Microscopia Organização: Eliana Maria Beluzzo Dessen e Jorge Oyakawa Diagramação: Regina de Siqueira Bueno I. Conhecendo o microscópio A vista humana não é capaz de perceber objetos com diâmetros inferiores a um décimo do milímetro (0,1mm ou 100µm). O microscópio óptico é utilizado para a observação de células vivas ou mortas (preferencialmente após fixação e coloração) cujas medidas encontram-se abaixo de 0,1mm. Entre elas temos células dos organismos eucariotos, as bactérias, os ovos de vermes e muitas estruturas dos seres vivos. Figura 1. Microscópio óptico Tubo ou Canhão Lente Ocular Encaixada na extremidade superior do tubo, sua função é aumentar a imagem formada pela objetiva. O aumento fornecido pela ocular está, geralmente, gravado nela própria. Por exemplo: 5x, 8x, 10x, etc. Revólver ou Tambor Nele estão inseridas as lentes objetivas que podem ser movimentadas quando o tambor é girado. Este movimento deve ocorrer sempre no sentido da objetiva de menor para a de maior aumento Estativa, Braço ou Coluna Suporte que sustenta o tubo, a platina e os parafusos de focalização. Lente Objetiva Permite a ampliação da imagem de um objeto. Os aumentos fornecidos pelas objetivas estão gravados nas mesmas. Parafuso de Focalização A movimentação deste parafuso permite a focalização da lâmina. Platina ou Mesa A lâmina com o material a ser observado é colocada sobre a platina que apresenta abertura no centro permitindo a passagem dos raios luminosos. Liga/Desliga a Fonte Luminosa Fonte de luz Legenda: Pé ou Base Parte Mecânica Parte Óptica Limpar bem uma lâmina e, com um conta-gotas pingar, sobre ela, uma gota de água; Cortar um pedaço de jornal de aproximadamente 1 cm. 1 cm 3 Sobre a gota colocar o pedaço de jornal e esperar alguns segundos; Ág ua 2 1 1 cm Preparando letras para serem observadas ao microscópio 1 gota 4 Sobre o jornal colocar uma lamínula limpa; 5 Se houver bolhas de ar pressionar levemente a lamínula com uma pinça; 6 Levar a lâmina com a preparação ao microscópio 7 Observar em menor aumento (100x, sendo 10x da objetiva e 10x da ocular) II. Procedimentos básicos para a correta observação microscópica de uma preparação: 1. Ligar a fonte luminosa. 2. Colocar a lâmina com a preparação sobre a platina. 3. Olhando pelo lado externo, girar com cuidado o parafuso de focalização de forma a aproximar a objetiva de 4x o mais perto possível da preparação. (Atenção: Não forçar o parafuso) 4. Olhando pela ocular, girar vagarosamente o parafuso de focalização no sentido inverso até obter uma imagem nítida da preparação. 5. A seguir, girar o tambor posicionando a objetiva de 10x sobre a preparação e focalizar o material girando MUITO lentamente o parafuso de focalização, pois o material deverá estar quase em foco. (Atenção para não aproximar demais a objetiva da lâmina) 6. Para uma ampliação maior (objetiva de 40x), girar o canhão e posicionar a objetiva de 40x sobre a preparação. Girar o parafuso de focalização (MUITO DEVAGAR) até que o material esteja em foco. (Atenção para não forçar a objetiva sobre a lâmina, que pode quebrar) III. Parâmetros importantes para operar um microscópio óptico. 1. A ampliação consiste no grau de aumento da imagem em relação ao objeto. A ampliação final do material é obtida multiplicando a ampliação produzida pela objetiva pela ampliação obtida pela ocular. 2. O poder de resolução corresponde à distância mínima necessária para que dois pontos possam ser distinguidos ao microscópio. Para o microscópio óptico essa distância é de 0,2 µm devido ao comprimento de onda das radiações visíveis. II. Procedimentos básicos para a correta observação microscópica de uma preparação: 1. Ligar a fonte luminosa. 2. Colocar a lâmina com a preparação sobre a platina. 3. Olhando pelo lado externo, girar com cuidado o parafuso de focalização de forma a aproximar a objetiva de 4x o mais perto possível da preparação. (Atenção: Não forçar o parafuso) 4. Olhando pela ocular, girar vagarosamente o parafuso de focalização no sentido inverso até obter uma imagem nítida da preparação. 5. A seguir, girar o tambor posicionando a objetiva de 10x sobre a preparação e focalizar o material girando MUITO lentamente o parafuso de focalização, pois o material deverá estar quase em foco. (Atenção para não aproximar demais a objetiva da lâmina) 6. Para uma ampliação maior (objetiva de 40x), girar o canhão e posicionar a objetiva de 40x sobre a preparação. Girar o parafuso de focalização (MUITO DEVAGAR) até que o material esteja em foco. (Atenção para não forçar a objetiva sobre a lâmina, que pode quebrar) III. Parâmetros importantes para operar um microscópio óptico. 1. A ampliação consiste no grau de aumento da imagem em relação ao objeto. A ampliação final do material é obtida multiplicando a ampliação produzida pela objetiva pela ampliação obtida pela ocular. 2. O poder de resolução corresponde à distância mínima necessária para que dois pontos possam ser distinguidos ao microscópio. Para o microscópio óptico essa distância é de 0,2 µm devido ao comprimento de onda das radiações visíveis. II. Procedimentos básicos para a correta observação microscópica de uma preparação: 1. Ligar a fonte luminosa. 2. Colocar a lâmina com a preparação sobre a platina. 3. Olhando pelo lado externo, girar com cuidado o parafuso de focalização de forma a aproximar a objetiva de 4x o mais perto possível da preparação. (Atenção: Não forçar o parafuso) 4. Olhando pela ocular, girar vagarosamente o parafuso de focalização no sentido inverso até obter uma imagem nítida da preparação. 5. A seguir, girar o tambor posicionando a objetiva de 10x sobre a preparação e focalizar o material girando MUITO lentamente o parafuso de focalização, pois o material deverá estar quase em foco. (Atenção para não aproximar demais a objetiva da lâmina) 6. Para uma ampliação maior (objetiva de 40x), girar o canhão e posicionar a objetiva de 40x sobre a preparação. Girar o parafuso de focalização (MUITO DEVAGAR) até que o material esteja em foco. (Atenção para não forçar a objetiva sobre a lâmina, que pode quebrar) III. Parâmetros importantes para operar um microscópio óptico. 1. A ampliação consiste no grau de aumento da imagem em relação ao objeto. A ampliação final do material é obtida multiplicando a ampliação produzida pela objetiva pela ampliação obtida pela ocular. 2. O poder de resolução corresponde à distância mínima necessária para que dois pontos possam ser distinguidos ao microscópio. Para o microscópio óptico essa distância é de 0,2 µm devido ao comprimento de onda das radiações visíveis. II. Procedimentos básicos para a correta observação microscópica de uma preparação: 1. Ligar a fonte luminosa. 2. Colocar a lâmina com a preparação sobre a platina. 3. Olhando pelo lado externo, girar com cuidado o parafuso de focalização de forma a aproximar a objetiva de 4x o mais perto possível da preparação. (Atenção: Não forçar o parafuso) 4. Olhando pela ocular, girar vagarosamente o parafuso de focalização no sentido inverso até obter uma imagem nítida da preparação. 5. A seguir, girar o tambor posicionando a objetiva de 10x sobre a preparação e focalizar o material girando MUITO lentamente o parafuso de focalização, pois o material deverá estar quase em foco. (Atenção para não aproximar demais a objetiva da lâmina) 6. Para uma ampliação maior (objetiva de 40x), girar o canhão e posicionar a objetiva de 40x sobre a preparação. Girar o parafuso de focalização (MUITO DEVAGAR) até que o material esteja em foco. (Atenção para não forçar a objetiva sobre a lâmina, que pode quebrar) III. Parâmetros importantes para operar um microscópio óptico. 1. A ampliação consiste no grau de aumento da imagem em relação ao objeto. A ampliação final do material é obtida multiplicando a ampliação produzida pela objetiva pela ampliação obtida pela ocular. 2. O poder de resolução corresponde à distância mínima necessária para que dois pontos possam ser distinguidos ao microscópio. Para o microscópio óptico essa distância é de 0,2 µm devido ao comprimento de onda das radiações visíveis. SSOR E F PRO O D A Z PRE ECEBAM R S O N U L A TE QUE OS N A T R O P IM E MANUSEIO O É MUITO T N E IM C E DE RECONH S E ALIZAR Õ U Ç U IS R V T R A INS T N NTES DE TE A IO P Ó C S O ÓGICA. L O DO MICR IT C O Ã Ç PREPARA QUALQUER COM A O T A T N O C ES TENHAM L E E U Q É S DE USO E Õ Ç A O IDEAL IC L P PIO E AS EX Ó C S O R IC M ATÓRIO. R O FOTO DO B A L O N NTRAREM ANTES DE E PREZADO PROFESSOR NTE A T R O P M I O É MUIT EBAM C E R S O N U QUE OS AL NTO E M I C E H N O E REC D S E Õ Ç U R ÓPIO C S INST O R C I M O D E MANUSEIO ZAR I L A U S I V R ENTA ANTES DE T ÃO Ç A R A P E R P QUALQUER GICA. CITOLÓ LES E E U Q É L A O IDE COM A O T A T N O C TENHAM E AS O I P Ó C S O R C FOTO DO MI USO E D S E Õ Ç A EXPLIC NO M E R A R T N ANTES DE E O. I R Ó T A R O B LA