análise da viabilidade de leucócitos mononucleares do sangue

ANÁLISE DA VIABILIDADE DE LEUCÓCITOS MONONUCLEARES DO SANGUE
PERIFÉRICO HUMANO INCUBADOS NA PRESENÇA DO EXTRATO ETANÓLICO DE
Ageratum fastigiatum (Gardn.) R. M. King et H. Rob. (Asteraceae)
A planta Ageratum fastigiatum, conhecida popularmente como “enxota” e “matapasto”, é utilizada
na medicina tradicional como cicatrizante, antimicrobiana, antiinflamatória e analgésica. A planta,
que pertence a família Asteraceae, é amplamente encontrada no Vale do Jequitinhonha. Para
conduzir estudos com plantas medicinais é necessário avaliar inicialmente a citotoxicidade celular
in vitro, que pode ser analisada através do ensaio de viabilidade celular. Diante disso, os objetivos
deste trabalho foram analisar a viabilidade do extrato etanólico de A. fastigiatum em leucócitos
humanos do sangue periférico, em câmara de Neubauer e no citômetro de fluxo, assim como a
comparação entre as técnicas. O extrato etanólico da planta foi diluído em dimetilsulfóxido
(DMSO) nas concentrações de 3,125 x 10-3, 6,25 x 10-3, 12,5 x 10-3 e 25 x 10-3 mg/mL. As
células mononucleares do sangue periférico foram incubadas com as diferentes concentrações do
extrato, sem nenhum estímulo (controle negativo) e com DMSO. A incubação foi feita em estufa
mantendo a temperatura de 37 ºC, 98% de umidade e 5% de CO2 e a viabilidade celular foi
analisada após 24, 48 e 72 horas em câmara de Neubauer e no citômetro de fluxo. Na análise de
viabilidade realizada na câmara de Neubauer no tempo de 24 horas foram obtidos os valores médios
de 91,83% ± 0,11, 94,68% ± 0,03, 92,51% ±0,05 e 81,36% ± 0,25, referentes às concentrações de
3,125 x 10-3, 6,25 x 10-3, 12,5 x 10-3 e 25 x 10-3 mg/mL. Nas culturas estimuladas por 48 horas e
72 horas e utilizando as mesmas concentrações, foram obtidos resultados semelhantes. A viabilidade
celular não foi alterada em nenhum dos tempos avaliados quando comparada ao controle e controle
do solvente, nas concentrações utilizadas. Através das análises realizadas no citômetro, foi obtida no
tempo de 24 horas, a viabilidade de 94,41% ± 0,03, 94,56% ± 0,03, 95,92% ± 0,02 e 85,48% ±
0,27, referentes às concentrações de 3,125 x 10-3, 6,25 x 10-3, 12,5 x 10-3 e 25 x 10-3 mg/mL. Nos
tempos de 48 e 72 horas, nas mesmas concentrações, foram obtidos resultados semelhantes. De
acordo com os resultados não ocorreu diferença estatística significativa entre a análise feita em
citometria de fluxo e câmara de Neubauer. Assim, os resultados sugerem que nas concentrações de
3,125 x10-3, 6,25 x 10-3 , 12,5 x 10-3 e 25 x 10-3 mg/mL, o extrato da planta pode ser usado com
segurança em outros estudos in vitro sem interferir na viabilidade celular e as duas metodologias
utilizadas no trabalho fornecem resultados equivalentes na análise de viabilidade celular.
Palavras-chave: Ageratum fastigiatum, plantas medicinais, citotoxicidade in vitro, viabilidade
celular, Azul de Tripan, câmara de Neubauer, citômetro de fluxo.
Débora Nunes Fernandes