linfócitos T
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Interpretação de Resultados Jornada do MOH – 2011 Clara Cavalcanti Draft Maíra Draft Renata Draft Os eixos! Draft Draft granulosidade (SSC) SSC↑ C- SSC↑ C+ SSC↓ C- SSC↓ C+ fluorescência C Draft Fluorescência B Positiva para B Duplo Positiva Duplo Negativa Positiva para A Fluorescência A Draft Os marcadores! Draft Células CD45+ CD45 granulócitos monócitos linfócitos CD45+ CD45++ CD45+++ Todos os LEUCÓCITOS expressam CD45, mas os LINFÓCITOS expressam em maior intensidade. Draft CD45 granulócitos granulosidade ( granulosidade e CD45) monócitos (média granulosidade e média expressão de CD45) linfócitos ( granulosidade e CD45) CD45 Draft Células CD3+ Todos os linfócitos T (T auxiliar, T citotóxico e T duplo-positivo) expressam CD3. CD45 CD3 Draft linfócito T helper linfócito T duplopositivo linfócito T citotóxico CD45+++ CD45+++ CD45+++ CD3+ CD3+ CD3+ Linfócitos CD3CD45 CD3 Draft linfócito B célula NK CD45+++ CD45+++ CD3- CD3- CD3 granulosidade linfócitos B e células NK ( granulosidade e CD3-) linfócitos T ( granulosidade e CD3+) CD3 Draft +/- e CD8+/+/Células CD4+/- CD45 CD3 linfócito T helper linfócito T duplopositivo linfócito T citotóxico CD45+++ CD45+++ CD45+++ CD3+ CD3+ CD3+ CD4+ CD4+ CD4- CD8- CD8+ CD8+ CD4 CD8 Draft +/- e CD8+/+/Células CD4+/- CD45 CD3 monócito célula NK CD45++ CD45+++ CD3- CD3- CD4+ CD4- CD8- CD8+ CD4 CD8 Draft +/- e CD8+/+/Células CD3+/Linfócitos (CD45+++) linfócitos T citotóxicos e T duplo-positivos (CD45+++ CD3+ CD8+) células NK CD8 (CD45+++ CD3- CD8+) Linfócitos T helper (CD45+++ CD3+ CD8-) CD3 linfócitos B (CD45+++ CD3- CD8-) Draft +/- e CD8+/+/Células CD4+/Linfócitos (CD45+++) linfócitos T helper (CD45+++ CD3+ CD8- CD4+) linfócitos T duplo-positivos CD4 (CD45+++ CD3+ CD8+ CD4+) linfócitos T citotóxicos (CD45+++ CD3+ CD8+ CD4-) CD8 células NK (CD45+++ CD3- CD8+ CD4-) linfócitos B (CD45+++ CD3- CD8- CD4-) Draft +/- e CD8+/+/Células CD4+/linfócitos (CD45+++) CD4 e monócitos (CD45++) monócitos (CD45++ CD3- CD8- CD4+) CD8 Draft CD45 SSC CD3 Beads do tubo trucount CD3 CD4 SSC CD8 Disposição Geral das Populações CD8 Draft Debris Vejam o que o eixo te diz!!! Draft SSC↓ ? CD45+++ = linfócitos Draft +++ CD3+ SSC↓ CD45? = linfócitos T Draft +++ CD3+ SSC↓ CD45? CD8+ = linfócitos T citotóxicos Draft células NK linfócitos T citotóxicos linfócitos B linfócitos T helper Draft beads do tubo TruCOUNT ? + CD8- CD4+ SSC↓ CD45+++ CD3 = linfócitos T helper Draft SSC↓ CD45+++ CD3+ CD8+ CD4- ? = linfócitos T citotóxicos Draft SSC↓ CD45+++ CD3+ CD8+ CD4 ? + = linfócitos T duplo-positivos Draft linfócitos T duplopositivos linfócitos T helper células NK Draft linfócitos T citotóxicos granulócitos células NK linfócitos T citotóxicos beads do tubo TruCOUNT linfócitos B, células NK e debris monócitos linfócitos T totais debris linfócitos B linfócitos totais linfócitos T duplopositivos linfócitos T helper células NK Draft linfócitos T citotóxicos E as contagens? Draft Número de linfócitos totais que passaram pela célula de fluxo Draft Draft Número de beads que passaram pela célula de fluxo Draft Draft Contagem Absoluta (Abs Cnt) no de eventos volume de sangue (µL) Draft Contagem Percentual (% Lymph) no de eventos no de eventos de linfócitos totais x 100% Contagem percentual A cada 100 linfócitos, 74 são linfócitos T Draft Contagem absoluta Tubos BD TruCOUNTTM 50µL volume conhecido de amostra contagem conhecida de beads Draft 50µL 50µL sangue 51700 beads Se o citômetro adquirisse todo o sangue (50 µL), contaria 51700 beads. Como contou 1809 beads, o volume de sangue adquirido foi X. Draft Em 1 µL de sangue, há 2647 linfócitos totais CD45 aqui incluem somente os linfócitos! Draft Taxa H/S Para cada linfócito T citotóxico, há 2,34 linfócitos T helper Draft Trucount Control Draft Controle Baixo (Low (Low)) Confira os valores 51 Draft 42,9 59,1 Controle Médio (Medium (Medium)) Confira os valores 253 Draft 231 275 Controle Alto (High (High)) Confira os valores 1020 Draft 953,7 1086,3 Problemas & Soluções Draft Amostra sem anticorpo Draft Lise incompleta tempo de incubação inferior a 15 minutos Draft Solução de lise diluída em salina Draft Draft Draft antes do ajuste Acontecimento pontual Amostra com problemas de compensação Solução: FL2- ↑%FL3 Draft depois do ajuste Obrigada!!! 0800 771 7157 [email protected] Draft Amostra descompensada Draft Time Delay Falhou – FACSComp Report Draft Acontecimento pontual: Particularidade da amostra Acontecimento em todas as amostras: Descalibração – passar o Calibrite novamente Draft Problema na preparação da amostra Draft Amostra exposta à luz durante a incubação Draft Bolhas!!! Draft Homogeneização incorreta Marcação incompleta Draft Pipetagem incorreta Marcação incompleta Draft Draft Painel errado Draft Acontecimento pontual: Variação de pressão Particularidade da amostra Acontecimento em todas as amostras: Sujeira no equipamento Descalibração – passar o Calibrite novamente Draft Expressão aumentada de células CD3+CD4-CD8- Draft Populações com diferentes intensidades de expressão de CD8 Draft Inclusão de monócitos no gate de linfócitos Causa: monocitose Draft Amostra lipêmica Draft
