Caracterização das células apoptóticas na

Concurso BD Biosciences Pesquisador SBI
Projeto Finalista 2013
Caracterização das células apoptóticas na ativação alternativa de macrófagos e o
efeito sobre a agressividade de câncer de pulmão de não-pequenas células
Florencia María Barbé-Tuana
ABSTRACT
Tumor associated macrophages have a key role in the prognosis of different types of cancer,
as nonsmall cell lung cancer cells (NSCLC). It has been suggested that the phenotype of the
macrophages encountered in the tumour is modulated by the microenvironment. In this regard,
the aim of this project is to establish, in a cell culture model of macrophages, the role of
apoptotic bodies derived from human NSCLC cell lines in macrophage polarization (M1 and
M2). Any clinicopathological significance of these findings will be evaluated in an archival
cohort (n=50) of biopsys of patients with NSCLC.
INTRODUÇÃO
O câncer de pulmão é a neoplasia mais frequentemente diagnosticada e a causa mais comum
de morte por câncer no mundo todo. De todos os casos, mais de 80% refere-se ao câncer de
pulmão de não-pequenas células (CPNPC), onde a maioria apresenta estágio avançado e
inoperável da doença.
Quanto a biologia tumoral, sabe-se que tumores sólidos, especialmente do tipo CPNPC,
apresentam alta densidade de células em apoptose e infiltração de macrófagos (TAM) em seu
parênquima. Neste microambiente, é amplamente aceito que os TAM possuem a função de
eliminação de células tumorais pela produção de moléculas citotóxicas, levando a morte por
apoptose. A atividade antitumoral dos macrófagos está associado ao fenótipo de macrófagos
classificados como M1.
Pesquisas recentes têm demonstrado que células em apoptose liberam uma variedade de
fatores solúveis que auxiliam seu reconhecimento e fagocitose e 2 apresentam características
imunossupressoras que contribuem indiretamente para o crescimento do tumor pela conversão
do fenótipo citotóxico e antitumoral M1 (CD68+CD80+ CD86+HLA DRhi), para um fenótipo
promotor do tumor M2 (CD68+CD163+ CD206+ HLA DRhi).
Assim, embora os macrófagos devidamente ativados sejam capazes de matar de maneira
efetiva as células tumorais, a hipótese a ser avaliada neste projeto de pesquisa é que a
apoptose de células tumorais pode ser capaz de modular as propriedades homeostáticas do
microambiente tumoral para o crescimento e progressão do mesmo.
OBJETIVOS
1. Caracterizar o papel de células apoptóticas sobre a atividade anti/prótumoral de macrófagos
e sobre a agressividade das células tumorais de CPNPC.
R. Alexandre Dumas, 1976 - São Paulo, SP 04717-004 Brazil | 0800 771 71 57 | [email protected] | bdbiosciences.com/br
Concurso BD Biosciences Pesquisador SBI
Projeto Finalista 2013
2. Avaliar a relevância clínica dos achados, utilizando-se para tal uma coorte retrospectiva de
biópsias de CPNPC previamente estabelecida pelo nosso
grupo.
METODOLOGIA
Imunofenotipagem por citometria de fluxo (FACS): Para a determinação do perfil M1 ou M2, as
amostras serão analisadas para os diferentes marcadores de superfície celular por citometria
de fluxo com marcação múltipla (4 anticorpos diferentes por amostra), no aparelho
FACScalibur™.
Determinação do perfil pró/anti-inflamatório dos macrófagos: Após o tratamento com os corpos
apoptóticos, o perfil pró/anti-inflamatório dos macrófagos será determinado por técnicas de
biologia molecular e FACS. Coorte de biópsias de CPNPC: Para avaliar clinicamente o efeito
da apoptose, da densidade de macrófagos e seu fenótipo na sobrevida de pacientes com
CPNPC, utilizaremos uma coorte retrospectiva de biópsias de pacientes diagnosticados com
CPNPC do Serviço de Patologia Clínica do HCPA, previamente estabelecida pelo nosso grupo
de pesquisa (n = 50).
Análise estatística: Serão realizadas utilizando os programas GraphPad® e SPSS.
PRINCIPAIS CONTRIBUIÇÕES CIENTÍFICAS
Esse projeto apresenta uma característica multidisciplinar e interinstitucional que, reunindo as
experiências dos pesquisadores, objetiva do ponto de vista científico a contribuição para o
avanço no conhecimento dos mecanismos envolvidos na agressividade e mortalidade de uma
patologia com maior incidência e prevalência no Brasil. Esse conhecimento proporcionará uma
busca de novas estratégias farmacológicas para novos tratamentos. Um dos grande dogmas
no desenvolvimento de quimioterápicos é a busca de compostos com alta citotoxicidade e
principalmente que sejam capazes de ativar a apoptose de células tumorais. Caso seja
demonstrado que a apoptose no parênquima tumoral tem um papel central na modulação de
um fenótipo pró-tumoral de macrófagos e que esse processo reflete na sobrevida do paciente,
acreditamos que nossos dados servirão para uma mudança de diretrizes na busca de novos
agentes quimioterápicos.
ORÇAMENTO: o presente projeto visa o financiamento do custeio de reagentes, anticorpos
para citometria de fluxo (CD68+, CD80+, CD86+, HLA-DR, CD163+, CD206+) para os novos
experimentos propostos.
CRONOGRAMA DE EXECUÇÃO FÍSICO E FINANCEIRO: o projeto está programado para
ser realizado em 36 meses. Os gastos estão concentrados em material de consumo, já que a
instituição possui toda a infraestrutura necessária para sua realização.
RESULTADOS ESPERADOS
R. Alexandre Dumas, 1976 - São Paulo, SP 04717-004 Brazil | 0800 771 71 57 | [email protected] | bdbiosciences.com/br
Concurso BD Biosciences Pesquisador SBI
Projeto Finalista 2013
Além da formação de recursos humanos, os resultados obtidos no presente projeto serão
apresentados em congressos (inter)nacionais e submetidos para publicação de artigos
cíentíficos em periódicos internacionais de nível Qualis A1, A2 e B1. A garantia da propriedade
intelectual através de pedido de depósito de patente de qualquer achado potencialmente
relevante será levada em consideração, como na experiência prévia do nosso grupo junto ao
Edital MCT/CNPq 02/2006 – Universal no. 479860/2006-8, que nos levou ao depósito da
Patente de invenção denominada “MÉTODO E KIT DE DIAGNÓSTICO E/OU PROGNÓSTICO
DE CÂNCER DE PULMÃO (número de depósito no INPI: 23078.033441/07-01).
O concurso BD Biosciences Pesquisador SBI visa o reconhecimento e apoio aos
pesquisadores que promovem o constante avanço científico através do incentivo à técnica
de Citometria de Fluxo com Múltipla Marcação no Brasil.
Saiba mais em bdbiosciences.com/br/pesquisador
R. Alexandre Dumas, 1976 - São Paulo, SP 04717-004 Brazil | 0800 771 71 57 | [email protected] | bdbiosciences.com/br