título do resumo

IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE ISOLADOS DE BACTÉRIAS
ASSOCIATIVAS OBTIDOS DE PLANTAS MEDICINAIS
Giovana Oliveira Gutuzzo, Ana Camila Munis Jardim, Elisete Pains Rodrigues,
e-mail do orientador: [email protected]
Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas
Ciências Biológicas, Genética molecular e de microrganismos.
Palavras-chave: Diversidade, 16S rDNA, bactérias endofíticas.
Resumo
Plantas nativas da flora brasileira constituem uma fonte promissora para o
estudo da biodiversidade e a bioprospecção de microrganismos com potencial
aplicação biotecnológica em diferentes áreas de interesse. Neste contexto, as
plantas medicinais são especialmente importantes para a bioprospecção de
microrganismos com potencial aplicação na prospecção de antimicrobianos e
outras biomoléculas ativas. Portanto, a planta medicinal escolhida pelo
Laboratório de Genética de Microrganismos Baccharis trimera conhecida
popularmente como carqueja, foi visada para o estudo de bactérias
associativas desta planta, contudo poucas espécies vegetais têm sido
estudadas e muito pouco se conhece a respeito da diversidade microbiana e o
potencial destas bactérias. Neste sentido, o objetivo do presente subprojeto
identificar os isolados obtidos destas plantas por meio da amplificação,
sequenciamento e análise do gene 16S rDNA.
Introdução e objetivo
1
Os microrganismos possuem uma grande adaptabilidade genética e uma
extensa diversidade metabólica, o que os torna uma importante fonte de
recursos para os avanços da biotecnologia (OLIVEIRA et al., 2006). A carqueja
é muita usada na farmacopéia popular, atribuindo-se a ela várias propriedades,
especialmente a de estimular o sistema digestivo, para combater gripes, febre,
problemas intestinais, diabetes, impotência, entre outros (Cruz, 1962). O
laboratório de Genética de Microrganismos da Universidade Estadual de
Londrina coletou plantas da espécie Baccharis trimera, conhecida como
“Carqueja” e isolou bactérias associativas da mesma. Para o melhor
aproveitamento do potencial biotecnológico destas bactérias faz-se necessário
a caracterização da diversidade genética, através das técnicas de 16S-RFLP,
possibilitando a identificação de genótipos (isolados) promissores para
diferentes aplicações, como, por exemplo, na produção de antimicrobianos de
interesse industrial. O RFLP é baseado em padrões de restrição com o uso de
enzimas selecionadas com base na sua habilidade de revelar polimorfismo nos
fragmentos de DNA analisados.
Materiais e métodos
Para o isolamento de microrganismos endofíticos foi utilizada a técnica descrita
por Matsumoto, 2014. As amostras foram submetidas a lise alcalina descrita
por Birnboim, HC & Doly, J. 1979, e submetidas a técnica de 16S-RFLP em
seguida. Para a reação de PCR foram utilizados os primers FD1 (5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’) E RD1 (5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’)
(Weissburg et al., 1991), que amplificam quase todo comprimento da região
correspondente ao gene ribossomal 16S (1500 pb). O produdo da PCR foi
analisado por eletroforese em gel de agarose. Após eletroforese, o gel foi
submetido à coloração com brometo de etídio, visualizado sob radiação
ultravioleta e fotografado no fotodocumentador (L-PIX Transilluminator Loccus
2
Biotecnologia). Para o RFLP, foram utilizadas as enzimas BsuRI (HAEIII) e
MspI.
Resultados e Discussão
Figura1: Eletroforese em gel de agarose (1%) dos produtos de amplificação da
região 16S rDNA de bactérias com os primers FD1 e RD1.
Figura2: Eletroforese em gel de agarose (2%) dos produtos de PCR obtidos
após 16S rDNA, submetidos a restrição com a enzima MspI.
3
Conclusões
Para a realização do sequenciamento é necessário obter mais resultados das
amostras coletadas da planta Baccharis trimera, portanto o trabalho segue em
continuidade nos processos de 16S-RFLP e corte com enzimas de restrição.
Agradecimentos
Ao Programa de Iniciação Científica da UEL pela concessão da bolsa de
Iniciação científica (IC-UEL), a mestranda Ana Camila Muniz e a graduanda
Jéssica Ellen de Oliveira pela cooperação no desenvolvimento do projeto. Ao
técnico Ideval Azarias de Souza pela assistência técnica e a prof. Dra. Elisete
Pains Rodrigues pela orientação.
Referências
BIRNBOIM, HC & Doly, J. A rapid alkaline extraction procedure for
screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids. Res. 7: 1513-1523.
1979.
CRUZ, G.L. Dicionário das plantas úteis do Brasil. Rio de Janeiro:
Civilização Brasileira, 1962. 177p.
MATSUMOTO, L. da S. Isolation of associative bacteria of Baccharis
dracunculifolia and diversity analysis of the isolated by 16S-RFLP and
rep-PCR fingerprinting techniques. 2014. 57p. Trabalho de Conclusão de
Curso (Especialização em Genética Aplicada) – Universidade Estadual de
Londrina, Londrina, 2014.
OLIVEIRA, V.M; SETTE, L.D; GARBOGGINI, F.F. Preservação e prospecção
de recursos microbianos. Multiciência, Campinas, n.7, p.1-19, out 2006.
WEISSBUR W. G., BARNS S. M., PELLETIER D. A., LANE D. J. 16S
ribossomal DNA amplification for phylogenetic study. J Bacteriol 173: 697-703.
1991.
4