Propagação, isolamento e identificação de bactérias aeróbias

Ficha de trabalho Nº 6
IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS AERÓBIAS
A identificação até ao género e espécie das bactérias observadas é possível através da
verificação das suas características enzimáticas.
Com base na observação macro e microscópica da estirpe bacteriana a identificar, e de
alguns testes rápidos (oxidase, catalase), selecionar qual o grupo de testes bioquímicos a
executar.
Esporulados
-
Bacillus spp
Gram +
não esporulados - Erysipelothrix, Listeria, Corynebacterium, etc
Bacilos
oxidase +
-
Pasteurella, Bordetella, Pseudomonas, etc.
oxidase -
-
Enterobactereaceae (E. coli, Salmonella, etc
Gram -
Aeróbios
catalase +
-
Staphylococcus, Micrococcus
catalase -
-
Streptococcus
Gram +
Cocos
Gram -
Moraxella, Branhamella, etc.
Resultado da observação microscópica:
1. Bacilos Gram-negativos.
Fazer a prova da oxidase:
MATERIAL:
- reagente da prova (N-dimetil-parafenilenodiamina a 1% em álcool isoamílico);
- placas de Petri esterilizadas;
- papel de filtro.
PROTOCOLO:
1.
2.
3.
4.
5.
Colocar um pedaço de papel de filtro dentro de uma placa de Petri.
Recolher uma colónia bem isolada, com uma pipeta de Pasteur fechada (esterilizada).
Depositar a colónia no papel de filtro.
Deitar em cima da colónia uma gota de reagente da prova.
Observar o resultado. Se a colónia adquirir uma coloração arroxeada, o resultado é
positivo.
 Oxidase (+) - o microorganismo não é uma enterobactéria
- fazer provas bioquímicas correspondentes ou API 20NE (*).
 Oxidase (-) - o microrganismo provavelmente é uma enterobactéria
- fazer provas bioquímicas para enterobactérias ou API 20E (*).
2. Cocos Gram-positivos.
Fazer o teste da catalase:
MATERIAL:
- reagente da prova (Peróxido de hidrogénio (H2O2) a 10 volumes);
- lâminas de microscópio.
PROTOCOLO:
1. Recolher uma colónia bem isolada, tendo o cuidado de não arrastar meio de cultura (os
glóbulos vermelhos do AS contêm catalase).
2. Depositar a colónia numa lâmina de microscópio.
3. Deitar, em cima da colónia, uma gota de reagente da prova.
4. Observar o resultado. Se houver libertação de bolhas de gás (O2) o resultado é positivo.
 Catalase (+) - o microorganismo pertence à família Micrococcaceae.
- Fazer provas bioquímicas adequadas ou API Staph (*).
 Catalase (-) - o microorganismo pertence ao género Streptococcaceae.
- Fazer as respectivas provas bioquímicas ou API Strept (*).
(*)
Utilizar as instruções dos APIs para os executar.
Interpretação dos APIs
A interpretação dos resultados do API pode não apresentar problema se o código obtido na
folha de resultados corresponder a um microorganismo no catálogo analítico. No entanto,
duas dificuldades podem surgir:
 o código obtido não consta do catálogo analítico. Isto pode dever-se a:
- o inóculo não estava em cultura pura (e então o conjunto de reacções bioquímicas
obtido não se referia a uma determinada bactéria, mas ao conjunto das reacções das
duas, ou mais, bactérias na mistura);
- o microorganismo isolado difere do perfil característico para a espécie e não consta
do catálogo.
 o microorganismo identificado não corresponde ao responsável pelo processo mórbido em
estudo. Isto acontece por:
- deficiente colheita (houve contaminação da amostra durante a colheita);
- contaminação durante o processamento no laboratório.
Leitura das Provas Bioquímicas
Meio de Cultura
Meio SIM
(Gelose Direita)
Meio MRVP
(Meio líquido)
usar 2 tubos
Meio de Simmons
(Gelose)
Meio de Ureia
(Meio líquido)
Fundamento
Produção de SH2
Desaminação do Triptofano em
Indol
Mobilidade
Distinção entre 2 vias
metabólicas de utilização da
glucose
Utilização do citrato como
única fonte de carbono
Degradação da ureia
Leitura
S + Côr negra do meio
Juntar Erlich-Kovacs
I + Formação de anel rosa
M + Crescimento para além
da picada
Juntar vermelho de metilo
MR + vermelho
Juntar KOH+-naftol
VP+ vermelho
+ Coloração azul do meio
(alcalinização)
+ Coloração rosa do meio
(alcalinização)
Questionário
1. O que é a prova da oxidase, e que importância tem para a
identificação de bactérias aeróbias?
2. O que é a prova da catalase, e que importância tem para a
identificação de bactérias aeróbias?
3. Na identificação bioquímica o que é que se procura explorar nas
bactérias em processo de identificação?
4. O que é o sistema API