Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3

Monoclonal Mouse
Anti-Human PD-L1
Clone 22C3
Referência M3653
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, destina-se à utilização em imuno-histoquímica. Este
anticorpo marca a PD-L1 em tecido normal e neoplásico. A interpretação clínica de qualquer coloração ou da
sua ausência deve ser complementada com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser
avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de outros testes de diagnóstico por um
patologista certificado. Este anticorpo destina-se a ser utilizado após ter sido realizado o diagnóstico primário
de tumor pela análise histopatológica convencional, utilizando colorações histoquímicas não-imunológicas.
Sinónimos de
antigénio
Ligando de morte programado 1 (1).
Resumo e explicação
A ligação dos ligandos da PD-1, da PD-L1 e da PD-L2 ao recetor da PD-1 encontrado nas células T inibe a
proliferação de células T e a produção de citoquina (2). A regulação superior dos ligandos da PD-1 ocorre em
alguns tumores e a sinalização através desta via pode contribuir para a inibição da vigilância a células T
imunes ativas em tumores (3). O bloqueio da interação da PD-1 com a PD-L1 e a PD-L2 promove a inibição
mediada pela via da PD-1 da resposta imune, incluindo a resposta imune antitumoral (4).
Consulte as General Instructions for Immunohistochemical Staining (Instruções gerais para coloração
imuno-histoquímica) da Dako ou as instruções do sistema de deteção para instruções quanto aos
procedimentos de IHC.
Reagente fornecido
Anticorpo monoclonal de ratinho fornecido na forma líquida em 0,05 mol/L de Tris-HCl, 0,015 mol/L de azida
de sódio, 1% de albumina de soro bovino, pH 7,2.
Clone: 22C3 (5). Isotipo: IgG1.
Concentração de IgG de ratinho em mg/L: Consultar a etiqueta no frasco.
A concentração de proteína pode variar entre lotes sem influenciar a diluição ideal. O título de cada lote
individual é comparado e ajustado face a um lote de referência visando garantir um desempenho da coloração
imuno-histoquímica consistente entre lotes.
Imunogénio
Domínio extracelular humano da PD-L1 (Phe19-Thr239) fundido num fragmento de IgG1 humana (Catálogo
de sistemas de I&D n.º 156-B7-100) (5).
Especificidade
Em análises Western blotting de proteína PD-L1 humana recombinante, o Monoclonal Mouse Anti-Human
PD-L1, Clone 22C3 marca uma banda correspondente a ~40 kDa (5).
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), uma substância química altamente tóxica na forma pura. Em
situações de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode
reagir com as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente
explosivas. Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azida metálica na
canalização.
3. Tal como com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de manuseamento
adequados.
4. Usar equipamento de proteção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais, nacionais e
comunitárias.
Conservação
Conservar entre 2-8 °C. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes
forem conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas
condições. Não existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem
processar-se controlos positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe
uma coloração inesperada que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se
suspeite da existência de um problema com o anticorpo, contactar a Assistência técnica Dako.
Preparação das
amostras
Cortes de parafina: O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido impregnadas em parafina,
fixadas em formol. As amostras de tecido devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm.
Pré-tratamento: Consultar a EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (referência K8005) para
obter instruções sobre como realizar o pré-tratamento de lâminas.
(129183-001)
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Procedimento de
coloração
Estas indicações servem apenas de orientação. As condições ideais poderão variar dependendo do tipo de
amostras e do método de preparação, devendo ser validadas individualmente por cada laboratório.
O desempenho deste anticorpo deve ser estabelecido pelo utilizador durante a utilização com outros sistemas
de coloração manuais ou plataformas automatizadas.
Diluição: A diluição recomendada de Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, referência M3653, é
de 1:50. Diluir o anticorpo em Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (referência
S3022). Incubar as secções de tecido pré-tratadas durante 30 minutos à temperatura ambiente.
Controlo negativo: O reagente de controlo negativo recomendado é o Dako Negative Control, Mouse IgG1
(referência X0931), diluído na mesma concentração de IgG1 que o anticorpo primário. A não ser que a
estabilidade do anticorpo diluído e do controlo negativo tenha sido estabelecida no procedimento de coloração
efetivo, diluir estes reagentes imediatamente antes da utilização. Os controlos positivos e negativos devem
processar-se simultaneamente com as amostras do doente.
Visualização: O sistema de visualização recomendado é o EnVision™ FLEX HRP com uma incubação de
30 minutos à temperatura ambiente. O período de incubação do EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER)
(referências K8021/K8022) é de 30 minutos à temperatura ambiente. Seguir o procedimento fornecido no(s)
sistema(s) de visualização selecionado(s).
Nota: Utilizar a EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (referência K8005) para HIER.
O período de incubação do DAB Enhancer (S196131-2) é de 5 minutos à temperatura ambiente.
Contrastação: O contraste recomendado é o EnVision™ FLEX Hematoxylin (referências K8008/K8018). Para
obter resultados ótimos, é recomendado um meio de montagem não aquoso e permanente.
Controlos: Os controlos tecidulares positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo
protocolo das amostras do doente. O tecido de controlo positivo deve incluir as amígdalas e as
células/estruturas devem apresentar padrões de reação conforme os descritos para este tecido na secção
"Características de desempenho".
Interpretação da
coloração
O padrão de coloração celular é membranoso.
Características de
desempenho
Tecidos normais:
Foi observada a presença de coloração da membrana de plasma em células imunes e em células de origem
epitelial. Foi notada coloração citoplasmática em alguns tipos de células, não tendo sido registada como
coloração positiva. A tabela 1 resume a imunorreatividade da PD-L1 no painel recomendado de tecidos
normais. Todos os tecidos foram fixados em formol e impregnados em parafina e corados com Monoclonal
Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 de acordo com as instruções deste folheto informativo. Não foram observados
resultados inesperados nos tipos de células ou tipos de tecidos testados. A coloração observada era
consistente com a literatura reportada para a expressão da PD-L1 por IHC em tecidos normais (1, 2).
Tabela 1: Resumo da reatividade de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 em tecido normal
Tipo de tecido
(n.º testados)
Amígdalas (3)
Tipo de tecido
(n.º testados)
Mama (3)
Elementos de tecido
positivos
0/3
2/3 macrófagos
Medula óssea (3)
3/3 Megacariócitos
Baço (3)
2/3 Macrófagos
Músculo, cardíaco
(3)
0/3
Células
mesoteliais (2)
0/2
Músculo,
esquelético (3)
0/3
Cerebelo (3)
0/3
Nervos, periféricos
(3)
0/3
0/3
Cérebro (3)
0/3
Ovário (3)
Colo do útero (3)
1/3 células epiteliais
Pâncreas (3)
0/3
Cólon (3)
1/3 Linfócitos
Paratiroide (3)
1/3 Epitélio glandular
Esófago (3)
Estômago (3)
Fígado (3)
Glândula salivar
(3)
(129183-001)
Elementos de tecido
positivos
3/3 Epitélio da cripta
1/3 Macrófagos
Pele (3)
0/3
0/3
Próstata (2)
2/2 epitélio
2/3 Linfócitos
Pulmão (3)
3/3 Macrófagos
1/3 glândulas gástricas
Rim (3)
1/3 Epitélio tubular
1/3 Macrófagos
Suprarrenal (3)
0/3
1/3 Hepatócitos
Testículos (3)
0/3
0/3
Timo (3)
3/3 Medula
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Hipófise (3)
1/3 Hipófise anterior
Tiroide (3)
0/3
1/3 Hipófise posterior
Útero (3)
0/3
Intestino delgado
(3)
0/3
Tecidos anormais:
Foi observada a presença de coloração da membrana de plasma em células imunes e em células de origem
epitelial. Foi notada coloração citoplasmática em alguns tipos de células, não tendo sido registada como
coloração positiva. A tabela 2 resume a imunorreatividade da PD-L1 num painel de tecidos neoplásicos.
Todos os tecidos foram fixados em formol e impregnados em parafina e corados com Monoclonal Mouse
Anti-PD-L1, Clone 22C3 de acordo com as instruções deste folheto informativo. Não foram observados
resultados inesperados nas amostras tumorais testadas. A coloração observada era consistente com a
literatura reportada para a expressão da PD-L1 por IHC em tecidos neoplásicos (1-4).
Tabela 2: Resumo da reatividade de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 em tecido neoplásico
Tipo de tumor
Adenocarcinoma
Positivo a PD-L1/total
N=159
Apêndice
0/1
Cabeça e pescoço, palato duro
0/1
Colo do útero, tipo endocervical
0/1
Cólon
0/5
Cólon, metastático para o fígado
0/1
Cólon, mucinoso
0/1
Esófago
0/1
Estômago
0/6
Estômago, mucinoso
0/1
Glândula salivar/parótida
0/2
Intestino delgado
0/2
Mama, DCIS
0/2
Mama, ductal invasivo
0/7
Mama, metastático ductal invasivo
para nódulo linfático
0/1
Ovário
0/1
Ovário, endometrioide
0/1
Ovário, mucinoso
0/1
Ovário, seroso
0/1
Pâncreas
0/2
Pâncreas, ductal
0/3
Próstata
0/5
Pulmão
1/4
Reto
0/4
Tiroide, folicular
0/1
Tiroide, folicular-papilar
0/1
Tiroide, papilar
0/3
Útero, célula clara
0/1
Útero, endométrio
0/3
Vesícula biliar
1/5
Vesícula biliar, metastático para o
pulmão
0/1
Astrocitoma
Cérebro
0/3
Carcinoma
Nasofaríngeo, NPC
0/1
Carcinoma adrenocortical
Carcinoma das células em anel de
sinete
(129183-001)
Localização
Suprarrenal
0/1
Carcinoma das células em anel de
sinete metastático para o ovário
0/1
Cólon
0/1
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Carcinoma das células escamosas
Cabeça e pescoço
0/2
Carcinoma das células escamosas
esofágicas metastático para o nódulo
linfático
0/1
Colo do útero
2/5
Esófago
0/7
Pele
0/2
Pulmão
1/2
Útero
0/1
Célula clara
Rim
0/6
Papilar
Rim
0/1
Carcinoma de célula basal
Pele
0/1
Carcinoma de célula pequena
Pulmão
0/1
Bexiga
0/6
Rim
0/1
Carcinoma das células renais
Carcinoma de células de transição
Carcinoma embrionário
Testículos
0/1
Carcinoma hepatocelular
Fígado
0/5
Carcinoma medular
Tiroide
0/1
Condrossarcoma
Osso
0/1
Cordoma
Cavidade pélvica
0/1
Ependimoma
Encéfalo
0/1
Espermatocitoma
Testículos
0/2
Feocromocitoma
Suprarrenal
0/1
Glioblastoma
Encéfalo
0/1
Hepatoblastoma
Fígado
0/1
Intersticialoma
Leiomiossarcoma
Cólon
0/1
Intestino delgado
0/1
Reto
0/1
Bexiga
0/1
Tecido mole, parede torácica
0/1
Linfoma
Célula B difusa
Nódulo linfático
0/4
Célula grande anaplásica
Nódulo linfático
0/1
Hodgkin
Nódulo linfático
2/2
Não-Hodgkin
Nódulo linfático
1/1
Encéfalo
0/1
Meduloblastoma
Melanoma
0/1
Reto
0/1
Meningioma
Encéfalo
0/2
Mesotelioma
Peritoneu
0/1
Neuroblastoma
Retroperitoneu
0/1
Neurofibroma
Tecido mole, região lombar
0/1
Osteossarcoma
Osso
0/2
Próstata
0/1
Rabdomiossarcoma
(129183-001)
Cavidade nasal
Retroperitoneu
0/1
Tecido mole, embrionário
0/1
Sarcoma sinovial
Cavidade pélvica
0/1
Seminoma
Testículos
0/2
Timoma
Mediastino
1/1
Tumor neuroectodérmico primitivo
(PNET)
Retroperitoneu
0/1
Tumores das células das ilhotas
Pâncreas
0/1
P04435PT_01/M3653/2016.03 p. 4/5
Referências
1.
2.
3.
4.
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2007(19); 7:813.
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Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol
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Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-PD-L1 antibody clone 22C3.
D29539/rev01/C22282, 2015.
Edição 03/16
(129183-001)
P04435PT_01/M3653/2016.03 p. 5/5