linfócitos T

Interpretação de
Resultados
Jornada do MOH – 2011
Clara Cavalcanti
Draft
Maíra
Draft
Renata
Draft
Os eixos!
Draft
Draft
granulosidade (SSC)
SSC↑
C-
SSC↑
C+
SSC↓
C-
SSC↓
C+
fluorescência C
Draft
Fluorescência B
Positiva
para B
Duplo
Positiva
Duplo
Negativa
Positiva
para A
Fluorescência A
Draft
Os marcadores!
Draft
Células CD45+
CD45
granulócitos
monócitos
linfócitos
CD45+
CD45++
CD45+++
Todos os LEUCÓCITOS expressam CD45, mas os LINFÓCITOS
expressam em maior intensidade.
Draft
CD45
granulócitos
granulosidade
( granulosidade e CD45)
monócitos
(média granulosidade e
média expressão de CD45)
linfócitos
( granulosidade e CD45)
CD45
Draft
Células CD3+
Todos os linfócitos T (T auxiliar, T citotóxico e T
duplo-positivo) expressam CD3.
CD45
CD3
Draft
linfócito T
helper
linfócito T
duplopositivo
linfócito T
citotóxico
CD45+++
CD45+++
CD45+++
CD3+
CD3+
CD3+
Linfócitos CD3CD45
CD3
Draft
linfócito B
célula NK
CD45+++
CD45+++
CD3-
CD3-
CD3
granulosidade
linfócitos B e células NK
( granulosidade e CD3-)
linfócitos T
( granulosidade e CD3+)
CD3
Draft
+/- e CD8+/+/Células CD4+/-
CD45
CD3
linfócito T
helper
linfócito T
duplopositivo
linfócito T
citotóxico
CD45+++
CD45+++
CD45+++
CD3+
CD3+
CD3+
CD4+
CD4+
CD4-
CD8-
CD8+
CD8+
CD4
CD8
Draft
+/- e CD8+/+/Células CD4+/-
CD45
CD3
monócito
célula NK
CD45++
CD45+++
CD3-
CD3-
CD4+
CD4-
CD8-
CD8+
CD4
CD8
Draft
+/- e CD8+/+/Células CD3+/Linfócitos
(CD45+++)
linfócitos T citotóxicos e T
duplo-positivos
(CD45+++ CD3+ CD8+)
células NK
CD8
(CD45+++ CD3- CD8+)
Linfócitos T helper
(CD45+++ CD3+ CD8-)
CD3
linfócitos B
(CD45+++ CD3- CD8-)
Draft
+/- e CD8+/+/Células CD4+/Linfócitos
(CD45+++)
linfócitos T helper
(CD45+++ CD3+ CD8- CD4+)
linfócitos T duplo-positivos
CD4
(CD45+++ CD3+ CD8+ CD4+)
linfócitos T citotóxicos
(CD45+++ CD3+ CD8+ CD4-)
CD8
células NK
(CD45+++ CD3- CD8+ CD4-)
linfócitos B
(CD45+++ CD3- CD8- CD4-)
Draft
+/- e CD8+/+/Células CD4+/linfócitos (CD45+++)
CD4
e monócitos (CD45++)
monócitos
(CD45++ CD3- CD8- CD4+)
CD8
Draft
CD45
SSC
CD3
Beads do tubo
trucount
CD3
CD4
SSC
CD8
Disposição Geral das Populações
CD8
Draft
Debris
Vejam o que o eixo te diz!!!
Draft
SSC↓ ?
CD45+++ = linfócitos
Draft
+++ CD3+
SSC↓ CD45?
= linfócitos T
Draft
+++ CD3+
SSC↓ CD45?
CD8+
= linfócitos T citotóxicos
Draft
células NK
linfócitos T
citotóxicos
linfócitos B
linfócitos T
helper
Draft
beads do tubo
TruCOUNT
? + CD8- CD4+
SSC↓ CD45+++ CD3
= linfócitos T helper
Draft
SSC↓ CD45+++ CD3+ CD8+ CD4-
?
= linfócitos T citotóxicos
Draft
SSC↓ CD45+++ CD3+ CD8+ CD4
? +
= linfócitos T duplo-positivos
Draft
linfócitos T
duplopositivos
linfócitos T
helper
células NK
Draft
linfócitos T
citotóxicos
granulócitos
células NK
linfócitos T
citotóxicos
beads do tubo
TruCOUNT
linfócitos B,
células NK e
debris
monócitos
linfócitos T
totais
debris
linfócitos B
linfócitos
totais
linfócitos T
duplopositivos
linfócitos T
helper
células NK
Draft
linfócitos T
citotóxicos
E as contagens?
Draft
Número de linfócitos
totais que passaram
pela célula de fluxo
Draft
Draft
Número de beads que
passaram pela célula
de fluxo
Draft
Draft
Contagem
Absoluta
(Abs Cnt)
no de eventos
volume de sangue (µL)
Draft
Contagem
Percentual
(% Lymph)
no de eventos
no de eventos de
linfócitos totais
x 100%
Contagem percentual
A cada 100 linfócitos, 74
são linfócitos T
Draft
Contagem absoluta
Tubos BD TruCOUNTTM
50µL
volume conhecido de
amostra
contagem conhecida
de beads
Draft
50µL
50µL sangue
51700 beads
Se o citômetro adquirisse todo o
sangue (50 µL), contaria 51700
beads. Como contou 1809 beads, o
volume de sangue adquirido foi X.
Draft
Em 1 µL de sangue, há
2647 linfócitos totais
CD45 aqui incluem somente os linfócitos!
Draft
Taxa H/S
Para cada linfócito T
citotóxico,
há
2,34
linfócitos T helper
Draft
Trucount Control
Draft
Controle Baixo (Low
(Low))
Confira os valores
51
Draft
42,9
59,1
Controle Médio (Medium
(Medium))
Confira os valores
253
Draft
231
275
Controle Alto (High
(High))
Confira os valores
1020
Draft
953,7
1086,3
Problemas & Soluções
Draft
Amostra sem anticorpo
Draft
Lise incompleta
tempo de incubação inferior a 15 minutos
Draft
Solução de lise diluída em salina
Draft
Draft
Draft
antes do ajuste
Acontecimento pontual
Amostra com problemas de compensação
Solução: FL2- ↑%FL3
Draft
depois do ajuste
Obrigada!!!
0800 771 7157
[email protected]
Draft
Amostra descompensada
Draft
Time Delay Falhou – FACSComp Report
Draft
Acontecimento pontual:
Particularidade da amostra
Acontecimento em todas as amostras:
Descalibração – passar o Calibrite novamente
Draft
Problema na preparação da amostra
Draft
Amostra exposta à luz durante a incubação
Draft
Bolhas!!!
Draft
Homogeneização incorreta
Marcação incompleta
Draft
Pipetagem incorreta
Marcação incompleta
Draft
Draft
Painel errado
Draft
Acontecimento pontual:
Variação de pressão
Particularidade da amostra
Acontecimento em todas as amostras:
Sujeira no equipamento
Descalibração – passar o Calibrite novamente
Draft
Expressão aumentada de células CD3+CD4-CD8-
Draft
Populações com diferentes
intensidades de expressão de CD8
Draft
Inclusão de monócitos no gate de linfócitos
Causa: monocitose
Draft
Amostra lipêmica
Draft