efeitos da dieta hiperlipídica no sistema

EFEITOS DA DIETA HIPERLIPÍDICA NO SISTEMA IMUNOLÓGICO DE RATOS
WISTAR MANTIDOS EM AMBIENTE ENRIQUECIDO
EFFECTS OF HIGH-FAT DIET ON THE IMMUNE SYSTEM OF WISTAR RATS
KEPT IN ENRICHED ENVIRONMENT
Kelvin Anequini Santos – Discente do curso de Fisioterapia–
Centro Universitário Católico Unisalesiano Auxilium Lins
[email protected]
Leonardo Bordignom Pires - Discente do curso de Fisioterapia
Centro Universitário Católico
André Zanolo Cardoso – Discente do curso de Educação Física
Centro Universitário Católico Unisalesiano Auxilium Lins
Osvaldo Tadeu da Silvia Junior - Docente do Centro Universitário Unisalesiano
“Auxilium” [email protected]
José Alexandre Curiacos de Almeida Leme- Docente do Centro Universitário
Unisalesiano “Auxilium”; Docente da Universidade Estadual Paulista-UNESP
RESUMO
Fatores ambientais como dieta e atividade física têm sido apontada como fator
importante para manutenção da atividade adequada do sistema imunológico. Nesse
sentido, a dieta hiperlipídica é tida como prejudicial ao sistema imunológico. O
ambiente enriquecido é promotor de atividade física, pela inserção das rodas de
atividade e pelo aumento no espaço que proporciona ao animal aumentar o
deslocamento e desenvolver seu repertório motor. Desta forma, o presente estudo
tem por objetivo investigar os efeitos da dieta hiperlipídica (HP) na resposta
imunológica em ratos wistar mantidos em ambiente enriquecido. Para isso, os animais
foram distribuídos em grupo controle (n=7) mantidos em gaiola ambiente enriquecido
(AE) e que receberam a dieta convecional e grupo HP (n=7) mantidos em gaiola
enriquecida que receberam a dieta HP (57,6% lipídios no total energético da dieta).
No inicio e final do período experimental de 5 semanas foram coletadas amostras para
as análises global e diferencial de leucócitos. Foi realizado o delta (final-inicial) e os
resultados foram analisados estatisticamente utilizando o teste t de student. Os
valores de contagem total dos leucócitos foram iguais em ambos os grupos. Todavia,
foi observado tendência a maiores valores nos animais que receberam a dieta HP
(p>0.08). Nas análises diferenciais de leucócitos não houve diferença nos grupos
estudados. Desta forma pode ser concluído que a dieta hiperlipídica não alterou
significativamente a resposta imunológica dos animais mantidos no AE, apenas
promovendo tendência a aumento na contagem total de leucócitos. Como o
experimento ainda continua por mais 4 semanas, poderão ser encontrados resultados
diferentes até o final dele.
Palavras-chave: Leucócitos. Sistema imunológico. Dieta hiperlipídica. Atividade física.
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INTRODUÇÃO
O sistema imunológico tem importância fundamental na defesa e regeneração
do organismo. Estas ações são realizadas basicamente no combate contra
microorganismos, na remoção de células mortas e detritos celulares e estabelecendo
a memória imunológica (SCHULENBURG et al., 2004).
As células do sistema imunológica podem ser agrupados nos granulócitos
polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos e basófilos), monócitos e macrófagos e os
linfócitos (LEANDRO et al., 2007).
Uma série de fatores podem alterar a resposta do sistema imunológico, sejam
fatores genéticos ou ambientais. Dentre estes fatores ambientais estão a dieta e a
nutrição que podem alterar de forma positiva ou negativa no sistema imunológico, isto
porque o sistema imune é sensível tanto aos agentes infecciosos quanto às mudanças
na homeostase orgânica (WOMACK et al., 2007; LEANDRO, 2007).
Sabe-se que a dieta hiperlipídica aumenta a secreção de leptina, bem
como,estimula a produção de citocinas pró inflamatórias que podem alterar as
concentrações globais e diferenciais de leucócitos (GERALDO et al., 2008). Alguns
estudos têm observado que o comportamento do sistema imune em resposta à dieta
hiperlipídica não é linear e pode não promover diferenças significativas (SANTOS,
2013; SILVA, 2014).
A relação entre o sistema imunológico e atividade física também não é linear
nem estável (WOODS, PENCE, 2015). Se, por um lado, o exercício físico leve a
moderado melhora a função dos leucócitos, o exercício intenso ou muito prolongado
pode induzir inibição de alguns aspectos do sistema imune (PEDERSEN et al., 1996;
OLIVEIRA et al., 2002; LEANDRO et al., 2007). A atividade física moderada promove
quimiotaxia, desgranulação, fagocitose e atividade oxidativa dos neutrófilos
(LEANDRO et al., 2007; WASINSKI et al., 2013) corroborando com a diminuição da
suscetibilidade à doenças (ESCRIBANO et al., 2002). Todavia, em excesso a
atividade física age como imunossupressor, prejudicando a resposta leucocitária
(ESCRIBANO et al., 2002).
O ambiente enriquecido (AE) é um conjunto de vários e complexos estímulos
inanimados e sociais (SZTAINBERG e CHEN, 2010) com efeitos importantes ao
animal. Grande parte destes efeitos é creditada à atividade física realizada na gaiola
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enriquecida, sendo considerado um promotor de atividade física (KOBILO et al.,
2010).
Diante deste quadro, pouco se sabe sobre a influência de dieta hiperlipídica
(57,6% de lipídios) no sistema imunológico. Neste sentido, o presente estudo
investigou se a ingestão da dieta HP altera as concentrações dos leucócitos no sangue
de animais mantidos em ambiente enriquecido, ou seja, ativos.
OBJETIVOS
O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da ingestão de dieta
hiperlipídica nas contagens total e diferencial de leucócitos em ratos Wistar mantidos
em ambiente enriquecido
METODOLOGIA
Para desenvolver este estudo, ratos da linhagem Wistar (Rattus Norvegicus
Albinus Wistar) com idade em torno de 3 meses foram mantidos em gaiolas coletivas,
a temperatura controlada por ar condicionado de 25 ± 1º C e em ciclo claro/escuro de
12/12 horas, com livre acesso a água e ao alimento.
O experimento seguiu as recomendações das Resoluções Brasileiras de
Bioética de Experimentos com Animais (lei federal nº 11.794, de 08 de outubro de
2008, Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal- CONCEA). Este
projeto foi submetido para apreciação no Comitê de Ética em Experimentação Animal
do Centro Universitário Católico Salesiano Auxilium- Unisalesiano.
Distribuição do grupos
Os animais foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos:
Dieta convencional (DC) - Animais mantidos em ambiente enriquecido que
receberam dieta convencional;
Dieta hiperlipídica (DH) – Animais mantidos em ambiente enriquecido que
receberam dieta hiperlipídica (57,6% de lipídios)
Análise global de leucócitos
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No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de 25µL
de sangue da parte distal da cauda de cada rato utilizando capilar heparinizado, sem
a utilização de anestesia. A coleta foi feita por volta das 14 horas da tarde. A amostra
coletada foi dispensada em microtubo de 1,5 mL e diluído em 500 µl de solução de
Turk. Após suave agitação, a solução será gotejada na câmara de Neubauer e
realizada a contagem total de leucócitos em microscópio (OLIVEIRA et al., 2002).
Análise diferencial de leucócitos
No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de uma
gota de sangue da parte distal da cauda de cada rato que foi dispensada em lâmina
de vidro e, posteriormente, feito o esfregaço desta. Após seca , a lâmina foi
mergulhada nos corantes do panótico rápido. Depois de secas, as lâminas serão
analisadas em microscópio, com a utilização de óleo de imersão entre a objetiva e o
material observado. Foram contadas 50 células em cada lamina sendo diferenciados
os tipos de leucócitos entre estas células analisadas (OLIVEIRA et al., 2002).
Análise estatística
Após o teste de normalidade (Kolmogorov-Smirnov), os resultados foram analisados
estatisticamente utilizando o teste t Student ou Mann-Whitney (para dados não
paramétricos) através do software SPSS®.
RESULTADOS PRELIMINARES
No presente estudo foram investigadas as possíveis alterações nas contagens
totais e diferenciais de leucócitos sanguíneos. Este estudo é resultado de um projeto
piloto que está promovendo ajuste das técnicas para o desenvolvimento de um projeto
maior.
No presente trabalho foram estudados dois grupos mantidos no ambiente
enriquecido (AE), sendo um alimentado com dieta normal (DN) e outro com dieta
hiperlipídica (DH).
O estudo da contagem diferencial de leucócitos não apresentou diferenças pelas
dietas oferecidas aos animais (Tabela 1). Todavia, foi encontrado no cálculo
estatístico do delta uma tendência (p>0.08) a valores maiores nos animais que
receberam a dieta hiperlipídica. A interpretação deste resultado é precoce, sendo
necessária uma análise mais ampla inserindo os demais resultados do estudo
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completo.
Tabela 1. Contagem total de leucócitos (n° de células x 103/mm3 de
sangue) dos animais dos grupos DC (dieta controle) e DH (dieta
hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa e posteriormente
ao período experimental (5 semanas).
GRUPOS
DC
DH
13,1±3,3
10,1±2,3
-3,1
12,3±3,3
12,25±2,5
0,025
PARÂMETROS
Contagem total de leucócitos pré
Contagem total de leucócitos pós
Delta (final-inicial)
Teste t Student; p<0,05 n=8 ratos/ grupo
A tabela 2 apresenta os resultados da contagem diferencial de leucócitos nos
grupos estudados. Para os animais mantidos em ambiente enriquecido, a dieta
hiperlipídica administrada durante 5 semanas não promoveu mudanças significativas.
Tabela 2. Contagem diferencial de leucócitos (%) dos animais dos grupos dc (dieta
controle) e dh (dieta hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa e
posteriormente ao período experimental (5 semanas).
Leucócitos
Grupos
Linfócito
Típico
Linfócito
Atípico
Monócito
Neutrófilo
Eosinófilo
Basófilo
DC pré
DH pré
DC
DH
Δ DC
Δ DH
51,5±11,8
3,6±4,7
8±2,9
22,6±6,5
3,5±2,6
5,25±3,5
52,4±10,1
7,3±4,7
8±5,3
20,8±9,7
3,7±2,9
4,3±3,9
47,25±9,5
4,7±2,1
4,5±2,3
19,5±3,7
5±1,8
6,75±2,4
47,4±3,8
5,4±1
4,8±1
19,7±5,8
6±4
8,8±5,1
-4,25
1,1
-3,5
-3,1
1,5
1,5
-5
-1,9
-3,1
-1,1
2,3
4,6
Teste t Student; p<0,05 n=8 ratos/ grupo
Os resultados do presente estudo permitem concluir que a administração da
dieta hiperlipídica durante o período de 5 semanas não promove modificações na
quantidade total ou diferencial de leucócitos em animais mantidos em ambiente
enriquecido.
A continuação deste estudo contribuirá no esclarecimento se um período maior
de administração da dieta ou a oferta da dieta no ambiente enriquecido (sedentário)
produzem modificações na contagem dos leucócitos.
REFERÊNCIAS
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DE HEREDIA, F.P.; GÓMEZ-MARTÍNEZ, S.; MARCOS, A. Obesity, inflammation and
the immune system. Proceedings of the Nutrition Society, v. 71, n. 02, p. 332-338,
2012.
Escribano, B.M et al.. Benefits of moderate training to the nonspecific immune
response of colts. Equine Vet J Suppl. 2002:182-5.
GERALDO, J.M.; ALFENAS, R.C.G. Role of diet on chronic inflammation prevention
and control: current evidences. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia &
Metabologia, v. 52, n. 6, p. 951-967, 2008.
GREENBERG, A.S.; OBIN, M.S. Obesity and the role of adipose tissue in inflammation
and metabolism. The American journal of clinical nutrition, v. 83, n. 2, p. 461S465S, 2006.
LEANDRO, C. G. et al. Mecanismos adaptativos do sistema imunológico em resposta
ao treinamento físico. Rev Bras Med Esporte, v. 13, n. 5, p. 343-348, 2007.
OLIVEIRA, C.A.M.; ROGATTO, G.P.; LUCIANO, E. Efeitos do treinamento físico de
alta intensidade sobre os leucócitos de ratos diabéticos. Rev Bras Med
Esporte, Niterói , v. 8, n. 6, p. 219-224, Dec. 2002.
PEDERSEN B.K., et al. Immunity in athletes. J Sports Med Phys Fitness 1996;36:23645
SANTOS, Ed W.C.O. Estudo da função de macrófagos peritoniais de
camundongos submetidos à dieta hipoprotéica e dieta hiperlipídica. 2013. Tese
de Doutorado. Universidade de São Paulo.
SANTOS, J. W. ; MELLO, M.A.R. . Responses of Blood Lactate Concentration in
Aerobic and Anaerobic Training Protocols at Different Swimming Exercise Intensities
in Rats. Journal of Exercise Physiology Online, v. 14, p. 34-42, 2011.
SCHULENBURG, H.; KURZ, C.L.; EWBANK , J.J. Evolution of the innate immune
system: the worm perspective. Immunol Rev. 2004;198:36-58.
SILVA, K.M.F. Obesidade induzida por dieta em diferentes tempos: efeitos sobre
análises murinométricas, hematológicas e imunológicas de ratas. 2014. Tese de
Doutorado. Universidade Federal de Pernambuco.
WASINSKI, F. et al. Exercise and caloric restriction alter the immune system of mice
submitted to a high-fat diet. Mediators of inflammation, v. 2013, 2013.
WOMACK, J. et al. Obesity and immune cell counts in women.Metabolism, v. 56, n.
7, p. 998-1004, 2007.
WOODS, J.A.; PENCE, B.D. Physical Activity, Exercise, and the Immune System:
Three Lines of Research That Have Driven the Field. 2015.
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