resumo expandido detecção de retrovírus

RESUMO
19ªEXPANDIDO
RAIB
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DETECÇÃO DE RETROVÍRUS EM NÓDULOS DE MOELA DE ROLINHA-CALDO-DE-FEIJÃO
(COLUMBINA TALPACOTI) POR MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
T. Pongiluppi1, M.H.B. Catroxo1, J.G. Bersano1, S. Petrella2
Instituto Biológico, Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal, Av. Cons. Rodrigues Alves,
1252, CEP 04014-002, São Paulo, SP, Brasil. E-mail: [email protected]
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RESUMO
A leucose linfóide é uma das principais causas de mortalidade entre aves. Este estudo relata
a presença de partículas de retrovírus em nódulos de moela de rolinha-caldo-de-feijão (Columbina
talpacoti), detectadas através da microscopia eletrônica de transmissão utilizando a técnica de
contrastação negativa. A presença de grande número de partículas típicas na amostra examinada
sugere que a ave foi acometida por leucose linfóide, causada por retrovírus.
PALAVRAS-CHAVE: Columbina talpacoti, retrovírus, microscopia eletrônica.
ABSTRACT
DETECTION OF RETROVIRUS IN GIZZARD NODULES OF A RUDDY-GROUND DOVE
(COLUMBINA TALPACOTI) UNDER TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPY. Lymphoid
leucosis is one of the principal causes of mortality in avians. This study reports the presence of
the retrovirus particles in gizzard nodules of a ruddy-ground dove (Columbina talpacoti) detected
by transmission electron microscopy using negative staining technique. The presence of the
great number of typical particles in the examined sample suggests that the avian was attacked by
lymphoid leucosis, caused by retrovirus.
KEY WORDS: Columbina talpacoti, retrovirus, electron microscopy.
INTRODUÇÃO
A leucose linfóide, mieloblastose, mielocitomatose
e leucose mielóide são neoplasias induzidas por
retrovírus do grupo leucose/sarcoma que induzem
uma variedade de tumores, principalmente no sistema hematopoético (BARNES, 1996). Os tumores de ocorrência natural são principalmente encontrados em
aves adultas, sendo a leucose linfóide a mais
comumente encontrada (FADLY, 1987) constituindo
uma das principais causas de mortalidade em aves
(PAYNE, 1998).
As aves afetadas podem apresentar nódulos em
qualquer região visceral ou cutânea do corpo (HARRISON
& HARRISON, 1986) e muitas vezes podem ser encontradas mortas sem a prévia apresentação de sinais
clínicos (WADSWORTH et al., 1981).
O desenvolvimento do vírus da leucose aviária
induz linfomas através de um processo que tem duração de 14 a 25 semanas (EWERT & DEBOER, 1988; PAYNE
& PURCHASE, 1991). As células alvo para a transformação deste vírus são as células B presentes na bursa de
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Fabricius durante o desenvolvimento embrionário
(EWERT & DEBOER, 1988). Apenas um ou dois linfomas
desenvolvidos na bursa de um indivíduo com 14 a 25
semanas de idade, são suficientes para disseminar as
células neoplásicas para órgãos viscerais como fígado e baço (FADLY, 1997).
A doença ocorre com maior freqüência em frangos
de corte, galinhas de postura, perus e codornas. Já
foram relatados casos, entretanto, em aves silvestres
das seguintes ordens: galiformes, columbiformes,
psitaciformes, ciconiiformes e passeriformes (NOBEL,
1972; PALMER & STAUBER, 1981; WADSWORTH et al., 1981;
LOUPAL, 1984; MARTINS et al., 2004).
Estudos realizados por microscopia eletrônica de
transmissão, através da técnica de contrastação negativa, demonstraram a presença de partículas virais
típicas de retrovírus em intestino delgado e pulmão
de sabiás (CATROXO et al., 2006) e em intestino delgado
e fígado de coruja (LOPES et al., 2006).
Os vírus da leucose aviária são membros do grupo
de retroviroses aviárias do grupo leucose/sarcoma. Baseando-se em propriedades das glicoproteínas do en-
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velope viral de galinhas são classificados 5 subgrupos:
A, B, C, D e E (PAYNE & PURCHASE, 1991). Um subgrupo
distinto dos grupos A e E foi isolado de galinhas, sendo classificado como um novo subgrupo, o J (PAYNE, et
al., 1991). Tais vírus são espécie–específicos e, portanto, não apresentam riscos à saúde pública (PAYNE, 1993).
De acordo com PAYNE (1987) os retrovírus aviários
podem ser endógenos ou exógenos. Os exógenos são
patogênicos e podem ser transmitidos verticalmente
ou horizontalmente; os endógenos raramente são
patogênicos e sua transmissão ocorre geneticamente.
Dentre os exógenos, são classificados os vírus de
transformação aguda e lenta. Os primeiros carreiam
oncogenes virais e tem capacidade de se transformar
rapidamente em estruturas de células in vivo e in vitro;
os de transformação lenta não carreiam oncogene viral
e, após um período de latência induzem neoplasia no
hospedeiro (PURCHASE, 1987).
Os retrovírus aviários pertencem à família
Retroviridae e ao gênero Alpharetrovirus. São esféricos
ou pleomórficos, contendo um envelope com pequenas espículas glicoprotéicas em sua superfície e medem de 80 a 100 nm de diâmetro. Possuem genoma
RNA de fita simples e sentido positivo apresentando
de 7.000 a 11.000 nucleotídeos (ICTVDB, 2006).
Este trabalho teve por objetivo descrever a detecção
de partículas de retrovírus em nódulos de moela de
Columbina talpacoti, através da técnica de contrastação
negativa para microscopia eletrônica de transmissão.
MATERIAIS E MÉTODOS
Em junho de 2005 uma rolinha (Columbina
talpacoti) foi encontrada em estado de óbito em área
arborizada do Município de São Paulo. A ave foi enviada ao Laboratório de Microscopia Eletrônica do
Instituto Biológico para pesquisa de agentes virais.
Durante a necrópsia foram encontrados nódulos localizados na moela, os quais foram colhidos e submetidos à técnica de contrastação negativa. Nesta técnica descrita por BRENNER & HORNE (1959), ALMEIDA
(1980), HAYAT & MILLER (1990) e MADELEY (1997) as
amostras são maceradas e suspensas em tampão
fosfato 0,1 M e pH 7,0. Gotas desta suspensão foram
colocadas em contato com telas de cobre previamente
cobertas com filme de colódio e carbono, contrastadas negativamente com molibdato de amônio a 2% e
pH 5,0, drenadas com papel filtro e analisadas ao
microscópio eletrônico de transmissão.
morfologia semelhante a retrovírus medindo em média 100 nm de diâmetro, esféricas, envelopadas, de
cápside icosaédrica, exibindo projeções de superfície
(Fig. 1).
Partículas típicas com estas características
morfológicas foram descritas por outros autores, em
sabiás (CATROXO et al., 2006) e em corujas (LOPES et al.,
2006).
SPENCER & GILKA (1982) observaram partículas
de retrovírus em baço de frangos infectados experimentalmente através da técnica de inclusão em resina.
Corpos de inclusão intracitoplasmáticos, esféricos,
associados a partículas incompletas e em processo
de brotamento, foram observados no miocárdio de
frangos por GILKA & SPENCER (1985, 1990) e em baço de
frangos infectados experimentalmente por SPENCER &
GILKA (1982).
MARTINS et al. (2004) encontraram alterações típicas de leucose linfóide em fragmentos de fígado e rins
de canários através de exame histopatológico.
As partículas virais foram detectadas em nódulos
localizados na moela. HAYES et al. (1992) isolaram o
vírus da reticuloendoteliose em lesões nodulares brancas localizadas no baço e na superfície da mucosa
distal do esôfago de perus silvestres (Meleagris
gallopavo).
A ave foi colhida durante um dia chuvoso precedido por uma queda brusca de temperatura. De acordo com FRIEND & FRANSON (1999) alterações ambientais
como tempestades, precipitações e mudança abrupta
de temperatura são potenciais fontes de estresse que
podem contribuir para o desencadeamento de surtos
de diversas doenças.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Durante o exame ao microscópio eletrônico de
transmissão puderam ser observadas partículas com
Fig. 1 - Partículas de retrovírus contrastadas negativamente, apresentando envelope característico com pequenas projeções (seta). Barra corresponde a: 120nm.
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A utilização da microscopia eletrônica de transmissão através da técnica de contrastação negativa
(preparação rápida) foi extremamente útil para a
detecção e caracterização das partículas de
retrovírus.
De acordo com a literatura consultada este é o primeiro relato da detecção de retrovírus em fragmentos
de órgãos de Columbina talpacoti através da
microscopia eletrônica de transmissão. Existem poucos relatos na literatura sobre a presença de vírus em
aves silvestres, principalmente, da avifauna brasileira, indicando a necessidade de estudos que possam
contribuir para o conhecimento das doenças que acometem estas aves.
CONCLUSÃO
A presença de partículas típicas de retrovírus em
nódulos da moela da rolinha-caldo-de-feijão
(Columbina talpacoti) sugere que a ave foi acometida
por leucose linfóide.
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