SELEÇÃO DE BACTÉRIAS PROMOTORAS DO CRESCIMENTO VEGETAL COM ALTO POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO PARA O DESENVOLVIMENTO DE INOCULANTE AGRÍCOLA. Douglas Rocha Noguero (Bolsista Iniciação científica – UEL), Karina M. Lima Milani, André Luiz M. de Oliveira, email: [email protected] Universidade Estadual de Londrina/Departamento de ciências exatas/CCE Área e sub-área do conhecimento: Agronomia/Microbiologia do Solo. Palavras-chave: Sorgo; Acinetobacter; Bacillus; Pantoea Resumo A utilização de bactérias promotoras de crescimento vegetal (BPCV) em cultivos agrícolas é uma estratégia para reduzir o uso intensivo de fertilizantes químicos, em direção a uma agricultura sustentável e de baixo impacto ambiental. Essas bactérias se associam a diferentes espécies de plantas em ambientes naturais, e sua principal característica é favorecer o desenvolvimento vegetal. A melhor maneira de introduzi-la em ambientes agrícolas de interesse é por meio da aplicação de inoculantes, os quais são formulados com as estirpes bacterianas selecionadas para promover tal benefício à planta. Visado à cultura do sorgo (Sorghum bicolor), que pode ser usado para suprir a demanda de grãos principalmente na área da bovinocultura, o seguinte trabalho teve como objetivo avaliar e identificar a eficiência das estirpes de BPCV por de ensaios de inoculação. Com o presente estudo podemos relatar que as bactérias Acinetobacter1, Sphingomonas, Pantoea e Bacillus3 apresentaram os melhores parâmetros de crescimento de raiz, sendo assim essas expressam um maior potencial para o uso como inoculante agrícola. Introdução e objetivo Bactérias promotoras de crescimento vegetal (BPCV) colonizam os tecidos vegetais e influenciam direta e indiretamente o metabolismo das plantas pela produção de fitormônios, fixação biológica do nitrogênio (FBN), controle biológico de patógenos, entre outros mecanismos (KLOEPPER et al., 1980; DOBBELARE; VANDERLEYDEN; OKON, 2003). Visando a diminuição na utilização de fertilizantes químicos e buscando uma agricultura sustentável e de impacto reduzido ao meio ambiente, os mecanismos naturais de interação 1 entre as plantas cultivadas e BPCV têm importância para o desenvolvimento de formulações inoculantes comerciais. Estes inoculantes podem trazer economia para os produtores agrícolas, uma vez que sua aplicação pode reduzir o uso de fertilizantes químicos. Estima-se que os inoculantes possam gerar a economia de US$ 2 bilhões para a cultura do milho no Brasil (HUNGRIA, 2011). Ademais, a demanda de grãos no Brasil a cada ano tem aumentado, e parte dessa demanda pode ser suprida com o uso da cultura do sorgo, uma vez que o mesmo pode ser utilizado nos setores da avicultura, da suinocultura e da bovinocultura (COELHO et al., 2002). Como a interação entre BPCV e as plantas apresentam certa compatibilidade, é de grande relevância identificar os micro-organismos com maior capacidade associativa com a cultura do sorgo. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de isolados de BPCVs com a cultura do Sorgo (Sorghum bicolor) visando a identificação de estirpes de alto potencial biotecnológico para o uso como inoculante. Procedimentos metodológicos As BPCV utilizadas no trabalho foram isoladas a partir de amostras de solo rizosférico, raízes, toletes e folhas de cana-de-açúcar. A identificação dos isolados foi realizada com base no sequenciamento do gene 16S RNAr, e comparação da sequência obtida em bancos de dados públicos, como o Ribosomal Database Project (RDP; http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp). A triagem das estirpes BPCV com maior potencial biotecnológico para o sorgo (cultivar Podium, silageiro) foi realizada pela resposta de germinação na presença/ausência dos isolados. Sementes desinfestadas (imersão em etanol 70%, seguida de imersão hipoclorito de sódio 1%, e lavadas seis vezes com água deionizada esterilizada) foram inoculadas com cada isolado (1 x 106 células/semente), previamente cultivados em meio líquido Dygs sob agitação orbital de 180 rpm, 28 ºC por 24 h (RODRIGUES NETO et al., 1986). Em seguida, as sementes de sorgo foram distribuídas em papel “germitest” umedecidos para a confecção dos rolos de germinação, com 4 repetições. Sementes que não receberam inoculação foram utilizadas como controle. Todos os rolos foram mantidos em câmera de germinação com temperatura constante de 28 ºC por sete dias. Passado esse período, foram realizadas as seguintes avaliações nas raízes das plântulas: diâmetro (DMR), número máximo (NMR), profundidade (PFR), perímetro (PER), matéria seca (MSR), comprimento especifico (CER), comprimento de rede de profundidade (CRP), área superficial (ASR), comprimento médio (CMR) e volume médio (VMR). Os dados obtidos foram submetidos a analise de variância com aplicação do teste F, seguida do teste de Tukey para comparação de médias (p ≤ 0,05) empregando-se o programa estatístico R. 2 Resultados e discussão A análise dos dados obtidos na Tabela 1 indica que a bactéria Acinetobacter2 apresentou maior DMR, enquanto que o menor valor encontrado foi obtido pela inoculação com Sphingomonas. Em relação a PFR as bactérias que se destacaram foram Acinetobacter1 e Bacillus3, apresentando um aumento de 23% e 19,6% em relação ao controle, respectivamente. Quanto ao parâmetro NMR as bactérias que se mostraram superiores foram Acinetobacter1, Bacillus2, Sphingomonas e o gênero Pantoea, entretanto sem diferença significativa em relação ao controle. As bactérias Pantoea e Bacillus3 proporcionaram um aumento de 19% e 20%, respectivamente, no PER quando comparado com o controle. Levando em conta o CER apenas a bactéria Sphingomonas se mostrou superior. Quanto aos demais parâmetros avaliados como CRP, ASR, CMR e VMR não foram observadas diferenças significativa entre os tratamentos. Tabela 1. Efeito da inoculação de BPCV no desenvolvimento de raízes de Sorgo. Bactéria DMR (cm) PFR NMR (cm) PER (cm) CER (cm 2) MSR (mg) Paenibacillus 0,0582 ab 14,15 abc 2,73 ab 75,215 ab 351,22 bc 40,97 bcd Bacillus 1 0,0539 ab 14,32 abc 2,88 ab 81,283 ab 389,42 abc 69,10 a Acinetobacter 1 0,0518 ab 17,02 a 3,18 a 100,761 ab 401,62 abc 54,83 abcd Bacillus 2 0,0527 ab 15,54 abc 3,66 a 97,154 ab 387,70 abc 65,23 ab Acinetobacter 2 0,0589 a 11,54 c 2,80 ab 66,098 b 347,97 c 37,15 cd Sphingomonas 0,0496 b 12,66 abc 3,19 a 66,871 ab 459,07 a 53,43 abcd Pantoea 0,0508 ab 16,44 ab 3,56 a 416,76 abc 46,58 abcd Rhizobium 1 0,0556 ab 12,58 abc 2,80 ab 351,66 bc 36,95 cd Bacillus 3 0,0546 ab 16,93 a 3,01 ab 372,24 abc 34,70 d Rhizobium 2 0,0509 ab 12,41 bc 1,86 b 76,608 ab 410,23 abc 30,90 d Cont.Meio 0,0502 ab 13,80 abc 3,72 a 86,394 ab 455,65 ab 63,38 abc 102,819 a 67,565 ab 103,303 a Letras na coluna comparam as médias entre os tratamentos pelo teste de Tukey (5% probabilidade). DMR (diâmetro médio de raiz); PFR (profundidade de raiz); NMR (número máximo de raízes); PER (perímetro de raiz); CER (comprimento específico de raiz); MSR (massa seca da raiz). Considerando o âmbito agronômico com relação ao diâmetro da raiz, os melhores parâmetros a serem aceitos são aqueles que apresentam o menor valor, assim o gênero Sphingomonas foi o que apresentou o menor diâmetro. Em relação à profundidade, quanto maior esse valor melhor será para a planta, pois ela terá maior eficiência em absorver água e sais minerais, sendo assim 3 as bactérias que apresentaram aumento na profundidade da raiz foram Acinetobacter1 e a Bacillus3. Conclusão As bactérias Acinetobacter1, Sphingomonas, Pantoea e Bacillus3 apresentaram os melhores parâmetros de crescimento de raiz, sendo assim essas expressam um maior potencial para o uso como inoculante agrícola. Agradecimentos Agradeço ao programa de Iniciação Científica-UEL, ao meu orientador, e aos colegas de laboratório pelo incentivo e oportunidade. Referências COELHO, A.M; WAQUIL, J.M; KARAM, D; CASELA, C.R; RIBAS, P.M. Seja o doutor do seu sorgo. Potafos, arquivo agronômico -14. Encarte de informações agronômicas n.100. Dezembro de 2002. DOBBELARE, S; VANDERLEYDERN, J; OKON, Y. Plant-growth promoting effects of diazotrophs in the rhizosphere. Critical Reviews in Plant Sciences, 22:107-149, 2003. HUNGRIA, M. Inoculação com Azospirillum brasiliense: inovação em rendimento a baixo custo. Documentos Embrapa Soja, ISSN 1516-781X; n.325. Londrina: Embrapa Soja, 36p, 2011. KLOEPPER, J.W; LEONG, J; TEINTZE, M; SCHROTH, M. Enhanced plant growth by siderophores produced by plant growth-promoting rhizobacteria. Nature, London, v.286, n.14, p.885-886, 1980. NETO, R. J; MALAVOLTA JÚNIOR, V.A.; VICTOR, O. Meio simples para o isolamento e cultivo de Xanthomonas campestris pv. citri tipo B. Summa Phytopathologica, Campinas, v. 12, n. 1-2, p. 16. 1986. 4