos • Foi o primeiro relatório de um agente viral causador de doenças nos humanos • O mosquito foi erradicado em consequência deste conhecimento Microbiologia ambiental 35 1901 Wildiers, E. 1901. A new substance indispensable to the development of yeast. La Cellule. 18: 313-332. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p240 [pdf] Manuela Abelho 2012 • E. Wildiers publicou a primeira descrição de um factor de crescimento microbiano (mais tarde chamado Vitamina B), abrindo o campo da pesquisa das vitaminas Microbiologia ambiental 36 1904 Beijerinck, M. 1904. Phenomenes de reduction produits par les microbes. Arch. Neerl. (section 2) 9: 131-157. Koning, C. J. 1904. Beitrage zur kenntnis des lebens dur humuspilze und der chemischen vorgange bei der humusbildung. Arch. Neerland. Sci. Exact. Et Nat. 9:34-107. Manuela Abelho 2012 • Martinus Beijerinck obteve a primeira cultura pura da bactéria sulfurosa, Thiobacillus denitrificans – Sob condições anaeróbias, a bactéria utiliza CO2 como fonte de carbono • Cornelius Johan Koning sugeriu que os fungos têm um papel importante na decomposição da matéria orgânica e na formação do húmus Microbiologia ambiental 37 1905 Schardinger, F. 1904. Bacillus macerans. Centralblatt f. Backteriologie, II XIV: 772. Metchnikoff and Syphilis Research during a Decade of Discovery, ASM News 62, 1966. p.307 [pdf] Ishiwata, S. 1905. Concerning "SottoKin" a bacillus of a disease of the silkworm. Rept. Assoc. Seric. Japan. Pp. 160-161. Manuela Abelho 2012 • Franz Schardinger isolou bacilos aeróbios que produzem acetona, etanol e ácido acético • Fritz R. Schaudinn e Erich Hoffman identificaram a bactéria espiralada Treponema pallidum, causadora da sífilis • Shigetane Ishiwata descobriu a bactéria que causa a doença dos bichos-da-seda, mais tarde denominada Bacillus thuringiensis Microbiologia ambiental 38 1906 Sohngen, N. L. 1906. Ueber Bakterien, welche Methan als Kohlenstoffnahrung and energiequelle gebrauchen. Zentralbl. Bakteriol. Parasitik. Abt. I. 15: 513-517 Darling, S. T. 1906. A protozoan general infection producing pseudo tubercules in the lungs and focal necroses in the liver, spleen, and lymph nodes. JAMA. 46: 1283-1285. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.4 [pdf]. Manuela Abelho 2012 • N. L. Sohngen apresentou resultados sobre bactérias que utilizam e que produzem metano; foi a primeira prova de que o metano pode ser utilizado pelas bactérias como fonte de energia e como fonte de carbono • Samuel Darling autopsiou um paciente com uma doença semelhante à tuberculose e, acreditando que se tratava de um protozoário, denomina o novo agente Histoplasma capsulatum • Hoje sabe-se que era um fungo Microbiologia ambiental 39 1909 Ricketts, H. 1909. A micro-organism which apparently has a specific relationship to Rocky Mountain spotted fever. J. Am. Med. Soc. 52: 379-380. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.8 [pdf] Chagas, C. "Ueber eine neue Trypanosomiasis des Menschen." Mem. Inst. Oswaldo Cruz 1:158-218 Manuela Abelho 2012 • Howard Ricketts demonstrou que a febre das Montanhas Rochosas é causada por um microrganismo cujo tamanho é intermédio entre um vírus e uma bactéria: Rickettsia, que é transmitido pelas pulgas • Carlos Chagas descobriu e deu o nome a Trypanosoma cruzi, o causador da doença de Chagas, que é transmitido pela picada de um insecto Microbiologia ambiental 40 1911 1966 Prémio Nobel Rous, Peyton. 1911. Transmission of a malignant growth by means of a cell free filtrate. JAMA. 56: 198. Rous, Peyton. 1911. A sarcoma of the fowl transmissable by an agent separable from the tumor cells. J. Ex. Med. 13:397-411 • Francis Peyton Rous descobriu um vírus que pode causar cancro nas galinhas – Em 1909, um agricultor levou-lhe uma galinha com um tumor; extraiu células do tumor e injectou-as noutras galinhas, que também desenvolveram tumores. • Foi a primeira prova experimental de um agente infeccioso do cancro • Juntamente com Charles B. Huggins, recebeu o Prémio Nobel em Medicina ou Fisiologia em1966 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 41 1912 Ehrlich, P. 1912. Ueber Laboratoriumsversuche und klinische Erprobung von Heilstoffen. Chem. Ztg. 36: 637-638. Manuela Abelho 2012 • Paul Ehrlich descobriu uma cura para a sífilis, um derivado do arsénio e o primeiro agente quimioterapéutico (Salvarsan) para uma doença bacteriana • Levou as novidades do tratamento para Londres, onde Alexander Fleming foi um dos poucos médicos a administrá-lo Microbiologia ambiental 42 1915 Twort, F. 1915. An investigation on the nature of ultra-microscopic viruses. Lancet, 2: 1241-1243. Weizmann, C. 1915. British patent, 845. McCrady, M.H. "The Numerical Interpretation of Fermentation Tube Results." J. Infect. Dis. 17:183 • Frederick Twort anunciou a descoberta do primeiro bacteriófago (vírus que infecta bactérias) • Chaim Weizmann, com base no conhecimento providenciado por Pasteur de que as leveduras fermentam açúcares, usou Clostridium acetobutylicum para produzir acetona e álcool butílico, produtos essenciais para o fabrico de explosivos durante a Primeira Guerra Mundial • McCrady forneceu uma forma de análise quantitativa de coliformes em amostras de água, usando a fermentação em tubos múltiplos e o número mais provável (NMP). Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 43 1917 Felix d'Herrelle: His Life and Work and the Foundation of a Bacteriophage Reference Center, ASM News 48, 1982. p.297 [pdf] Currie, J. N. 1917. The citric acid fermentation of Asperigillus niger. J. Bio. Chem. 31: 15-37. Manuela Abelho 2012 • Independentemente de Frederick Twort, Felix d'Herrelle descreveu vírus das bactérias e denominou-os bacteriófagos • J. N. Currie descobriu como produzir ácido cítrico em grandes quantidades fazendo crescer o fungo Aspergillus niger num meio rico em ferro Microbiologia ambiental 44 1918 Seeking the 1918 Spanish Influenza Virus, ASM News 65, July 1999. • No Outono de 1918, no final da Primeira Guerra Mundial, uma pandemia de gripe muito virulenta varreu o planeta, matando 40 milhões de pessoas • A procura do agente responsável pela pandemia iniciou-se nesse mesmo ano e culminou com o primeiro isolamento de um vírus da gripe em 1930 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 45 1924 Calmette, A. and C. Guerin. 1924. Vaccination of bovines against tuberculosis. Ann. Inst. Pasteur. 38: 371-398. Klyuver, A. J. 1924. Eenheid en verscheidenheid in de stofwisseling der microben. Chem. Weekbl. 21, 26680. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.188 [pdf] Manuela Abelho 2012 • Albert Calmette e Camille Guerin utilizaram uma estirpe viva avirulenta de tuberculose, o BCG, para a imunização contra a doença • Albert Jan Kluyver publicou o artigo "Unity and Diversity in the Metabolism of Micro-organisms" que demonstrou a existência de reacções metabólicas comuns em diferentes microrganismos: oxidação, fermentação e biossíntese • Klyuver também refere que a vida na terra seria impossível sem microrganismos Microbiologia ambiental 46 1926 Rivers, T. 1927. Filterable viruses. A critical review. J. Bact. 14: 217. Kluyver, A. J. and H. J. L. Donker. 1926. Die einheit in der biochemie. Chem. Zelle Geweke. 13: 134-190. Murray, E.G.D., R. A. Webb, and M.B.R. Swann. 1926. A disease of rabbits characterized by a large mononuclear leucocytosis, caused by a hitherto undescribed bacillus Bacterium monocytogenes. J. Pathol. Bacteriol. 29:407-39 • Thomas Rivers distinguiu bactérias de vírus, estabelecendo a virologia como uma área separada da bacteriologia • Albert Jan Kluyver e Hendrick Jean Louis Donker propuseram um modelo universal, aplicável a microrganismos aeróbios e anaeróbios, para as reacções metabólicas das células, com base na transferência de átomos de hidrogénio • Everitt Murray isolou em coelhos, a bactéria responsável pela listeriose em humanos; chamou-lhe Bacterium monocytogenes, mas actualmente chama-se Listeria monocytogenes – A bactéria pode crescer a baixas temperaturas e é frequentemente encontrada nos alimentos. Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 47 1929 1945 Prémio Nobel Fleming, A. 1929. On the antibacterial action of cultures of a Penicillium, with a special reference to their use in the isolation of B. influenze. Brit. J. Exp. Path. 10: 226-236. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.98 [pdf] In Praise of Antibiotics, ASM News 65, 1999. p.304 • Alexander Fleming publicou a primeira descrição da penicilina e dos seus efeitos nos microrganismos Gram-positivos • Esta descoberta é um exemplo raro de lise bacteriana e não de apenas antagonismo (amensalismo) do fungo Penicillium – Fleming mantinha as suas culturas de bactérias 2-3 semanas; ao olhar para uma cultura verificou que as bactérias pareciam estar a dissolver-se e que um fungo contaminava a cultura • A penicilina foi produzida comercialmente nos anos 1940, lançando a “Era dos Antibióticos”, uma revolução na saúde pública e na medicina • Fleming recebeu, juntamente com Florey e Chain, o Prémio Nobel em Medicina ou Fisiologia em 1945 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 48 1931 van Niel Remembered, ASM News 53, 1987. p.75 [pdf] van Neil, C. B. 1931. On the morphology and physiology of the purple and green sulfur bacteria. Arch. Mikrobiol. 3: 1-112. Elford, W. J. 1931. A new series of graded colloidal membranes suitable for general bacteriological use, especially in filterable virus studies. J. Pathol Bacteriol. 34: 505-521. Manuela Abelho 2012 • C. B. van Niel demonstrou que as bactérias fotossintéticas utilizam compostos reduzidos como dadores de electrões sem produzir oxigénio – As bactérias sulfurosas utilizam H2S como fonte de electrões para a fixação de dióxido de carbono, enquanto as plantas utilizam água e libertam oxigénio • William Joseph Elford descobriu que o tamanho dos vírus varia desde o de moléculas grandes de proteína ao de pequenas bactérias Microbiologia ambiental 49 1934 Marton, L. 1934. La microscopie electronique des onjectes biologiques. Bull. Acad. Belg. Cl. Sci. 20: 439-466. de Monbreun, W. A. 1934. The cultivation and cultural characteristics of Darling's Histoplasma capsulatum. Am. Jour. Trop. Med. 14: 93-125. • Ladislaus Laszlo Marton foi o primeiro a observar especimens biológicos com o microscópio electrónico • Em 1937 publicou as primeiras fotografias ao microscópio electrónico de bactérias • William de Monbreun descreveu a natureza dimórfica de Histoplasma capsulatum, depois de ter observado o desenvolvimento de bolores num doente com leveduras – Vários fungos apresentam a capacidade de alternar, em diferentes fases do seu ciclo de vida, entre a forma unicelular (levedura) e a forma pluricelular (bolor) Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 50 1935 1939 Prémio Nobel Domagk, G. J. 1935. Ein Beitrag zur Chemotherapie der bakteriellen infektionen. Dtsch. med. Wochenschr. 61: 250-253. In Milestones in Microbiology: 1556 to 1940, translated and edited by Thomas D. Brock, ASM Press. 1998, p195 [pdf] • Gerhard J. Domagk utilizou um antimetabolito sintetizado quimicamente (Protonsil), para matar Streptococcus em ratos • Um dos primeiros pacientes a ser tratado com Protonsil foi a sua filha, que tinha uma infecção estreptocócica que não respondia a outros tratamentos • Quase a morrer, foi injectada com uma grande quantidade de Protonsil, recuperando da doença • Domagk recebeu o Prémio Nobel em Medicina ou Fisiologia em 1939 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 51 1940 1945 Prémio Nobel Abraham, E.P. and E. Chain. 1940. An enzyme from bacteria able to destroy penicillin. Nature 3713:837. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.115 [pdf] • Howard Florey e Ernest Chain produziram um extracto de penicilina • Isolaram o antibiótico a partir das culturas de fungos de Fleming e demonstraram que pode curar doenças em animais • Juntamente com Fleming, Florey e Chain receberam o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1945 • Ernest Chain e E.P. Abraham descreveram uma substância proveniente de E. coli que pode inactivar a penicilina; foi a primeira descoberta de resistência a antibióticos • Helmuth Ruska tirou as primeiras fotografias de vírus ao microscópio electrónico Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 52 1941 1958 Prémio Nobel Beadle and Tatum's 1941 Breakthrough Beadle, G. and E. Tatum. 1941. Genetic control of biochemical reactions in Neurospora. Proc. Nat. Acad. Sci. 27: 499-506. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.308 [pdf] • George Beadle e Edward Tatum publicaram as suas experiências com o fungo Neurospora crassa, nas quais demonstraram que genes particulares se expressam através da acção de enzimas específicas correspondentes • O primeiro gene a ser identificado controla a síntese de uma enzima que levou à geração de niacina • Este trabalho é a génese do conceito “um gene-uma enzima” • Juntamente com Lederberg, receberam o Prémio Nobel em Medicina ou Fisiologia em 1958 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 53 1943 1969 Prémio Nobel Luria and Delbruck Hit the Jackpot Hungate, R. E. 1943. Further experiments on cellulose digestion by the protozoa in the rumen of cattle. Biol. Bull. 84: 157-163. • Salvador Luria e Max Delbruck demonstraram estatisticamente que a hereditariedade nas bactérias segue princípios Darwinianos • Mutações particulares, como a resistência aos vírus, ocorrem aleatoriamente nas populações bacterianas, mesmo na ausência do vírus • Mais importante, ocorrem em pequenos números nalgumas populações e em grandes números noutras • Com Hershey, receberam o Prémio Nobel em Medicina ou Fisiologia em 1969 • R. E. Hungate descreveu uma bactéria do gado que digere anaerobiamente a celulose Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 54 1944 Oswald T. Avery Collection 1952 Prémio Nobel • Oswald Avery, Colin MacLeod, e Maclyn McCarty demonstraram que o ADN é o material transformador nas células • Albert Schatz, E. Bugie, e Selman Waksman descobriram a estreptomicina, que passaria a ser utilizada contra a tuberculose – A estreptomicina tem nas bactérias Gramnegativas, um efeito semelhante ao da penicilina nas bactérias Gram-positivas • Waksman recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1952 • W. H. Feldman e H. C. Hinshaw (Mayo Clinic) demonstraram a eficiência do tratamento da tuberculose com estreptomicina Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 55 1945 1969 Prémio Nobel Luria, S. E. 1945. Mutation of bacterial viruses affecting their host range. Genetics 30: 84-99. MacLeod, C., R. Hodges, M. Heidelberger, and W. Bernhard. 1945. Prevention of pneumococcal pneumonia by immunization with specific capsular polysaccharides. J. Exp. Med. 82: 445-465. • Salvador Luria e Alfred Day Hershey demonstraram que os bacteriófagos mutam, tornando difícil o desenvolvimento de imunidade às gripes e constipações • Com Delbruck e Luria, Hershey recebeu o Prémio Nobel da Medicina ouFisiologia em 1969 • Colin MacLeod, Richard Hodges, Michael Heidelberger, e William Bernard mostraram que um polissacarídeo da cápsula pode imunizar contra Nesseria meningtitis • A vacina foi aprovada em 1977 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 56 1950 Hungate, R. E. 1950. The anaerobic mesophilic cellulolytic bacteria. Bact. Rev. 14: 1-49. 1965 Prémio Nobel Lwoff's Pathways - Viral Replication A. Lwoff, L. Siminovitch, and N. Kjeldgaard. 1950. Comptes Rendus. 231:190-91. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.470 [pdf] • Robert Hungate publicou a descrição de um método de cultura em anaerobiose, um avanço que permitiu estudar bactérias anaeróbias do rúmen das vacas • Andre Lwoff e Louis Siminovitch demonstraram que a irradiação das bactérias com luz ultravioleta permite que os bacteriófagos se repliquem provocando a lise da célula bacteriana • Com Jacob e Monod, Lwoff recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1965 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 57 1953 1962 Prémio Nobel Watson, J. D. and F. H. C. Crick, 1953. Molecular structure of nucleic acids: a structure for desoxyribonucleic acid. Nature 171: 737-738. Hazen, E. L., R. F. Brown, and A. Mason. 1953. Protective action of Fungicidin (Nystatin) in mice against virulence enhancing activity of oxytetracycline on Candida albicans. Antibiotics & Chemother. 3: 1125. • James Watson e Francis Crick publicaram a descrição da estrutura em dupla hélice do ADN • Reconheceram que as imagens de cristalografia de raios-x de molécula de DNA produzidas por Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, lhes sugeriram a estrutura • Franklin morreu em 1958; Watson, Crick e Wilkins receberam o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1962 • Elizabeth Lee Hazen e Rachel Fuller Brown desenvolveram o primeiro antibiótico contra fungos, a nistatina Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 58 1958 Meselson, M. and F. Stahl. 1958. The replication of DNA in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 44: 671-682. Schaechter, M., O. Maaloe, and N. O. Kjeldgard. 1958. Dependency on medium and temperature of cell size and chemical composition during balanced growth of Salmonella typhimurium. J. Gen. Microbiol. 19: 152. • A delegação soviética na Organização Mundial de Saúde propôs uma cruzada global para a erradicação da varíola • Aprovado em 1959, o programa arranca em 1967 • Matthew Meselson e Franklin Stahl usaram centrifugação com gradiente de densidade para mostrar que as duas cadeias de ADN se desenrolam durante a replicação e se combinam com uma cadeia filha nova, tal como previsto por Watson e Crick • Ole Maaloe, Moselio Schaechter, e Nils O. Kjeldgard mostraram que as bactérias podem manter-se num continuum de estados fisiológicos determinados pela taxa de crescimento Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 59 1967 Quorum Sensing in Gram Negative Bacteria, ASM News 63, 1997. p.371 [pdf] Early Days in Yellowstone Microbiology, ASM News 64, 1998. p.137 [pdf] Brock, T.D. 1967. Life at high temperatures. Science 158:1012-19. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.214 [pdf] • J. Woodland Hastings mostrou que a bactéria Vibrio fischeri, uma espécie luminescente, produz um composto que se acumula no meio de cultura durante o crescimento, o que permite que a bactéria “sinta” a sua densidade, um fenómeno semelhante à emissão de feromonas nos organismos superiores • Thomas Brock identificou Thermus aquaticus, uma bactéria termófila que cresce a 85ºC, a partir de uma amostra recolhida em Yellowstone • Marvin Bryant, os Wolins, e Ralph Wolfe mostraram a transferência de H2 entre espécies de bactérias anaeróbias – Uma espécie oxida etanol a acetato e a outra reduz CO2 a metano Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 60 1968 Margulis, L. 1968. Evolutionary criteria in Thallophytes: A radical alternative. Science 161: 1020-1022. Manuela Abelho 2012 • Lynn Margulis propôs a teoria da endossimbiose para o desenvolvimento de cloroplastos e mitocôndrias nas células eucariotas – De acordo com a teoria da endossimbiose, originalmente os cloroplastos e as mitocôndrias eram microrganismos que ‘invadiram’ outras células procariotas, tornando-se seus organelos Microbiologia ambiental 61 1970 1978 Prémio Nobel Smith, H. O. and K. W. Wilcox. 1970. A restriction enzyme from Haemophilus influenzae: I. Purification and general properties. J. Mol. Biol. 51: 379-391. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.164 [pdf] • Hamilton Smith e Kent W. Wilcox descreveram a acção das enzimas de restrição, um mecanismo de defesa das bactérias, que se tornou uma ferramenta para cortar DNA – Actualmente este mecanismo é muito utilizado na biologia molecular e na engenharia genética • Com Nathans e Arber, Smith recebeu o Prémio Nobel da Medicina ou Fisiologia em 1978 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 62 1977 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 50885090. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.440 [pdf] H.W. Jannasch and C.O. Wirsen. 1977. Retrieval of concentrated and undecompressed microbial populations from the deep sea. Appl. Environ. Microbiol. 33:642-46. In Microbiology: A Centenary Perspective, edited by Wolfgang K. Joklik, ASM Press. 1999, p.280 [pdf] Manuela Abelho 2012 • Carl Woese usou a análise de RNA ribossómico para identificar uma terceira forma de vida, os Archaea, cujas características genéticas são diferentes tanto dos Bacteria como dos Eucarya • Holger Jannasch mostrou que a oxidação microbiana do enxofre é uma fonte de energia para colónias animais na ausência de luz, nas nascentes hidrotermais dos fundos oceânicos Microbiologia ambiental 63 1979 Victory Over Variola, ASM News 44, 1978. p. 639 [pdf] Arita, I. 1979. Virological evidence for the success of the smallpox eradication programme. Nature 279: 293-298. Henderson, D.A. 1979. The saga of smallpox eradication: an end and a beginning. Can. J. Pub. Hlth. 70:212-27 • A varíola foi declarada oficialmente eliminada; o útimo caso de varíola foi observado na Somália em 1977 • Pequenas quantidades de varíola continuam guardadas sob fortes mediadas de segurança nos EUA e na Rússia • É a única doença microbiana que foi completamente erradicada Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 64 1988 1993 Prémio Nobel Saiki, R. K., D. H. Gelfand, S. Stoffel, S. J. Scharf, R. Higuchi, G. T. Horn, K. B. Mullis and H. A. Erlich. 1988. Primerdirected enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science 239: 487-491. • Kary Mullis usou uma enzima termoresistente de Thermus aquaticus para desenvolver a tecnologia da reacção em cadeia da polimerase (polymerase chain reaction, PCR) • A técnica permite a amplificação de pedaços de DNA • Mullis recebeu o Prémio Nobel da Química em 1993 Manuela Abelho 2012 Microbiologia ambiental 65