título do resumo

IDENTIFICAÇÃO DOS GENOTIPOS G (VP7) E P (VP4) DE ROTAVÍRUS
GRUPO A EM REBANHOS BOVINOS DA REGIÃO SUDESTE DO BRASIL
Crystal Andrade Pannunzio (PIBIC/CNPq – UEL); Alice Fernandes Alfieri
(Orientadora). e-mail: [email protected]
Universidade Estadual de Londrina/ Departamento de Medicina
Veterinária Preventiva/CCA.
Área e sub-área do conhecimento: Ciências Agrárias/Medicina Veterinária.
Palavras-chave: bezerros, diarreia, rotavírus.
Resumo
A diarreia é um dos principais problemas sanitários que acometem a pecuária
bovina, destacando-se o rotavírus (RV) como agente etiológico viral. O objetivo
deste estudo foi identificar os genotipos G (VP7) e P (VP4) de RV grupo A
(RVA) em fezes diarreicas de bezerros de rebanhos de corte e leite da região
sudeste do Brasil. Quarenta e seis amostras de fezes diarreicas de bezerros
com até 60 dias de idade foram coletadas em 2014, de bezerros vacinados
(n=10), não vacinados (n=19) ou sem informação (n=17) sobre a vacinação
para controle da diarreia neonatal. As amostras foram submetidas à
eletroforese em gel de poliacrilamida e à reação em cadeia da polimerase
precedida pela transcrição reversa e o RVA foi detectado em nove (19,6%) das
amostras avaliadas. A análise das sequências G e P obtidas de oito amostras
possibilitou a identificação dos genotipos G6, G10, P[5] e P[11] e das
combinações G6P[5] (n=4), G6P[11] (n=2) e G10P[11] (n=2). Em bezerros de
corte, foram encontradas as combinações G6P[5] e G6P[11] e em bezerros de
leite G6P[11] e G10P[11]. Todas as amostras fecais provenientes de bezerros
vacinados foram negativas para RVA. Dos bezerros não vacinados, sete
(36,8%) amostras foram positivas para RVA (G6P[5] e G10P[11]). Duas
(11,7%) amostras sem informação sobre a vacinação foram positivas para RVA
(G6P[11]). Os resultados obtidos demostraram a presença do RVA em
episódios de diarreia neonatal em bezerros de corte e leite da região sudeste
do Brasil e a eficácia da vacinação, já que o RVA não foi detectado em
bezerros nascidos de matrizes vacinadas.
Introdução
A pecuária no Brasil é a atividade que ocupa a maior extensão de terras,
destacando sua importância econômica para o país. A diarreia neonatal é um
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dos principais problemas relacionados à pecuária, causando grandes perdas
econômicas. Dentre os agentes etiológicos responsáveis pela diarreia, destacase o rotavírus grupo A (RVA) devido à sua grande disseminação (ALFIERI et
al., 2006).
O RV pertence à família Reoviridae, gênero Rotavirus. Seu genoma é
constituído por 11 segmentos de RNA fita dupla segmentado, que codificam
seis proteínas estruturais (VP) e seis proteínas não estruturais (NSP). As
proteínas VP7 e VP4, encontradas na camada externa do capsídeo, são
responsáveis pelas interações iniciais do vírus com a célula hospedeira,
induzem a produção de anticorpos neutralizantes e determinam a classificação
viral em sorotipos/genotipos G e P, respectivamente.
Até o momento, 27 diferentes genotipos G e 37 genotipos P de RVA
foram descritos. As combinações de genotipos G e P mais comumente
encontradas nos rebanhos de corte e leite no Brasil são G6P[1], G6P[5],
G6P[11], G8P[1] e G10P[11] (ALFIERI et al., 2004; FREITAS et al., 2011).
A grande excreção de partículas virais, a existência de animais
assintomáticos e a resistência do vírus no meio ambiente são motivos que
aumentam a incidência do RV nos rebanhos bovinos. O controle das infecções
por RV depende do manejo adequado dos rebanhos e utilização de vacinas.
Porém, devido à diversidade de genotipos G e P existentes, é possível que
haja evasão antigênica, ocasionando diarreia mesmo em animais vacinados
(BARREIROS et al., 2004).
O estudo realizado teve como objetivo identificar os genotipos G e P
circulantes nos quadros de diarreia neonatal em bezerros de corte e leite na
região sudeste do Brasil e, além disso, verificar se há ou não diversidade de
genotipos.
Material e Métodos
Foram analisadas 46 amostras de fezes diarreicas de bezerros de corte ou leite
com até 60 dias de idade dos estados de São Paulo (n=36) e Minas Gerais
(n=10), no ano de 2014. Dez amostras de fezes eram provenientes de bezerros
vacinados; 19 de não vacinados e 17 sem informação sobre a vacinação para
controle da diarreia neonatal. As amostras pertencem ao Laboratório de
Virologia animal/DMVP/CCA da UEL e ao projeto aprovado pela Comissão de
Ética no Uso de Animais da UEL (N° 072/2013, parecer n.6371.2013.43).
A extração do ácido nucleico foi realizada de acordo com Alfieri et al.
(2006). As amostras foram submetidas à técnica de eletroforese em gel de
poliacrilamida (ss-PAGE) para verificar a presença do RVA e as amostras
positivas na ss-PAGE foram submetidas à RT-PCR para a amplificação de
1,062 pb do gene VP7 (genotipo G) e 876 pb do gene VP4 (genotipo P)
(GOUVEA et al., 1990; GENTSCH et al., 1992). Posteriormente, oito produtos
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da RT-PCR foram sequenciados utilizando ABI3500 Genetic Analyzer e as
sequências de nucleotídeos (nt) foram analisadas no BLASTn e no programa
RotaC v2.0 para identificar os genotipos.
Resultados e Discussão
Das 46 amostras de fezes analisadas, nove (19,6%) foram positivas para RVA
na ss-PAGE e na RT-PCR, corroborando a grande disseminação desse vírus
em rebanhos bovinos (ALFIERI et al., 2006). Das nove amostras positivas, oito
foram sequenciadas e a análise das sequências de nt obtidas referentes à
amplificação dos genes VP7 e VP4 possibilitou a identificação dos genotipos
G6, G10, P[5] e P[11] e das combinações G6P[5] (n=4), G6P[11] (n=2) e
G10P[11] (n=2). Os genotipos G6, G10, P[5] e P[11] já foram anteriormente
detectados na região sudeste do Brasil (São Paulo) (FREITAS et al., 2011).
A combinação G6P[5] (n=4) foi detectada somente nas amostras de
fezes de bezerros de corte, e em bezerros com esta mesma aptidão foi
detectada a combinação G6P[11]. Já nas amostras de bezerros de leite, duas
das três amostras sequenciadas apresentaram o genotipo G10P[11], sendo
que a outra apresentou o genotipo G6P[11]. A combinação G6P[5] já foi
relatada na Argentina como a mais comumente encontrada em bezerros de
corte (GARAICOECHEA et al., 2006). A combinação G10P[11] também já foi
relatada na Argentina como uma das principais combinações de genotipos G e
P circulantes em rebanhos leiteiros (BADARACCO et al., 2012).
As 10 amostras de fezes de bezerros vacinados foram negativas para
RVA em ss-PAGE, sugerindo que a diarreia neonatal nesses casos não foi
ocasionada pelo RVA. Nos animais não vacinados, sete (36,8%) das 19
amostras avaliadas foram positivas para RVA na ss-PAGE e na RT-PCR; seis
delas foram sequenciadas e identificaram as combinações G6P[5] (n=4) e
G10P[11] (n=2), corroborando resultados já descritos por Barreiros et al.
(2004), nos quais o genotipo G6P[5] é considerado um dos principais genotipos
circulantes em rebanhos não vacinados.
Outras duas (11,7%) amostras das 17 provenientes de bezerros sem
informação sobre a vacinação foram positivas e sequenciadas. A combinação
G6P[11] foi verificada nas duas amostras. Essa combinação já foi descrita em
rebanhos brasileiros (MEDEIROS et al., 2014).
Conclusões
Os resultados obtidos neste estudo demostraram a presença do RVA em
episódios de diarreia em bezerros de corte e leite da região sudeste do Brasil e
também demonstraram que os genotipos G6P[5], G6P[11] e G10P[11] foram
detectados nas amostras avaliadas e que estão circulantes nesta região do
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Brasil. Desta forma, é interessante a utilização de vacinas comerciais que
contenham esses genotipos G e P de RVA em rebanhos bovinos para o
controle das diarreias neonatais.
Referências
ALFIERI, A.F. et al. G and P genotypes of group A rotavirus strains circulating
in calves in Brazil, 1996-1999. Veterinary Microbiology, v.99, p.167-173,
2004.
ALFIERI, A.A. et al. Frequency of group A rotavirus in diarrhoeic calves in
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v.38, p.521-526, 2006.
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BARREIROS, M.A.B. et al. G and P genotypes of group A rotavirus from
diarrhoeic calves born to cows vaccinated against the NCDV (P[1], G6)
rotavirus strain. Journal of Veterinary Medicine Series B, v. 51, n. 3, p. 104109, 2004.
FREITAS, P.P.S. et al. Rotavírus bovino: fatores de risco, prevalência e
caracterização antigênica de amostras em rebanhos leiteiros no estado de São
Paulo. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.63, n.4,
p.820-827, 2011.
GARAICOECHEA, L. et al. Molecular characterization of bovine rotavirus
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GENTSCH, J.R. et al. Identification of group A rotavirus gene 4 types by
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GOUVEA, V. et al. Polymerase chain reaction amplification and typing of
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MEDEIROS, T.N.S. et al. Severe diarrhea outbreak in beef calves (Bos indicus)
caused by G6P[11], an emergent genotype of bovine rotavirus group A.
Pesquisa Veterinária Brasileira, v.34, p.717-722, 2014.
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