método de extração em fase sólida com três diferentes

MÉTODO DE EXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA COM TRÊS
DIFERENTES CARTUCHOS PARA ANÁLISE DE COMPOSTOS
FENÓLICOS(1)
Daniela Teixeira Rodrigues (2), Mateus Cristofari Gayer3), Elton Luis Gasparotto
Denardin(4), Rafael Roehrs(5)
(1) Trabalho
executado com recursos do Edital FAPERGS PROBIC 2014
Estudante de graduação e bolsista da iniciação Científica, Universidade Federal do Pampa, Uruguaiana, Rio Grande
do Sul; [email protected].
(3) Estudante de graduação e bolsista da iniciação Científica, Universidade Federal do Pampa, Uruguaiana, Rio Grande
do Sul. [email protected]
(4) Orientador, Universidade Federal do Pampa. [email protected]
(5) Orientador, Universidade Federal do Pampa. [email protected]
(2)
RESUMO: A extração em fase sólida é o método de preparo de amostras que limpa e concentra o analito, nesta técnica
a seleção e otimização é importante, principalmente se tratando de extrato de plantas, devido à complexidade da matriz.
Este trabalho objetiva o desenvolvimento do método de SPE capaz de extrair compostos fenólicos de matriz aquosa
utilizando três tipos de cartuchos. Para esta técnica usamos os cartuchos StrataX, StrataC18-E e InertSeptC-18,
condicionados com 6mL de metanol, água ultrapura e água acidificada (pH3), as amostras consistiam na solução de 100
mL onde foi diluído 1,5 mL de solução padrão mista de 10 mg.L-1 dos 9 compostos fenólicos aquecida a 80ºC, a limpeza
da amostra foi feita com 3 mL de água pH3 e deixado a vácuo durante 10 minutos, os analitos foram eluidos com 3mL de
metanol e acetonitrila, levados ao rota-evaporador até a secura e resuspensos em 1,5 mL de metanol e analisados por
HPLC-DAD. O cartucho StrataX apresentou melhores recuperações, de 77% a 92%, os cartuchos StrataC18-E tiveram
boa recuperação em cinco compostos e o InertSept C18 recuperou apenas dois compostos. O cartucho StrataX se
mostrou efetivo com o método de extração, retendo e recuperando os compostos desejados.
Palavras-Chave: Extração em Fase Sólida, Preparo de Amostras, Compostos Fenólicos, Matriz Aquosa.
INTRODUÇÃO
A Extração em fase sólida (SPE) é o método mais comum de preparo de amostras, pois segundo Queiroz et
al (2000) é o que melhor efetua a limpeza e concentração dos analitos em matrizes complexas, como em
extratos de plantas, consumindo pouco tempo do analista. Nesta técnica, a seleção e otimização da extração
é importante, pois segundo Jardim (2010) se deve adotar alguns critérios para o desenvolvimento deste
processo como a estrutura química do analito, as propriedades dos solventes e a composição da matriz da
amostra, principalmente neste caso, que se trata de uma matriz natural, que apresenta uma maior
complexidade, o que ocorre na quantificação de compostos fenólicos em chás. Portanto, este trabalho tem
como objetivo o desenvolvimento de método de SPE capaz de extrair compostos fenólicos de matriz aquosa,
utilizando três cartuchos diferenciados.
METODOLOGIA
Para o desenvolvimento da técnica utilizou-se cartuchos Strata X, Strata C18-E de marca Phenomenex e
InertSep C-18 de marca GL Sciences, acoplados a um Manifold a vácuo, logo após passou-se 6 mL de
Metanol, 6 mL de água ultrapura e 6 mL de água ultrapura acidificada (pH3), para condicionar o cartucho. As
amostras consistiam em solução de 100 mL onde estava diluído 1,5 mL de solução padrão mista de 10 mg.L1 dos 9 compostos fenólicos, ácido Gálico, ácido Benzóico, ácido Cafeico, Rutina, ácido Vanílico, ácido
Siríngico, ácido Cumárico, ácido Ferúlico e Quecetina (tabela1), a temperatura ambiente e aquecidos a 80ºC.
Após a passagem da amostra, o clean-up do cartucho foi feito com 3mL de água ultrapura acidificada e
deixado a vácuo por 10 minutos. A eluição dos analitos foi feita com a percolação de 3 mL de metanol e 3 mL
de acetonitrila, levado ao rota-evaporador até a secura e foi ressuspenso em 1,5 mL de metanol, e analisado
por HPLC-DAD.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Dentre os cartuchos utilizados o que mais se mostrou efetivo foi o Strata X que obteve recuperações que
variaram de 77% a 92%, apesar de não recuperar um dos compostos (tabela 1). De acordo com a tabela 1 o
cartucho Strata C18-E recuperou cinco compostos acima de 65% e o InertSep C-18 apresentou três
recuperações acima de 60%.
Tabela 1 – Percentual de Recuperação de Cada Composto em Cada Cartucho
Compostos Fenólicos
Cartuchos
Strata X
Strata C18-E
InertSept C18
Anais do VII Salão Internacional de Ensino, Pesquisa e Extensão – Universidade Federal do Pampa
Ácido Gálico
Ácido Benzóico
Ácido Cafeico
85,5%
91,8%
77,3%
0%
2,44%
43,9%
0%
0%
8,83%
Rutina
Ácido Vanilico
Ácido Siringico
Ácido Cumárico
Ácido Ferrulico
Quercetina
78,8%
87,9%
90,8%
88,8%
84%
0%
80,6%
46,9%
91,2%
86,4%
84,4%
66,2%
83,2%
24,8%
31,6%
31,2%
70%
70,5%
Fonte: Elaborado pelo autor.
O composto que não foi recuperado com o cartucho Strata X apresentou um percentual significante de
recuperação nos cartuchos Strata C18-E e InertSept C18, isso se deve ao fato do cartucho Strata X apresentar
uma maior polaridade do que os demais, impossibilitando a retenção deste composto, auxiliando na retenção
dos demais compostos presentes na amostra.
CONCLUSÕES
O cartucho Strata X demonstrou eficiência com o método de extração, retendo em porcentagens significativas
os compostos desejados, porém a amostra analisada tratava-se de uma solução que simulava o chá de uma
planta, sendo uma amostra mais limpa sem a presença de muitos interferentes, o que faz concluir que quando
o método for submetido a um extrato natural poderá vir a necessitar de adequações devido aos interferentes
presentes na amostra.
REFERÊNCIAS
JARDIM, I. F. S. C. Extração em Fase Sólida: Fundamentos Teóricos e Novas Estratégias para Preparação de Fases
Sólidas. Scientia Chromatográfica, 2,13-25, 2010.
QUEIROZ, S. C. N.; COLLINS, C. H.; JARDIM, I. F. S. C. Métodos de Extração e/ou Concentração de Compostos
Encontrados em Fluídos Biológicos para Posterior Determinação Cromatográfica. Química Nova, 24, 68-76, 2001.
Anais do VII Salão Internacional de Ensino, Pesquisa e Extensão – Universidade Federal do Pampa