Caracterização molecular do gene da β

54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Caracterização molecular do gene da
β-tubulina em Phakopsora pachyrhizi
Maciel, TEF1; Freire, MCM2, Almeida, AMR3; Oliveira, LO1
Departamento de Bioquímica, Universidade Federal de Viçosa
2
Departamento de Genética, Universidade Federal de Viçosa
3
Embrapa – Soja
[email protected]
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Palavras-chave: Phakopsora pachyrhizi, β-tubulina
A soja é atacada por muitos patógenos, porém dentre todas as doenças a ferrugem asiática causada pelo fungo Phakopsora
pachyrhizi tem sido considerada como uma das mais importantes. Muitos trabalhos estão sendo realizados com o intuito
de se compreender melhor essa interação planta-patógeno. Dentre esses, destaca-se trabalhos de caracterização de genes
que podem estar relacionados com essa interação. O objetivo desse trabalho foi caracterizar o gene da β-tubulina de P.
pachyrhizi assim como a proteína codificada por este gene, e fazer uma análise comparativa desse gene dentre diferentes
ferrugens. Uredósporos do fungo foram coletados de doze municípios brasileiros. O DNA genômico foi extraído e o
gene da β-tubulina foi amplificado pela técnica de PCR de tal forma a cobrir toda a região do gene. Os fragmentos
obtidos foram purificados e seqüenciados. As seqüências obtidas foram alinhadas e comparadas entre si e com seqüências
obtidas do GenBank. O gene da β-tubulina de P. pachyrhizi apresentou 2815 pares de bases, sendo este constituído de
nove éxons e oito íntrons. Sua fase aberta de leitura (ORF) conteve 1341 pares de bases. Verificou-se que 452 pares de
bases são correspondentes a região promotora enquanto 234 pares de bases pertencem a extremidade 3’ não traduzida.
Os códons de início e final da tradução para este gene são ATG e TAG, respectivamente. A região promotora apresentou
os sinais típicos envolvidos com o início da transcrição. Um domínio de 30 nucleotídeos composto por citosina e
timina está presente nesta região, sendo este domínio comum a fungos filamentosos. Sítios envolvidos no mecanismo
de splincing estão presentes. Foi encontrada ainda a seqüência consenso “AATAAA”, situada downstream do códon de
terminação TAG, sendo esta seqüência crucial no processo de poliadenilação do mRNA precursor. A ORF encontrada
para este gene codifica uma proteína de 446 aminoácidos, a qual apresenta elevada similaridade com β-tubulina de
outras espécies de fungos relacionados, e até mesmo com organismos mais distantes evolutivamente, comprovando assim
que a seqüência de aminoácidos desta proteína é evolutivamente conservada. Identificou-se, comparando a seqüência
de aminoácidos predita para β-tubulina, que esta proteína possui quatro domínios conservados, sendo eles: domínio
de ligação a nucleotídeos, domínio de ligação ao taxol, domínio de interface alfa/beta e domínio de interface beta/alfa.
Análises filogenéticas, com base no alinhamento do gene da β-tubulina, permitiram alocar P. pachyrhizi junto ao clado
constituído pelas demais ferrugens. Comparações dos íntrons de P. pachyrhizi com as duas únicas espécies de ferrugens
que apresenta o gene da β-tubulina seqüenciado até o momento, mostraram alta conservação no número e posição dos
íntrons; já em relação à composição desses, foi observada pouca similaridade.
Apoio Financeiro: FAPEMIG e CNPq.
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