Biotecnologia à Conjunto de técnicas que utilizam seres vivos para a obtenção de produtos para uso humano. Produção de antibióticos - fungos Produção de álcool e pães (fermentação alcoólica - leveduras) Produção de queijos (fermentação láctica - lactobacilos) Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) à Conjunto de técnicas de laboratório que permite alterar o DNA, eliminando ou acrescentando pedaços. Ferramentas: ü Enzimas de restrição (endonucleases): cortam a dupla-hélice do DNA em pontos específicos (palíndromos). à Origem: produzidas por bactérias contra a invasão de vírus. Enzima de restrição A C T A G T T G A T C A Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Ferramentas: ü DNA-ligase: enzima capaz de ligar fragmentos de DNA que possuam extremidades complementares DNA-ligase C T A G T A à Possibilidade de unir fragmentos de DNA de espécies diferentes, criando molécula de DNA recombinante. Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Ferramentas: ü Vetores: carregam o DNA recombinante. à Plasmídios (pedaços de DNA de bactérias), vírus, leveduras. ü Transcriptase reversa: enzima de retrovírus que produz DNA a partir de um molde de RNA (inverso do processo normal). à permite “achar” o DNA correspondente ao RNA-m da proteína que se pretende pesquisar. RNA –m Coletado no citoplasma Transcriptase reversa DNA AAAUUUCCCGGG TTTAAAGGGCCC AAAUUUCCCGGG TTTAAAGGGCCC AAATTTCCCGGG Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) ü PCR: aparelho que utiliza DNA polimerase e produz milhares de cópias de um fragmento de DNA (amplificação do DNA). endonucleases Ação da enzima DNA polimerase Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) ü PCR: Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) ü Eletroforese: técnica de separação de substâncias pela migração em um campo elétrico. eletrodo negativo DNA fragmentado (-) pelas enzimas de restrição mais pesado (mais longo) Fonte de energia eletrodo positivo mais leve (mais curto) Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Aplicações: Identificação de criminosos à Comparação de eletroforese de fragmentos de DNA (obtidos com a mesma endonuclease) do material encontrado na cena do crime com os dos suspeitos. Aplicações: Identificação de paternidade à Comparação de eletroforese de fragmentos de DNA (obtidos com a mesma endonuclease) da criança, da mãe e dos suspeitos. Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Aplicações: Transgênicos à Organismos que receberam genes de outras espécies. Ex. Soja Roundup Ready à produzida pela Monsanto à O gene cp4 EPSPS foi introduzido na soja e é proveniente de bactérias localizadas no solo. Esse gene codifica a enzima EPSPS, responsável pela tolerância ao glifosato, que é o princípio ativo mais comum em herbicidas utilizados na agricultura. Biotecnologia Engenharia Genética (tecnologia do DNA recombinante) Aplicações: Terapia Gênica à Inserção de genes normais, através de vetores (vírus modificados), em indivíduos portadores de doenças genéticas. Clonagem à Processo de reprodução assexuada, onde são obtidos indivíduos geneticamente iguais (microorganismo, vegetal ou animal) a partir de uma célula-mãe. à em humanos, os clones naturais são os gêmeos univitelinos. Clonagem Caso Dolly Fusão das células Ovelha doadora de células (núcleo) Células privadas de alimento tornam-se dormentes Remoção do núcleo zigoto Descargas elétricas Ovelha doadora de óvulo Óvulo não-fertilizado Clone da ovelha doadora de núcleo O DNA mitocondrial do clone é idêntico ao da ovelha doadora de óvulo Clonagem Aplicações: A) Clonagem terapêutica: obtenção de células-tronco com a finalidade de se desenvolver tecidos para tratar doenças degenerativas. Clonagem Aplicações: B) Clonagem reprodutiva: obtenção de células-tronco com a finalidade de se implantar em um útero e, assim, produzir um indivíduo clone.