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50º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 50º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2004
Costão do Santinho • Florianópolis • Santa Catarina • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-04-6
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Palavras-chave: K562, eletroporação e transferência gênica
Santos, DG; Delgado-Cañedo, A; Kvitko, K
Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Departamento de Genética.
Otimização de protocolo
para transferência gênica
empregando a técnica de eletroporação
em linhagem eritroleucêmica K562
A linhagem celular K562 é derivada de pacientes acometidos por leucemia mielóide crônica (LMC). Essas
células caracterizam-se pela presença do chamado cromossomo Philadelphia (Ph+) correspondente a translocação
t(9;22) gerando uma proteína quimérica (BCR-ABL) com atividade constitutiva de tirosina quinase. Essa
linhagem pode ser também empregada em estudos de eritropoiese, na avaliação de outros genes envolvidos
na LMC e em estudos de novas abordagens terapêuticas, in vitro, envolvendo a LMC. A eletroporação tem
se destacado nos últimos tempos como um método promissor para transferência gênica. Este método de
transferência gênica induz a permeabilização da membrana celular, através do emprego de um pulso elétrico,
permitindo a entrada de moléculas exógenas. Os parâmetros exigidos para o melhor emprego dessa técnica são
altamente variáveis, sendo então necessário que se leve em consideração diversos fatores. Dentro desse contexto,
empregando a linhagem celular K562, temos como objetivo a otimização de um protocolo de eletroporação
de células eucarióticas, visando a eficiente transferência de DNA (pEGFP-N1), com a mínima morte celular.
Nesse estudo, células K562 [1 x 107células/ml] foram eletroporadas sobre diferente condições de voltagem,
capacitância e resistência, além de serem centrifugadas, para formação de pellet, a fim de aumentar a viabilidade.
O equipamento empregado para eletroporação foi Gene Pulser I (Bio-Rad). A avaliação da viabilidade celular
tanto antes quanto após o pulso foi realizada empregando teste de exclusão por azul tripan. A eficiência de
transfecção foi observada 48hs após eletroporação, sendo então as células analisadas através de citometria de
fluxo quanto a expressão da proteína EGFP. Dentro das diversas combinações de parâmetros testados, a condição
que obteve melhor eficiência foi 420 V, 960 uF e 100 ohms. Nessa situação, atingiu-se entre 40-50% de
células vivas, com eficiência de transfecção acima de 50%. A alta eficiência obtida na eletroporação, quando
comparado com os dados da literatura, abre uma grande perspectiva na aplicação dessa ferramenta para futuras
transferências de material genético, visando esclarecer a etiologia da LMC.
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