Expressão de genes de antígenos tumorais em células tímicas

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
93
Expressão de genes de antígenos tumorais em células
tímicas epiteliais medulares (mTECs)
Rostock, ACM1; Macedo, C1; Passos, GAS1
Laboratório de Imunogenética Molecular - Departamento de Genética, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São
Paulo
[email protected]
1
Palavras-chave: expressão gênica, timo, antígenos tumorais, câncer, células tímicas epiteliais medulares.
Introdução: Os dois subconjuntos de células tímicas epiteliais (TECs) que são as corticais (cTECs) e as medulares
(mTECs), definem dois compartimentos do timo : córtex e a medula. A medula tímica impõe a tolerância das
células T ao repertório nascente por meio da seleção negativa de timócitos auto-reativos. O timo é o principal
local de indução de tolerância aos antígenos relacionados a tecidos (TRAs) cuja função está relacionada à expressão
gênica promíscua desses TRAs. Neste processo, os timócitos são apresentados aos TRAs pelas células mTECs, e os
clones auto-reativos são eliminados por apoptose, o que leva à tolerância imunológica ao próprio. Mas as células
mTEC também podem expressar genes de antígenos tumorais. O nível de expressão desses genes no timo pode ter
conseqüências na tolerância/reatividade imune contra o câncer. Os objetivos desse estudo é o de avaliar se células
tímicas mTEC expressam genes de antígenos tumorais. Os resultados contribuirão com um melhor entendimento
das bases genético-moleculares da tolerância ou resposta imune contra o câncer. Métodos: Células murinas mTEC
3.10 foram cultivadas até a confluência em meio RPMI-1640 10% SFB em atmosfera de 5% CO2 a 37OC. O RNA total
foi extraído com o kit mirVana PARIS ® (Ambion) e o controle de qualidade foi realizado por espectrofotometria UV
e micro-eletroforese num bioanalizador Agilent 2100 (Agilent Technologies). As amostras serviram como molde
para síntese de cDNA utilizando a enzima transcriptase reversa SuperScript (Invitrogen). Os genes que codificam
antígenos tumorais no camundongo M. musculus selecionados foram: Cav1, Igf1r, Folh1, Trip6 e Mmp11 além dos
constitutivos Hprt e Gapdh. Os primers reverse e forward para reações de qRT-PCR foram desenhados com o uso do
software Primer 3 (http://biotools.umassmed.edu/bioapps/primer3_www.cgi) observando a localização em éxons
diferentes. As reações de qRT-PCR foram realizadas em triplicata amostral num equipamento 7500 Real Time PCR
System (Applied Biosystems) utilizando SYBR® Green. O teste estatístico One-way ANOVA foi utilizado para a análise
da significância estatística dos dados usando o programa estatístico GrphPad Prism 4.0 (http://graphpad.com/prism/
prism.htm). Resultados: Observamos expressão significativa em células mTEC 3.10 dos genes de antígenos tumorais
Trip6, Mmp11, Cav1 e Igf1R com exceção do gene Folh1 que não é expresso nessas células. Comparativamente, o
gene Trip6 apresentou o maior nível de expressão, seguido pelo gene Cav1. Os genes com menores níveis de expressão
foram Igf1R e Mmp11, respectivamente. Conclusões: Células tímicas mTEC apresentam expressão diferencial de
genes que codificam antígenos tumorais. O perfil diferencial observado pode ter conseqüências na eliminação
de clones de timócitos auto-reativos e conseqüentemente na tolerância ou reatividade imune contra o câncer.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES