Caracterização da diversidade molecular de cianobactérias do rio

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Caracterização da diversidade molecular de
cianobactérias do rio Pará na região de Abaetetuba e
Barcarena – Pará, Amazônia, Brasil
Souza, RS¹; Alves, FAS¹; Santos, ECO; Jesus, IM¹; Sá, LLC¹
¹Laboratório de Microbiologia Ambiental, Seção de Meio Ambiente, Instituto Evandro Chagas (IEC)
[email protected]
Palavras-chave: Cianobactérias, rRNA 16S, CYA, Diversidade Molecular,Metagenômica.
As cianobactérias são o elemento dominante da fitoplâncton em ambientes de água doce e marinhos muitas
podem formar florações. A atenção é geralmente maior para as espécies que formam colônias e possuem vesículas
de gás que as tornam flutuante e, portanto, acumulam na superfície. Estas espécies podem fixar N2 e ser tóxicas e
podem causar graves problemas ambientais e socioeconômicos. Este estudo visa à caracterização da diversidade
molecular de cianobactérias do rio Pará localizado no município de Abaetetuba e Barcarena (PA) utilizando técnicas
moleculares. As amostras foram coletadas no Rio Pará em uma grande área portuária entre os dois municípios.
As amostras foram coletadas nos pontos:P3 (Abaetetuba); P7 (entre os municípios de Abaetetuba e Barcarena) e
P13 (Barcarena), de todos os pontos foram coletadas amostras de marés enchentes e vazantes. As amostras foram
coletadas com arrastos na sub-superfície da água com auxílio de redes de plâncton, com abertura de malha de 20,
64, 120 µm. As amostras foram alíquotadas em tubos falcon de 50 ml, congeladas em freezer -70º C e posteriormente
liofilizadas. Em seguida foi extraído DNA metagenômico do material liofilizado com o kit – Wizard Genomic DNA
Purification Kit (Promega), seguindo-se as recomendações dos fabricantes. A integridade e qualidade do DNA
metagenômico extraído foi analisada em espectrofotômetro (NANODROP® ND-2000), e em gel de agarose. O
material foi amplificado por PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos para genes que codificam rRNA 16S
e uma região específica para cianobactérias (CYA). A re-amplificação do produto de PCR (Nested-PCR) foi feita com
primers específicos para cianobactérias (CYA 106F, CYA359F e CYA 781R) de aproximadamente 700pb do gene para
rRNA 16S. Após a re-amplificação, foi realizada a clonagem dos amplicons, utilizando-se o Kit de clonagem “pGEM®-T
EasyVector Systems”( Promega). A pureza do DNA foi calculada usando um espectrofotômetro (NANODROP® ND2000) através da relação A 260 /A280 mostrando contaminantes de proteínas (relação, 1,8). A qualidade do DNA com
um elevado grau de pureza foi observado em todas as amostras ambientais. Os amplicons resultantes foram de
aproximadamente 1600pb para o gene que codifica rRNA 16S e de 400pb a 600pb para CYA, conforme o esperado.
Até o presente momento foi construída uma biblioteca contendo 20 clones que serão seqüenciados para se analisar
a diversidade genética de cianobactérias da região. Conclusões: Os primer CYA mostram-se ser específico para
cianobactérias. O método molecular para a identificação de cianobactérias é essencial para a rápida e precisa
análise dos membros de uma população e para a elucidação da diversidade molecular de cianobactérias. Após
o seqüenciamento destes clones e comparação com trabalhos de caracterização morfológica de cianobactérias
realizado em nosso laboratório teremos a real clareza da diversidade de cianobactérias na região em estudo.
Apoio Financeiro: PIBIC/ IEC/ CNPq, TAC IRCC/MPE-PA/FIDESA/IEC e Recursos Próprios Instituto Evandro
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