ESCOLA DE ENGENHARIA DE LORENA - USP CURSO ENGENHARIA BIOQUÍMICA DISCIPLINA MICROBIOLOGIA - 2015 AULA 1 - PROTEOBACTÉRIA Profa. Dra. Bernadete de Medeiros RELAÇÃO EVOLUCIONARIA ENTRE OS ORGANISMOS TEORIA ENDOSSIMBIÓTICA - Lynn Margulis Bactérias simbiontes Agrobacterium e Rhizobium NA CELULA A MITOCONDRIA É UMA ORGANELA AUTONOMA PORQUE POSSUI DNA E RIBOSSOMO Nas bactérias a membrana citoplasmática é o locus do transporte de elétrons e síntese de ATP Bacillus megaterium e Nitrococcus COLORAÇÃO DE GRAM. MÉTODO IDEALIZADO POR HANS CHRISTIAN GRAM COLORAÇÃO DE GRAM • 1884→O MÉDICO DINAMARQUÊS HANS CRISTIAN GRAM ELABOROU UM MÉTODO DE COLORAÇÃO DE CELULAS BACTERIANAS. • DEFINIU A CLASSIFICAÇÃO DAS BACTÉRIAS EM DOIS GRANDES GRUPOS DE ACORDO COM A CAPACIDADE DA PAREDE CELULAR DA BACTERIA RETER UM DOS CORANTES. • AS BACTÉRIAS FORAM CLASSIFICADAS EM GRAM POSITIVAS OU GRAM NEGATIVAS. • ATUALMENTE É O MÉTODO MAIS UTILIZADO NA BACTERIOLOGIA • ATENÇÃO: AS MICOBACTÉRIAS NÃO SE CORAM PELO MÉTODO DE GRAM. COLORAÇÃO DE GRAM BACTERIAS GRAM POSITIVAS OU GRAM NEGATIVAS PAREDES CELULAR DE BACTÉRIAS GRAM POSITIVA E GRAM NEGATIVA BIODIVERSIDADE DOS MICRORGANISMOS NO PLANETA TERRA • Aproximadamente 5x1030 bactérias aeróbias ou anaeróbias estão na Terra. A sua origem data de 3,8 bilhões de anos. • As bactérias podem viver em diferentes ecossistemas da Terra como o solo, nos oceanos, nas profundezas de rochas, no gelo do Ártico, na água fervente dos glêiseres,como as fontes hidrotermais submarinas, na pele e mucosas do corpo humano. • A quantidade de bactérias aeróbias por centímetro quadrado de pele humana é de 10 mil células. A relação entre número de células bacterianas e do corpo humano é de dez para um. • O número de bactérias em uma colher de chá de solo de jardim é cerca de 1 trilhão, com aproximadamente 10 mil espécies diferentes. • Atualmente, somente 0,1% dos microrganismos do planeta tem sido classificados. ESTROMATÓLITOS SÃO MASSAS MICROBIANAS FOSSILIZADAS FORMADAS POR CAMADAS DE PROCARIOTOS FILAMENTOSOS FORMANDO UM SEDIMENTO COMPACTO. CÂMARA DE ANAROBIOSE PARA CULTIVO DE BACTÉRIAS ANAERÓBIAS. FOTOSSÍNTESE FOTOSSÍNTESE • Cornelius Van Niel postulou que a fotossíntese das plantas e das bactérias são processos semelhantes. O que difere é o doador de hidrogênio para a assimilação redutora do dióxido de carbono: • EQUAÇÃO GERAL DA FOTOSSÍNTESE • 2 H2D + CO2 ----- (CH2O) + H2O + 2D luz carboidrato • fóton espectro da luz visível (400-700 nm) • H2D simboliza o doador de hidrogênio que pode ser: sulfeto de hidrogênio, lactato ou água. • D = a fórmula oxidada do doador de hidrogênio FOTOSSÍNTESE NÃO-OXIGÊNICA • não produz oxigênio molecular na conversão da energia luminosa em energia química. • A fotossíntese começou nas bactérias anaeróbicas estritas que habitavam a terra há 3,0 bilhões de anos. 2 LACTATO + CO2 ----- (CH2O) + H2O + 2 PIRUVATO luz carboidrato • Bactérias verde não sulfurosas, como Rhodospirillum e Rhodopseudomonas o doador de hidrogênio é uma molécula orgânica: o ácido lático ou etanol. 2 H2S + CO2 ----- (CH2O) + H2O + 2S luz carboidrato produção de enxofre origem das minas de enxofre H2S = Sulfeto de hidrogênio é um gás venenoso e mal cheiroso. • Bactérias fototróficas verdes sulfurosas • Fotossíntese na ausência do oxigênio (anaeróbios estritos) • Gêneros: Chlorobium e Chromatium • As bactérias podem excretar o S ou reter no citoplasma como enxofre basal. São classificadas como bactérias sulfurosas • FONTE HIDROTERMAL RICA EM ENXOFRE NO PARQUE NACIONAL DE YELLOWSTONE • FONTE TERMAL RICA EM ENXOFRE CONTENDO UMA DENSA POPULAÇÃO DE Sulfolobus. A ACIDEZ DO SISTEMA É DEVIDO A OXIDAÇÃO DE H2S E S0 A H2SO4 MINA DE ENXOFRE EM UBERABA - MG FOTOSSÍNTESE COM PRODUÇÃO DE OXIGÊNIO • H2O + CO2 ----- (CH2O) + O2 • luz carboidrato • plantas superiores, algas e cianobactérias que contém clorofila a • Fotólise da água.(quebra da molécula da água pela luz) 12H2O + 6CO2 C6H12O6 + 6O2 + 6H2O + energia ( G0 = + 686 Kcal.mol ) TAXONOMIA É A ARTE DE CLASSIFICAR RNA ribossomal • A árvore filogenética da vida é definida a partir da comparação entre a sequência dos nucleotídeos do RNA ribossomal. • BACTÉRIA e ARCHAEA são compostos por células procarióticas enquanto que EUKARYA são eucariotos TÉCNICAS UTILIZADAS PARA ANÁLISE DO RNA ribossomal FRAÇÃO 16S TÉCNICAS APLICADAS PARA OBTENÇÃO DE HOMOGENEIZADO CELULAR E SEPARAÇÃO POR CENTRIFUGAÇÃO DAS ORGANELAS Composição dos Ribossomos das células procarioto RNA DA MENOR SUBUNIDADE DO RIBOSSOMO PROCARIOTO ( rRNA 16S ) DOMÍNIO Archaea • Estas cores são devidas à existência de biofilmes de bactérias hipertermófílas. A área em azul contém água a 980C e as regiões que vão do verde ao laranja são onde crescem as bactérias. PROSPECÇÃO DA ARCHAEA • MICROBIÓLOGOS COLETANDO AMOSTRAS PARA ISOLAR ARCHAEA • AMOSTRAS DA FONTE HIDROTERMAL NO PARQUE YELLOWSTONE E DO GELO DO MAR ANTÁRTICO. PRESENÇA DE ARCHAEA OU EXTREMOPHILES EM DIFERENTES AMBIENTES • HALÓFILOS DE SALINAS • HIPERTERMÓFILOS ISOLADOS DE SALINAS E DOS RESÍDUOS ORIGINADOS DA EVAPORAÇÃO DAS FONTES TERMAIS. ARVORE FILOGENÉTICA DAS PRINCIPAIS LINHAGENS DE BACTÉRIA PROTEOBACTERIA CARACTERÍSTICAS DAS PROTEOBACTÉRIAS • Com base na sequência dos genes dos RNAr fração 16s, as Proteobactérias estão divididas em cinco classes; alpha, beta, gamma, delta e épsilon Proteobactérias. • São de interesse nas áreas de saúde, biotecnologia e agrícola. FILOGENIA DAS PROTEOBACTÉRIAS Características das Proteobactéria 1 • É o maior Phylum do domínio Bactéria com 384 gêneros e 1 300 espécies. • Todas as bactérias são GRAM-NEGATIVAS. • Quanto aos mecanismos de obtenção de energia são quimiolitotróficos, fototróficos e quimiorganotróficos. • Quanto a fisiologia são anaeróbio, microaerófilo e anaeróbio facultativo. • As células apresentam morfologia de cocos, bacilo, espirilo e bactérias apendiculadas. Arranjos das células com a forma de cocos e bacilos Opções metabólicas para obtenção de energia das proteobactérias. Mecanismos quimiolitotróficos, fototróficos e quimiorganotróficos PROCARIOTOS QUIMIOLITOTRÓFICOS. MANUAL DE BERGEY DE SISTEMÁTICA DE BACTÉRIA PROPORCIONA INFORMAÇÕES PARA IDENTIFICAR E CLASSIFICAR AS BACTÉRIAS Bergey´s Manual of Systematic Bacteriology Manual de Bergey e os Procariotos • O Manual de Bergey descreve as principais propriedades taxionômicas dos procariotos BACTERIA E ARCHAEA • Com informações quanto a sequência do RNA ribossomal e da taxonomia clássica. • O conjunto das duas publicações oferecem aos microbiologistas os fundamentos, os detalhes da taxonomia e da filogenia microbianas. • As duas publicações são referências para taxonomistas na caracterização de novas linhagens de procariótos isolados. Relação filogenética das α-proteobacteria. Com destaque a Agrobacterium β-proteobacteria Nitrosomonas eThiobacillus Reação quimiolitotróficas de algumas βproteobacteria: Nitrosomonas e Thiobacillus Proteobacteria e Corrosão microbiana As bactérias do gênero Thiobacillus oxida o enxofre a sulfato e como consequência há produção de ácido sulfúrico, que funciona como agente corrosivo. Algumas bactérias metabolizam sulfetos solúveis quando a concentração de H2S é inferior a 200 ppm. Essas bactérias convertem sulfatos (SO42-) para sulfetos (S2-) e sulfetos para enxofre (S) (GENTIL, 2007). As principais espécies envolvidas no processo de oxidação do enxofre são Thiobacillus ferrooxidans, Thiobacillus thioparus, Thiobacillus thiooxidans, e Thiobacillus concretivorus. São bactérias aeróbias e autotróficas e obtém energia da oxidação de compostos inorgânicos: 2 S + 3 O2 + 2 H2O 2 H2SO4 No caso de utilizar o gás sulfídrico ou ácido sulfídrico, tem-se: 2 H2S + 2 O2 H2S2O3 + H2O 5 H2S2O3 + 4 O2 + H2O 6 H2SO4 + 4 S Biolixiviação de ouro Lixiviação de minério com baixo concentração de ouro LIXIVIAÇÃO BACTERIANA DE MINERAIS γ- proteobácteria Chromatium, Eschericia, Xantomonas, Pseudomonas Sistema membranoso de γ-proteobacteria fototrófico Ectothiorhodospira γ- proteobacteria Carcterísticas de alguns generos do grupo γ-proteobacteria γ- proteobácteria: gênero Pseudomonas pigmento: pyocyanea γ- proteobacteria: Chromatium γ- proteobácteria: Chromatium γ- proteobacteria: Chromatium