EXPRESSÃO DO GENE DA HMG-CoA SINTASE MITOCONDRIAL

EXPRESSÃO DO GENE DA HMG-CoA SINTASE MITOCONDRIAL EM CÉLULAS
MEV-1: COMPARAÇÃO ENTRE O GENE DE UM MAMÍFERO NÃO
CETOGÊNICO E UM CONTROLE CETOGÊNICO. Alho CS e Marrero PF . Faculdade
de Biociências - FaBio / PUCRS, Universidade de Barcelona / Espanha. [email protected]
Introdução: Após o nascimento, a dieta do feto muda drasticamente: o conteúdo de
gordura aumenta e o de carboidratos diminui. Isto desencadeia um rápido incremento da
cetogênese hepática nos mamíferos cetogênicos e o conseqüente aumento do nível de
corpos cetônicos circulantes. Estes compostos serão utilizados nos demais tecidos,
principalmente no cérebro, como precursores na síntese energética. Na maioria dos
mamíferos, durante este estado fisiológico, observa-se o aumento da 3-hidroxi-metilglutaril-coenzima A sintase (HMG-CoAsm), a qual regula a cetogênese na matriz
mitocondrial. A cetogênese e a HMG-CoAsm (mRNA e atividade enzimática)
encontram-se aumentadas depois do nascimento, permanecem altas durante a lactância e
diminuem no momento que o animal passa a adquirir uma dieta de adulto (rica em
carboidratos). Ao contrário do que ocorre na maioria dos mamíferos, os porcos têm uma
baixa capacidade cetogênica e níveis baixos de expressão do gene da HMG-CoAsm. A
incapacidade cetogênica da espécie porcina pode ser a responsável pela alta taxa de
mortalidade destes animais durante a lactância. Objetivo: Comparar a expressão do gene
HMG-CoAsm de porco (Sus scrofa - mamífero não cetogênico) e de rato (Sprague
Dawley - mamífero cetogênico) medindo nível de mRNA e atividade da enzima em
células Mev-1 transfectadas com o cDNA de ambos genes. Metodologia: Contrução de
vetores de expressão eucariota (pcDNA3) com o cDNA do gene HMG-CoAsm de porco
e de rato. Transfecção das células Mev-1 com ambos vetores. Extração de RNA e
proteínas totais das células transfectadas. Determinação dos níveis de mRNA (Northernblot e Dot-blot) e dos parâmetros cinéticos da proteína sintetizada (ensaio bioquímico).
Resultado: Os níveis de mRNA do gene HMG-CoAsm de porco e rato foram similares,
assim como, os parâmetros cinéticos da proteína sintetizada a partir da expressão de
ambos genes. Conclusão: A baixa capacidade cetogênica e os baixos níveis de expressão
do gene HMG-CoAsm (mRNA e atividade enzimática) observados em porcos não se
devem às variações nas porções codificantes do gene. Sugere-se que algum controle
regulatório esteja determinando a expressão deste gene na espécie porcina. As
observações realizadas em porcos poderão conduzir às investigações que buscam elucidar
a morte súbita do lactante na espécie humana. Órgão Financiador : CNPq