Ciência Animal 19(1):63-70,2009 RELAÇÃO ENTRE IDADE GESTACIONAL E PARÂMETROS DO CONCEPTO, MENSURADOS POR ULTRASSONOGRAFIA EM CABRAS ANGLO-NUBIANA CRIADAS NO NORDESTE BRASILEIRO (Relation between gestational age and ultrasonographic measurements of concepti parameters in Anglo-Nubian goats raised in the Brazilian semiarid) Dárcio Ítalo Alves TEIXEIRA1; Elizabeth Saraiva Peixoto PINHEIRO2; Francisco Carlos de SOUSA1; Alexsandra Fernandes PEREIRA1; Vicente José de Figueiredo FREITAS1;Davide RONDINA2 1 Laboratório de Fisiologia e Controle da Reprodução, Universidade Estadual do Ceará. Laboratório de Nutrição e Produção de Ruminantes, Universidade Estadual do Ceará. 2 RESUMO O objetivo deste trabalho foi determinar a relação da idade gestacional com a mensuração do embrião/ feto em cabras, através da ultrassonografia, em tempo real. Oito cabras nulíparas da raça AngloNubiana foram submetidas a exames ultrassonográficos, a partir do 25° dia após a primeira monta, utilizando um equipamento de ultrassom, acoplado a transdutor linear (6/8 MHz) e convexo (5 MHz). Nas imagens gravadas, o diâmetro da vesícula embrionária (DVE) e o comprimento crâniocaudal (CCC), além do comprimento da cabeça (CC), do diâmetro biparietal (DBP), do tórax (DT), do cordão umbilical (DCU), do eixo longo do coração (ELC), do eixo curto do coração (ECC) e dos placentomas do embrião/feto foram mensurados, usando um programa computacional. A relação entre a idade gestacional e cada parâmetro mensurado por ultrassonografia foi expressa em equações de linha reta e mostrada como regressão linear, usando o programa Statistica 7.0 com p < 0,05. As médias dos valores encontrados foram correlacionadas com a idade fetal. Os coeficientes de correlação foram DVE (r = 0,97), CCC (r = 0,97), CC (r = 0,94), DBP (r = 0,94), DT (r = 0,99), DCU (r = 0,97), ELC (r = 0,98), ECC (r = 0,93) e do placentoma (r = 0,95). Adicionalmente, o tamanho do embrião aumentou, desde sua primeira visualização, até o fim do estudo. Em conclusão, o método de ultrassonografia mostra-se um meio confiável para estimar a idade gestacional, a partir da mensuração embrionária/fetal, uma vez que o aumento no valor destes parâmetros segue um padrão linear de regressão. PALAVRAS-CHAVES: mensuração fetal; ultrassonografia; caprino. ABSTRACT The aim of this study was to determine the relation of gestational age with embryonic/fetal measurements in goats through the real-time ultrasound method. Ultrasonographic examinations began on the 25th day after first mating in eight Anglo-Nubian nulliparous goats, using a ultrasound scanner fitted to 6/8 MHz linear-array and 3.5/5 MHz convex probe. On recorded scanning images, the embryonic vesicle diameter (EVD) and crown-rump length (CRL), moreover head length (HL), bi-parietal diameter (BPD), thoracic diameter (TD), umbilical cord diameter (UCD), long axis of heart (LAH) and short axis of heart (SAH) and placentomes of embryo/fetus were measured using *Endereço para correspondência: Universidade Estadual do Ceará, Av. Dedé Brasil, 1700, Fortaleza, CE, CEP: 60.714-903 [email protected] Ciência Animal 19(1):63-70,2009 63 computer software. The relationships between gestational age and each parameter of the ultrasonic measurements were expressed as straight-line equations and plotted as linear regression using Statistica 7.0 software, being statistically significant at a level of p < 0.05. Mean values were correlated to fetal age and inverse regression equations were created for each parameter. Results obtained showed EVD (r = 0.97), CRL (r = 0.97), HL (r = 0.94), BPD (r = 0.94), TD (r = 0.99), UCD (r = 0.97), LAH (r = 0.98), SAH (r = 0.93) and placentome (r = 0.95). Additionally, embryonic size increased from the first detection of the embryo to the end of the study. In conclusion, the ultrasonographic technique is a reliable mean to estimate the gestational age through the embryonic/fetal measurement once that its increase follows a linear regression standard. KEY-WORDS: fetal measurements; ultrasonography; goat. INTRODUÇÃO A exploração de caprinos no Nordeste brasileiro destaca-se por um efetivo de, aproximadamente, 8,6 milhões de animais o que representa 91,5% do rebanho nacional (IBGE, 2007). Neste sentido, o interesse por raças melhor adaptadas à região do semi-árido nordestino tem crescido, onde se tem destacado a AngloNubiana, como uma raça de dupla aptidão, que apresenta bons índices de fertilidade quando introduzida nesse ambiente. Apesar disso, a maioria dos criatórios apresenta baixos níveis produtivos, resultantes de manejo inadequado (OLIVEIRA & LIMA, 1994). Um exemplo é a falta de controle das montas, o que impossibilita a avaliação da fase gestacional e, consequentemente, medidas de manejo sanitário e nutricional direcionadas a fêmeas gestantes. Além disso, o conhecimento da fase do desenvolvimento de um feto pode ser útil para avaliar alterações patológicas no seu crescimento. A ultrassonografia em tempo real é um método não-invasivo, rápido e confiável, para a observação da progressão normal da gestação em diversas espécies (CHALHOUB et al., 2001; BERTOLINI et al., 2002; HERRERA et al., 2002; BUCCA et al., 2005). Em pequenos ruminantes, transdutores lineares por via transretal têm sido empregados com maior acurácia, no início da gestação, enquanto o tempo ideal para a utilização de transdutores convexos em exames 64 transabdominais ocorre com o avançar da gestação, quando o útero encontra-se mais próximo da parede abdominal direita (ISWAR, 1995). Recentes pesquisas em reprodução assistida de caprinos utilizaram a ultrassonografia em modo B para a detecção da ovulação (TEIXEIRA et al., 2008), punção folicular (GRAFF et al., 1999), diagnóstico de gestação (GONZÁLEZ et al., 2004), sexagem fetal (SANTOS et al., 2007), involução uterina (ABABNEH & DEGEFA, 2005) e patologias uterinas (LOPES JÚNIOR et al., 2004). Além disso, em caprinos e ovinos a ultrassonografia tem sido empregada para mensurar parâmetros embrionário/fetais e placentários, visando à determinação da idade gestacional em diversas raças, através da elaboração de modelos matemáticos. ABDELGHAFAR et al. (2007a), desenvolvendo experimentos com cabras Saanen, ao realizarem mensurações do comprimento crânio-caudal do feto dos 46 aos 67 dias de gestação, observaram uma alta correlação entre este parâmetro e a idade gestacional. Em ovinos, o diâmetro da vesícula embrionária tem sido mais empregado. RAMOS et al. (2007), realizando algumas medidas da vesícula embrionária, tais como área, comprimento, eixo transversal e vertical maior alcançaram correlações significativas entre estes parâmetros e a idade gestacional. Em caprinos, a partir dos 40 dias de Ciência Animal 19(1):63-70,2009 gestação, é possível a diferenciação do embrião em cabeça, corpo e membros. Desta forma, a ossificação e as mudanças nos padrões de ecogenicidade das estruturas fetais e líquido amniótico podem auxiliar na estimativa da idade fetal (LÉGA et al., 2007). Segundo HAIBEL (1988), o tamanho da cabeça fetal pode ser uma boa referência para o conhecimento da idade gestacional, apresentando um crescimento linear durante o segundo trimestre da gestação em cabras leiteiras. Considerando-se as diferenças existentes entre raças dentro de uma mesma espécie e a ausência de dados na literatura sobre caprinos criados no Nordeste do Brasil, este trabalho tem por objetivo relacionar a idade gestacional com parâmetros biométricos do concepto, através da ultrassonografia em tempo real, em cabras AngloNubiana criadas no semi-árido brasileiro. MATERIAL E MÉTODOS Animais e tratamento hormonal O experimento foi conduzido na Fazenda Chapadinha, localizada em Tauá, região Nordeste do Brasil (6 o latitude S). Como animais experimentais, foram utilizadas oito cabras nulíparas da raça Anglo-Nubiana, apresentando uma ou nenhuma muda dentária e peso corporal de 25,58 ± 5,56 kg (média ± DP) no início do estudo. O manejo alimentar das fêmeas consistiu de pasto nativo (caatinga) e suplementação com concentrado (60% de milho, 15% de farelo de soja e 15% de trigo), associado à oferta de água e sal proteinado ad libitum. Todas as fêmeas tiveram seu estro sincronizado, pelo uso de esponjas intravaginais, impregnadas com 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP, Progespon, Syntex, Argentina), por 10 dias, associado a uma injeção i.m. de 50 mg de análogo da prostaglandina F2á (Ciosin, Coopers, Brasil) no oitavo dia de tratamento progestágeno. No intuito de detectar o início do estro, as cabras foram monitoradas três vezes ao dia (6:00, 12:00 e 18:00 h), com início 20 h após a retirada da esponja. As fêmeas, manifestando comportamento de estro, foram submetidas à monta natural, que foi repetida 24 h após, sendo ambas obtidas com o uso de bodes da raça Anglo-Nubiana de fertilidade comprovada. O dia da primeira cobertura foi considerado o dia zero da gestação. Avaliação ultrassonográfica Os exames ultrassonográficos foram realizados por via transretal nos dias 25, 35 e 45 e transabdominal aos 55, 65 e 75 dias de gestação. Os exames transretais foram conduzidos com os animais em estação, utilizando o aparelho Falco 100 (Pie Medical, Maastricht, Holanda) acoplado a um transdutor linear de 6,0/8,0 MHz. Logo após a remoção manual das fezes, uma solução de gel carboximetilcelulose foi aplicada no reto, com o uso de uma seringa. Em seguida, o transdutor foi inserido, lentamente, na ampola retal até a completa visualização da bexiga na tela do monitor. Cranealmente à vesícula urinária, o transdutor foi rotacionado 90º no sentido horário e 180º no sentido anti-horário, para a inspeção dos cornos uterinos. O acompanhamento transabdominal foi realizado, com o uso do mesmo aparelho de ultrassonografia, porém com um transdutor convexo de 3,5 MHz. Nesta modalidade de exame, as fêmeas foram mantidas em estação e o transdutor, lubrificado com gel, foi posicionado na parede abdominal, na área desprovida de pelos, imediatamente craneal ao úbere. Em ambas as abordagens (transretal e transabdominal), as imagens ultrassonográficas das vesículas embrionárias, caracterizadas por estruturas anecóicas com formato circular ou elíptico contendo o embrião/feto, foram gravadas e transferidas para o computador para exame detalhado, posteriormente. Ciência Animal 19(1):63-70,2009 65 Os parâmetros mensurados foram: diâmetro da vesícula embrionária (DVE), comprimento crâneo-caudal (CCC), comprimento da cabeça (CC), diâmetro biparietal (DBP), diâmetro do tronco (DT), diâmetro do cordão umbilical (DCU), eixo longo do coração (ELC), eixo curto do coração (ECC) e diâmetro dos placentomas. Para o DVE, a vesícula embrionária foi mensurada em seu eixo transversal maior. O CCC foi determinado por uma linha, traçada da parte anterior do crânio (osso occipital) até a cauda (primeira vértebra coccígea). O CC foi caracterizado pela medida da distância entre o osso occipital e o focinho, em um plano longitudinal e simétrico ao crânio. A distância entre os ossos biparietais em um plano simétrico do crânio, perpendicular ao feixe de ultrassom foi considerada, para mensurar o DBP. O DT foi determinado pela maior medida transversal do abdômen, na junção da veia umbilical. Quando o corpo fetal e o cordão umbilical foram visualizados na mesma imagem. O DCU foi mensurado no local de inserção do cordão umbilical no corpo. O ELC e o ECC foram mensurados, a partir de uma secção transversal das quatro câmaras cardíacas, vistas no estado diastólico, durante um período de movimentação corporal ausente. A cada exame, o diâmetro maior do placentoma foi mensurado em um plano horizontal. Neste caso, foi considerada a média do diâmetro de quatro placentomas localizados em diferentes áreas do útero. Nas imagens gravadas, todas as variáveis foram mensuradas utilizando o programa Image J (National Institutes of Health, Millersville, EUA), mediante prévia calibração. Para as imagens armazenadas a uma frequência de 6,0 e 8,0 MHz foi estabelecido que 5 mm equivaliam a 10,66 e 22,34 pixels, respectivamente. Já para a frequência de 3,5 MHz, a equivalência foi de 13,49 pixels. Análise estatística Os valores de cada parâmetro foram representados em média ± erro padrão e comparados pelo test t de Student. A relação entre a idade gestacional e cada parâmetro mensurado por ultrassonografia foi calculada, traçada em uma linha reta e expressa numa equação de regressão linear usando o programa Statistica 7.0 (StatSoft Inc., 2004). Os dados deste estudo foram ajustados, para a melhor linha de regressão (p < 0,05) e descritos através das equações, bem como do coeficiente de correlação. RESULTADOS Todas as fêmeas, inicialmente sincronizadas, que exibiram comportamento de estro foram fecundadas. No entanto, dos oito animais utilizados, três (37,5%) apresentaram morte embrionária e foram excluídos do experimento. Os outros cinco levaram a gestação a termo e foram utilizados para monitoramento ultrassonográfico, durante o restante do experimento. Quanto às mensurações embrionário/fetais pôde ser observado um aumento no tamanho da Tabela 1. Médias (± E.P.) da mensuração da vesícula embrionária/fetal (DVE) e do comprimento crâneo-caudal fetal (CCC) em cabras Anglo-Nubianas, no período de 25, 35, 45 e 55 dias de gestação. Dia de gestação 25 35 45 55 DVE (mm) 22,8a ± 2,3 39,6b ± 3,9 60,5c ± 2,2 104,4d ± 6,6 CCC (mm) 8,8a ± 0,8 18,5b ± 1,9 41,6c ± 2,4 74,8d ± 6,7 Letras diferentes entre linhas (a, b, c, d) significam diferenças estatísticas. 66 Ciência Animal 19(1):63-70,2009 Tabela 2. Médias (± E.P.) da mensuração fetal (mm) do comprimento da cabeça (CC), diâmetro biparietal (DBP), diâmetro do tronco (DT), diâmetro do cordão umbilical (DCU), eixo longo do coração (ELC), eixo curto do coração (ECC) e diâmetro dos placentomas (PLAC) em diferentes idades gestacionais de cabras Anglo-Nubianas Dia 55 65 75 CC(mm) 33,0a ± 2,3 43,1b ± 1,6 45,6b ± 2,5 DBP(mm) 22,6a ± 1,5 29,7b ± 1,7 31,6b ± 2,0 DT(mm) 26,6a ± 1,7 32,5b ± 0,7 43,7c ± 2,7 DCU(mm) 7,2a ± 0,7 9,4b ± 0,6 10,4b ± 0,5 ELC(mm) 9,6a ± 0,7 11,6a ± 0,6 16,1b ± 1,6 ECC(mm) PLAC(mm) 6,3a ± 0,5 17,4a ± 0,6 7,1a ± 0,9 23,2b ± 1,6 11,3b ± 0,3 24,9b ± 1,8 Letras diferentes entre linhas (a, b, c) significam diferenças estatísticas vesícula embrionária/fetal e do comprimento fetal, visualizados no período de 25 a 55 dias de gestação (Tabela 1). A partir dos 55 dias de gestação foi possível a mensuração ultrassonográfica de outras estruturas, além do DVE e do CCC (Tabela 2). Uma correlação significativa (p < 0,001) e positiva (r = 0,94) do DVE e do CCC com a idade gestacional no primeiro bimestre da gestação foi encontrada, sendo propostas as seguintes equações de regressão: Dia = 21,153+0,332*DVE e Dia = 25,521+0,406*CCC. Quanto aos parâmetros fetais avaliados aos 55, 65 e 75 dias de gestação, também foram observados coeficientes de correlação elevados (Tabela 3). As vesículas de, pelo menos, um embrião e seus batimentos cardíacos foram visualizados aos 25, 35 e 45 dias de gestação, sendo identificadas como áreas anecóicas circulares, presentes no lúmen uterino e com uma área hiperecogênica, localizada na zona basal da vesícula embrionária/ fetal (Figura 1). DISCUSSÃO Há mais de 20 anos a técnica de ultrassonografia tem se mostrado eficiente para o diagnóstico de gestação em caprinos. Recentemente, alguns trabalhos vêm demonstrando a relação entre a mensuração embrionário/fetal e placentária com a idade gestacional (ABDELGHAFAR et al., 2007a; ABREU et al., 2007). Neste estudo, embora a edição das imagens tenha sido mais laboriosa, proporcionou uma maior acurácia das mensurações em um programa computacional, do que diretamente, no monitor do equipamento. A ultrassonografia também proporciona o diagnóstico de gestação mais precoce, sendo possível detectar mortalidade embrionário/fetal em cabras de diferentes idades e raças. No presente estudo foi detectada uma taxa de mortalidade embrionário/fetal de 37,5%. WITTEK et al. (1997) verificaram taxas de Tabela 3. Coeficientes de correlação e equações de regressão entre a idade gestacional e o comprimento da cabeça (CC), diâmetro biparietal (DBP), diâmetro do tronco (DT), diâmetro do cordão umbilical (DCU), eixo longo do coração (ELC), eixo curto do coração (ECC), diâmetro dos placentomas de cabras Anglo-Nubianas. Equação Dia = 29,954+0,864*CC Dia = 33,965 + 1,109*DBP Dia = 35,954+0,859*DT Dia = 35,012 + 3,340*DCU Dia = 42,507 + 1,804*ELC Dia = 43,673 + 2,596*ECC Dia = 35,598 + 1,347*PLAC Valores de coeficientes (r) 0,74 (p < 0,05) 0,70 (p < 0,05) 0,88 (p < 0,001) 0,73 (p < 0,05) 0,77 (p < 0,001) 0,80 (p < 0,001) 0,71 (p < 0,05) Ciência Animal 19(1):63-70,2009 67 A B C Figura 1: Imagens ultrassonográficas aos 25 (A), 35 (B) e 45 (C) dias de gestação em cabras Anglo-Nubiana. mortalidade variando entre 34,1% e 65,9% em caprinos. Esta alta taxa de mortalidade embrionário/fetal pode ter ocorrido, em virtude do desenvolvimento da gestação em cabras jovens; porém, ANWAR & AHMAD (1999) afirmam que em cabras Teddy a idade não afeta a mortalidade embrionária. Nosso estudo mostra que a ultrassonografia transretal permitiu a mensuração de estruturas fetais e placentárias em caprinos da raça AngloNubiana com até 55 dias de gestação, sendo mais viável o transdutor transabdominal para avaliação, após este período gestacional. Devido ao rápido desenvolvimento da vesícula embrionária após 60 dias, torna-se inviável a sua visualização completa no monitor, impossibilitando a mensuração da mesma. Isto também foi verificado para o parâmetro CCC, confirmando os dados descritos por KAREN et al. (2008) em pesquisas com cabras Baladi. Tal afirmativa se deve a uma limitação do campo de visão e da profundidade de penetração do feixe de ultrassom. As médias do comprimento crâneo-caudal do feto de cabras Anglo-Nubianas, em diversas idades gestacionais (25, 35, 45 e 55 dias) foram similares às encontradas em cabras Saanen por ABDELGHAFAR et al. (2007a). As mensurações do CCC e do DVE apresentaram significativa correlação com a idade gestacional, entre 25 e 55 dias, semelhante ao obtido em caprinos de outras raças (DOIZÉ et al., 1997), 68 ovinos (GONZÁLEZ-BULNES et al., 1998), bovinos (BERTOLINI et al., 2002), equinos (BUCCA et al., 2005) e bubalinos (ALI & FAHMY, 2008). A partir dos 55 dias de gestação, quando o feto foi visualizado com maiores detalhes, possibitou-se a mensuração precisa de algumas estruturas, como o comprimento da cabeça, diâmetro biparietal, diâmetro do tronco, diâmetro do cordão umbilical, eixo longo do coração, eixo curto do coração, sendo altamente correlacionadas com a idade gestacional (55 a 75 dias). Quanto ao comprimento da cabeça e o diâmetro biparietal, LEE et al. (2005), trabalhando com cabras coreanas encontraram similares resultados para esses parâmetros, quando correlacionando com a idade gestacional acima de 60 dias. Porém, alguns autores citam que a partir de 95 dias de gestação a mensuração do CC e do DBP é de difícil realização, devido ao aumento fetal e à compressão da cabeça contra outras partes fetais (ABDELGHAFAR et al., 2007a). Comparando as estruturas fetais avaliadas neste estudo, o diâmetro do tronco apresentou uma maior correlação com a idade gestacional, o que também foi verificado por KAREN et al. (2008). Assim, a mensuração do diâmetro abdominal fetal destaca-se como o melhor parâmetro para estimar a idade gestacional em caprinos. Ciência Animal 19(1):63-70,2009 A mensuração cardíaca fetal em caprinos é de grande importância para futuras avaliações do tamanho e aspecto deste órgão, no entanto, poucos dados têm sido descritos em animais. Durante o nosso estudo, foi verificado um aumento do ELC e ECC, com o avanço da gestação, ambos sendo correlacionados com a idade gestacional. LEE et al. (2005) observaram que há uma maior correlação entre a idade gestacional e o ELC do que com o ECC, atribuindo essa diferença à grande variação deste comprimento durante a sístole e diástole, similarmente ao observado neste trabalho. A correlação do cordão umbilical com a idade gestacional foi alta (r = 0,73) em nosso experimento. LEE et al. (2005) encontraram resultados similares (r = 0,70), com elevado nível de significância. DOIZÉ et al. (1997), trabalhando com ovinos e caprinos verificaram que o diâmetro dos placentomas apresentou uma correlação mais significativa com a idade gestacional para caprinos, em comparação com ovinos. ALI & HAYDER (2007) também obtiveram uma baixa correlação entre os placentomas (r2 = 0,38) e a idade gestacional de ovelhas da raça Ossimi. No nosso estudo, esta correlação mostrou-se alta (r = 0,71), provavelmente em virtude da média obtida a partir da escolha aleatória de quatro placentomas para cada animal. Desta forma, pode-se afirmar que todos os parâmetros avaliados nesse estudo podem ser mensurados individualmente para determinar a idade fetal, com alto grau de acurácia. CONCLUSÕES A fetometria observada por ultrassonografia pode ser utilizada para a avaliação da idade gestacional em cabras da raça Anglo-Nubiana, podendo assim representar uma importante ferramenta no manejo produtivo e reprodutivo destes animais, criados no semi-árido nordestino. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABABNEH, M. M.; DEGEFA, T. Ultrasonic assessment of puerperal uterine involution in Balady goats. Journal of Veterinary Medicine Series APhysiology Pathology Clinical Medicine, v.52, p. 244–248, 2005 ABDELGHAFAR, R. M.; AHMED, B. H.; BAKHIET, A. O. Ultrasonic measurements of crownrump length and bi parietal diameter to predict gestational age in Saanen goats. Journal of Animal and Veterinary Advances, v. 6, p. 454-457, 2007a. ABDELGHAFAR, R. M.; BAKHIET, A.; AHMED, B. H. 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