BD Modified CNA Agar • BD Modified CNA Agar

INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-255082.02
Rev.: Junho de 2003
BD Modified CNA Agar •
BD Modified CNA Agar with Crystal Violet
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O BD Modified CNA Agar (Ágar CNA Modificado da BD) é um meio selectivo utilizado no
isolamento das bactérias Gram-positivas provenientes de amostras clínicas. O BD Modified
CNA Agar with Crystal Violet (Ágar de CNA Modificado da BD com Cristal Violeta) é
utilizado no isolamento dos estreptococos e enterococos e inibe os estafilococos e as
bactérias Gram-negativas.
PRINCÍPIOS E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO
Método microbiológico.
A composição nutricional do Trypticase Soy Agar (TSA) tornou-o num meio popular, quer
sem adição de suplemento, quer como base para os meios que contêm sangue.1 O
Trypticase Soy Agar II (TSA II) é uma versão melhorada, que contém factores de
crescimento para fornecer zonas hemolíticas mais limpas do que o Trypticase Soy Agar
(TSA), quando suplementado com 5% de sangue. Oferece um crescimento excelente, bem
como proporciona a hemólise de estreptococos beta-hemolíticos e de outros organismos.
Ellner e colegas descobriram que um meio contendo colistina e ácido nalidíxico numa base
de ágar de Columbia, enriquecido com 5% de sangue de ovino, iria suportar o crescimento
dos estafilococos, dos estreptococos hemolíticos e dos enterococos, inibindo, ao mesmo
tempo, o crescimento das espécies Proteus, Klebsiella e Pseudomonas.2 A base de ágar de
Columbia tem um teor dióxido de carbono relativamente elevado e, por essa razão, os
estreptococos beta-hemolíticos podem produzir uma reacção hemolítica esverdeada que
pode ser enganadora em relação à alfa-hemólise. O Trypticase Soy Agar II proporciona
reacções hemolíticas mais claras, mas, normalmente, colónias mais pequenas.
Junto com o BD Modified CNA Agar e com o BD Modified CNA Agar with Crystal Violet,
o Trypticase Soy Agar II é o meio base que fornece nutrientes e, quando suplementado
com colistina e ácido nalidíxico, fornece selectividade para as bactérias Gram-positivas. A
junção de sangue de ovino e de soro de vitela aumenta o crescimento e permite a detecção
de reacções hemolíticas.
Além destes ingredientes, o BD Modified CNA Agar with Crystal Violet contém cristal
violeta que constitui um inibidor eficaz dos estafilococos. Assim, este meio é utilizado para
isolamento dos estreptococos e enterococos que não são inibidos por este corante.
REAGENTES
Fórmulas* por Litro de Água Purificada
BD Modified CNA Agar
Hidrolisado pancreático de
14,5 g
caseína
Hidrolisado papaínico de farinha
5,0
de soja
Cloreto de sódio
5,0
Ágar
14,0
Factores de crescimento
1,5
Colistina
0,01
Ácido nalidíxico
0,01
Soro de vitela
50,0 mL
Sangue de ovino, desfibrinado
5%
pH 7.3 ± 0,2
PA-255082.02
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O BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, além dos ingrediente apresentados em
cima, contém ainda 2 mg de cristal violeta por litro de meio.
*Ajustada e/ou suplementada, conforme necessário, para cumprir os critérios do
desempenho.
PRECAUÇÕES
. Apenas para uso profissional.
Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração,
secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.
Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os
procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de
eliminação do produto usado.
ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8°C, dentro do
invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubação recomendado.
As placas são fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas
placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em
local limpo a uma temperatura entre 2 e 8°C.
CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR
Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar
as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar a 35 ± 2°C durante 18 a 24 h, de
preferência numa atmosfera aeróbia enriquecida com dióxido de carbono.
Estirpes
Streptococcus pneumoniae
ATCC 6305
Streptococcus pyogenes
ATCC 19615
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Proteus mirabilis
ATCC 12453
Não inoculadas
BD Modified CNA Agar
Crescimento bom a
excelente; colónias
esverdeadas-acinzentadas;
alfa-hemólise
Crescimento bom a
excelente; colónias
esbranquiçadas de pequena
dimensão com betahemólise
Crescimento bom a
excelente; colónias de média
dimensão brancas a
amarelas com ou sem betahemólise
Crescimento bom a
excelente; colónias
esbranquiçadas com zonas
acinzentadas; sem hemólise
Inibição parcial a completa;
sem proliferação
Vermelho (cor de sangue)
BD Modified CNA Agar
with Crystal Violet
Crescimento razoável a
excelente; colónias
acinzentadas-esverdeadas;
alfa-hemólise
Crescimento bom a
excelente; colónias de
pequena dimensão azuiscinzentas com beta-hemólise
Inibição completa
Crescimento razoável a
excelente; colónias azuladas
de pequena dimensão; sem
hemólise
Inibição parcial a completa;
sem proliferação
Vermelho (cor de sangue);
tonalidade azulada
PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos
BD Modified CNA Agar ou BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, ambos fornecidos
em placas Stacker de 90 mm. Microbiologicamente controlado.
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Materiais não fornecidos
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário.
Tipos de amostra
O BD Modified CNA Agar é um meio selectivo utilizado em bacteriologia aeróbica para muitas
bactérias Gram-positivas e pode ser utilizado para todos os tipos de amostras bacteriológicas.
O BD Modified CNA Agar with Crystal Violet é um meio selectivo para os estreptococos e
enterococos e é inibidor os estafilococos. É basicamente utilizado para a detecção de
estreptococos em amostras retiradas de zonas do corpo onde estes organismos têm um papel
importante como agentes infecciosos, por exemplo, para a detecção dos estreptococos do
Grupo A (=Streptococcus pyogenes) em amostras das vias respiratórias superiores, mas
também pode ser utilizado para a detecção destes e de outros estreptococos e enterococos
provenientes de outras amostras clínicas.
Para obter mais informações sobre estes meios, consultar também CARACTERÍSTICAS DE
DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO.
Procedimento do teste
Espalhar a amostra sobre o meio BD Modified CNA Agar ou BD Modified CNA Agar with
Crystal Violet o mais rapidamente possível, após a recepção no laboratório. A placa para
cultura é usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora
mista. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa,
fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em seguida,
espalhar a partir desta área inoculada.
Para que seja possível a detecção de todos os agentes patogénicos existentes na amostra,
deve ainda ser incluído o BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood e, dependendo do tipo
de amostra, outro meio selectivo adicional.3,4
Dado que muitos agentes patogénicos necessitam de dióxido de carbono no isolamento
primário, as placas devem ser incubadas numa atmosfera aeróbia que contenha
aproximadamente 3 a 10% de CO2. Incubar as placas a uma temperatura entre 35 e 37°C,
durante 18 a 24 h ou mais, se necessário.
Resultados
A morfologia típica das colónias no BD Modified CNA Agar é a seguinte:
Estreptococos (não
pertencentes ao grupo D)
Enterococos (Grupo D)
Estafilococos
Micrococos
Corinebactérias
Candida spp.
Listeria monocytogenes
Bactérias Gram-negativas
De pequena dimensão, branco a acinzentado. Pode ser
hemolítico, consoante as espécies
De pequena a média dimensão, mas maiores do que os
estreptococos do grupo A, cinzento
De média dimensão, branco a cinzento ou creme a
amarelo. Pode ser hemolítico, consoante as espécies
De grande dimensão, branco a cinzento ou de amarelo a
cor-de-laranja
De pequena a grande dimensão, branco a cinzento ou
amarelo
De pequena dimensão, branco
De pequena dimensão, cinzento, com beta-hemólise fraca
Inibição parcial a completa
No BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, os estafilococos e as bactérias Gramnegativas serão parcial a totalmente inibidas ao passo que os estreptococos e os
enterococos irão produzir as mesmas reacções de crescimento que no BD Modified CNA
Agar. No entanto, existe uma tendência para as colónias assumirem uma coloração azulada
devido à acumulação do cristal violeta. Outras bactérias Gram-positivas podem ou não
crescer, dependendo da sua sensibilidade aos inibidores.
Para obter mais pormenores sobre a interpretação do crescimento nas placas de isolamento
primário, consultar a bibliografia.4-7
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CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
O BD Modified CNA Agar é utilizado no isolamento de bactérias Gram-positivas, por exemplo,
dos estreptococos, dos estafilococos, dos corineformes, das espécies de Listeria e outros.2
O BD Modified CNA Agar with Crystal Violet é utilizado no isolamento dos estreptococos e
enterococos. Os estafilococos são inibidos neste meio. Outras bactérias Gram-positivas podem
ou não crescer no meio, dependendo das espécies e da sua sensibilidade aos inibidores.
A maioria das bactérias Gram-negativas, como a Enterobacteriaceae, são inibidas neste meio.
Resultados de desempenho
Numa avaliação interna, foram testadas estirpes das seguintes espécies quanto ao seu
crescimento e reacções hemolíticas nestes meios. O BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep
Blood foi utilizado como referência de crescimento. As placas foram incubadas a uma
temperatura entre 35 e 37°C durante 20 h, numa atmosfera aeróbia enriquecida com CO2. Os
resultados são apresentados no Quadro 1.
Limitações do procedimento
Apesar de serem bactérias Gram-positivas, os esporoformadores aeróbios (Bacillus spp. e
géneros relacionados) podem ser inibidos nestes meios.
Estes meios não são inibidores para os fungos.
O número e tipo de espécies bacterianas que surgem como agentes infecciosos é muito
grande. Assim, antes de os meios serem utilizados rotineiramente para microrganismos
raramente isolados ou recentemente descobertos, a sua adequação deve ser testada pelo
utilizador, ao cultivar culturas puras do organismo em questão.
Embora possam ser realizados alguns testes de diagnóstico directamente nestes meios, é
necessária a realização de testes bioquímicos para uma completa identificação e, se
indicado, recomenda-se a realização de testes imunológicos usando culturas puras.
Tabela 1: Resultados de desempenho
Espécies
Streptococcus pyogenes
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus sanguis
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Listeria monocytogenes
Escherichia coli
Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa
BD Modified CNA
Agar
Crescimento, betahemólise
Crescimento, betahemólise
Crescimento, alfahemólise
Crescimento, alfahemólise fraca
Crescimento
Crescimento, betahemólise
Crescimento
Crescimento, betahemólise fraca
Sem crescimento
Crescimento muito
fraco, proliferação
inibida
Sem crescimento
BD Modified CNA
Agar with Crystal
Violet
Crescimento, betahemólise
Crescimento, betahemólise
Crescimento, alfahemólise
Crescimento, alfahemólise fraca
Crescimento
Sem crescimento
Sem crescimento
Sem crescimento
Sem crescimento
Crescimento muito
fraco, proliferação
inibida
Sem crescimento
BD Columbia CNA
Agar with 5% Sheep
Blood
Crescimento, betahemólise
Crescimento, betahemólise
Crescimento, alfahemólise
Crescimento, alfahemólise fraca
Crescimento
Crescimento, betahemólise
Crescimento
Crescimento, betahemólise muito fraca
Sem crescimento
Crescimento muito
fraco, proliferação
inibida
Sem crescimento
BIBLIOGRAFIA
1. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In: E.H. Lennette, A. Balows,
W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for
medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504.
PA-255082.02
-4-
3. Forbes, B.A. and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
4. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic
microbiology, 9th ed., p. 415. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO.
5. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture
media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society
for Microbiology, Washington, D.C.
6. Ruoff, K. L., R.A. Whiley, and D. Beighton. 2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology,
8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Teixeira, L.M., and R.R. Facklam. 2003. Enterococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H.
Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
EMBALAGEM/APRESENTAÇÃO
BD Modified CNA Agar with 5% Sheep Blood
No. de cat. 255082
Meios em placas prontos a usar, 20 placas
BD Modified CNA Agar with Crystal Violet and 5% Sheep Blood
No. de cat. 255086
Meios em placas prontos a usar, 20 placas
INFORMAÇÕES ADICIONAIS
Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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38800 Le Pont de Claix/France
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PA-255082.02
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