Os neurónios têm que ser protegidos

Ana Patrícia Coimbra e David Cunha
1. Efeito Neuroprotetor do NPY – Ana Carvalho
2. Efeitos de diferentes anti-epiléticos em
murganhos – Inês Morte
3. Papel Neuroprotetor da Adenosina na
Retinopatia Diabética – Joana Vindeirinho
4. Técnicas de imunohistoquímica em
retinas de ratos diabéticos – Gabriel Costa
Efeito Neuroprotetor do NPY
Objetivo: Investigar se o NPY tem um
efeito neuroprotetor contra a
excitotoxicidade do glutamato em células
de retina de rato.
Métodos:
• Isolamento de células de retina de rato;
• Estudo de morte celular
 Incorporação de iodeto de propídeo;
 Imunocitoquímica.
O que é o NPY?
• Neurotransmissor;
• Péptido constituído por 36 aminoácidos;
• Encontra-se no cérebro e no sistema nervoso autónomo;
• Regula o uso de energia e está envolvido na aprendizagem,
no processamento de memória e na epilepsia;
• Segregado pelo hipotálamo;
• Aumenta a proporção de energia acumulada como gordura e
bloqueia sinais nociceptivos (de perceção de dor) que se
dirigem para o cérebro;
• Diminui os efeitos do glutamato.
O que é o glutamato?
• Neurotransmissor
do
sistema
nervoso,
envolvido
na aprendizagem e a memória;
• A
sua
acumulação
pode
causar
morte
celular
(excitotoxicidade);
• Esta excitotoxicidade ocorre, muitas vezes em episódios
de isquemia cerebral e está associada a doenças como esclerose
lateral e doença de Alzheimer.
Isolamento de células de retina
de rato – 9 e 10 de Julho
1. Preparação
de
meio
Mínimo Essencial Eagle
(MEM);
2. Extração dos olhos dos
ratos Wistar com 6 dias;
3. Dissecação das retinas;
4. Digestão das retinas em
tripsina;
5. Preparação de suspensão
de células;
Isolamento de células de retina
de rato – 9 e 10 de Julho
6.
7.
8.
Contagem de células viáveis
com TrypanBlue para cálculo
do número de células na
suspensão celular ;
Cálculo do número de poços
necessários para crescer as
células (caixas multiwell de 12
com lamelas);
Incubação da cultura durante 8
dias (37ºC e 5% CO2).
Incubação das células de retina
- Adição de glutamato e NPY às culturas – 16
e 17 de Julho
Glutamato + NPY
Concentrações:
NPY- 100 uM
Glutamato- 500 uM
Quantidade adicionada:
NPY- 5uL
Glutamato- 2,5 uL
Incorporação de iodeto de
propídeo
Controlo ~ NPY
Glutamato
Glutamato + NPY
Imunocitoquímica – 17 de Julho
1. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘TUJ1’
Glutamato
Controlo ~ NPY
Glutamato + NPY
2. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘GFAP’
Controlo
3. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘ED1’
Glutamato
Efeitos de diferentes anti-epiléticos
em murganhos
Objetivo: Determinar os efeitos da
exposição “in uteru” de fármacos
antiepiléticos no desenvolvimento do
cérebro, usando como modelo animal
murganhos CD1.
Método:
• Coloração de corpos de Nissl em fatias de
cérebro de murganho com violeta de
cresil.
Coloração de corpos de Nissl com
violeta de cresil – 11 de Julho
Papel Neuroprotetor da Adenosina
na Retinopatia Diabética:
Alterações no Sistema Adenosinérgico
Objetivo: Mostrar se o sistema adenosinérgico
na retina é afetado pela diabetes.
Métodos:
• Extratos proteicos.
O que é a Retinopatia Diabética?
Olho normal
Olho com retinopatia
diabética
diminuição
Retinopatia
Diabética
Adenosina
Adenosina
Aumento da
inflamação
Ativação das
microglias
Inflamação
Libertação de
fatores próinflamatórios
Técnicas de imunohistoquímica em
retinas de ratos diabéticos
Objetivo: Identificar alterações em retinas de
animais diabéticos e o papel do fator de
necrose tumoral.
Métodos:
• Coloração de corpos de Nissl de retinas com
violeta de cresil;
• Imunohistoquímica de cortes de retina de
ratos.
Cortes da retina de rato
Imunohistoquímica
Violeta de Cresil
Constituição da retina
1
2
3
1.
Retina não neural
2.
Fotorrecetores
3.
Camada Nuclear Externa
(núcleos dos fotorrecetores)
4.
Camada plexiforma externa
(sinapses entre bipolares e
4
5
6
ganglionares)
5.
Camada nuclear interna
(células bipolares)
6.
7
Camada plexiforme interna
(sinapses entre bipolares e
ganglionares)
7.
Células ganglionares
Agradecimentos
• Grupo de Neuroendrocrinologia e
neurogénese do CNC, em especial:
Gabriel Costa
Inês Morte
Joana Vindeirinho
Ana Carvalho
Célia Aveleira
Magda
• Dra. Teresa Girão
Fontes
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http://www.flickr.com/photos/mikeblogs/3101400087/ (consultado a 15/07/2012)
http://143.107.180.237/cbme/index.php/news_site/imagens/biologia__1/ciencias_bio
moleculares__1/glutamato (consultado a 19/07/2012);
http://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_glut%C3%A2mico(consultado a
19/07/2012);
http://en.wikipedia.org/wiki/Adenosine (consultado a 19/07/2012);
Vindeirinho, Joana (2012). “Uncovering the Neuroprotective Role of adenosine in
Diabetic Retinopathy: alterations in the adenosinergic system”(Tese de Mestrado). pp
3 e 4.;